NTC 5732 Poder Bactericida Jabon Quirurgico

NORMA TÉCNICA NTC
COLOMBIANA 5732
2009-12-16
DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS.

ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA
LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL
TRATAMIENTO POR FROTACIÓN Y LAVADO
HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS.
MÉTODO DE ENSAYO.
REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1)
E: CHEMICAL DESINFECTANTS AND ANTISEPTICS-

QUANTITATIVE SUSPENSION TEST FOR THE
EVALUATION OF BACTERICIDAL ACTIVITY OF
PRODUCTS FOR HYGIENIC AND SURGICAL HANDRUB
AND HANDWASH USED IN HUMAN MEDICINE –TEST
METHOD AND REQUIREMENTS (PHASE 2/STEP1).
CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción idéntica

(IDT) de la EN 12054:2001.
DESCRIPTORES: investigación; desarrollo; innovación;

proyectos; requisitos; planificación;
beneficios.
I.C.S.: 11.080.20
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435
Prohibida su reproducción Editada 2009-12-24

PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.
La NTC 5732 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-12-16.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 81 Desinfectantes y productos afines para uso
hospitalario.
3M DE COLOMBIA S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.

ALKAMEDICA JONSON DIVERSEY COLOMBIA
B BRAUN MÉDICAL LAB EUFAR
BIOCONTROL LTDA. LABORATORIO SFC LTDA.
CENTRO DE MEDICINA NAVAL LAOREM INTERNACIONAL
CLÍNICA SHAIO LABORATORIO NULAB LTDA
COMPENSAR PRODUCTOS PERFEX LTDA Y FULLER
ELECTROQUÍMICA WEST, ELECTROWEST MANTENIMIENTO S.A.
GRUPO CENTRALES DE ESTERILIZACIÓN QUIRUMÉDICAS
HOSPITAL DE LA VICTORIA SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES
HOSPITAL SANTA CLARA DE LA SALUD LTDA.
INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES
MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -INVIMA DE LA SALUD LTDA.
JOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA TEJADA TRADING
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

siguientes empresas:
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA

ENFERMEROS EN CONTROL DE DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -
INFECCIONES-ACECI INVIMA-
CLÍNICA DEL CAMPESTRE JOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA
ELECTROWEST ELECTROQUÍMICA S.A.
WEST S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.
LABORATORIO SFC LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
LABORATORIOS EUFAR S.A. SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD
LAOREM INTERNATIONAL LTDA. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732
CONTENIDO
Página
1. ALCANCE ....................................................................................................................1
2. REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................1
3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2
4. REQUISITOS................................................................................................................2
4.1 GENERALIDADES.......................................................................................................2
4.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS.............................................................................3
4.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS...............................................................................3
4.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS ........................................................................3
4.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS ..........................................................................3
4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVDO HIGIÉNICO DE MANOS......................
5. MÉTODO DE ENSAYO
5.1 PRINCIPIO....................................................................................................................3
5.2 MATERIALES Y REACTIVOS .....................................................................................4
5.3 EQUIPOS Y MATERIALES DE VIDRIO ......................................................................7
5.4 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES

PARA ENSAYO............................................................................................................8
5.5 PROCEDIMIENTO......................................................................................................10
5.6 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS .........................................................14
5.7 CONCLUSIÓN............................................................................................................17
5.8 INFORME DE ENSAYO .............................................................................................18

Página
ANEXOS
ANEXO A (Normativo)
MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE
DILUCIÓN-NEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN PORM MEMBRANA .................................20
ANEXO B (Informativo)
NEUTRALIZADORES ............................................................................................................26
ANEXO C (Informativo)
LÍQUIDOS DE ENJUAGUE ...................................................................................................27
ANEXO D (Informativo)
EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO..............................................................28
ANEXO E (Informativo)
CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES
DE CULTIVO ..........................................................................................................................30
ANEXO F (Informativo)
INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS
EUROPEAS SOBRE LOS DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS..................31
Tabla 1. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS.

ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA LA EVALUACIÓN
DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL TRATAMIENTO
POR FRICCION Y LAVADO HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS.
MÉTODO DE ENSAYO REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1)
1. ALCANCE
Esta norma establece un método de ensayo y los requisitos para determinar la actividad
bactericida mínima de productos para fricción (sin agua) y lavado de las manos, para el
tratamiento poscontaminación de las manos, o para la desinfección quirúrgica de las manos.
Campo de aplicación: se emplea en las áreas y situaciones donde se indica médicamente la

desinfección de las manos. Tales indicaciones se presentan en el cuidado del paciente, por
ejemplo:
- en hospitales, en instalaciones médicas comunitarias y en instituciones odontológicas
- en clínicas de escuelas, jardines infantiles y hogares geriátricos.
Es aplicable en los sitios de trabajo y del hogar. Igualmente se pueden incluir servicios como
lavanderías y cocinas que suministran productos directamente a los pacientes.
No es posible determinar la actividad bactericida del producto para FRICCION de manos no

diluido usando esta norma , dado que siempre se produce algún grado de dilución al añadir el
inóculo. Por lo tanto, no es posible el ensayo confiable de productos que contienen 5% de agua
o menos.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo
referenciado. (incluida cualquier corrección).
NTC 5150, Antisépticos y desinfectantes químicos. Actividad bactericida básica. Método de

ensayo y requisitos (fase 1). (EN 1040)
NTC 5593, Antisépticos y desinfectantes químicos. Conservación de las cepas microbianas

utilizadas para la determinación de la actividad bactericida y fungicida. (EN 12353)
1 de 33
EN 1499, Chemical Disinfectants and Antiseptics - Hygienic Handwash - Test Method and
Requirements (phase 2/step 2).
EN 1500, Chemical Disinfectants and Antiseptics - Hygienic Handrub - Test Method and
Requirements (phase 2/step 2).
prEN 12791, Chemical disinfectants and antiseptics- Surgical hand disinfectants - Test method
and requirements (phase 2/step 2).
3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES
Para los propósitos de esta norma, se aplican los siguientes términos y definiciones.
3.1 Producto (para desinfección y/o antisepsia química). Agente o formulación química que
se utiliza como desinfectante o antiséptico químico (NTC 5150 ).
3.2 Bactericida. Producto que destruye las bacterias vegetativas bajo condiciones definidas.
3.3 Actividad bactericida (en esta norma). Capacidad de un producto para reducir la cantidad
de células bacterianas viables de los organismos pertinentes bajo las condiciones definidas por
esta norma (en concordancia con la NTC 5150).
3.4 Fricción higiénica de manos. Procedimiento poscontaminación que implica la frotación

de las manos, sin adición de agua, utilizando un producto bactericida dirigido contra
microorganismos transitorios para evitar su transmisión, sin tener en cuenta la flora residente
en la piel ( UNE EN 1500).
3.5 Lavado higiénico de manos Procedimiento poscontaminación que implica el lavado de las
manos con agua, utilizando un producto bactericida dirigido contra microorganismos transitorios
para evitar su transmisión, sin tener en cuenta la flora residente en la piel (EN 1499)
3.6 Fricción quirúrgica de manos. Procedimiento prequirúrgico que implica la frotación de las
manos sin la adición de agua, utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la
flora microbiana de las manos para evitar la transmisión de los microorganismos en
procedimientos invasivos.
3.7 Lavado quirúrgico de manos. Procedimiento prequirúrgico que implica el lavado de las
manos con agua, utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la flora
microbiana de las manos con el fin de evitar la transmisión de los microorganismos durante
procedimientos invasivos .
4. REQUISITOS
4.1 GENERALIDADES
El producto, cuando se somete a ensayo según lo indicado en el numeral 5, debe demostrar

una reducción en los recuentos viables tal como se indica en los numerales 4.2, 4.3, 4.4 o 4.5
para cada uno de los siguientes organismos de ensayo: Eschericia coli, Pseudomonas
aeruginosa, Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus.
2
Este método corresponde a un ensayo de fase 2/etapa 1, por lo cual es necesario un ensayo
adicional de fase 2/etapa 2 (EN 1499: año, UNE- EN 1500) antes de que se pueda cumplir la
declaración del rótulo que indica desinfectante quirúrgico de manos de fricción higiénica de
manos, o de lavado higiénico de manos.
El producto debe cumplir con los requisitos que se indican en los numerales 4.2 a 4.6 de
acuerdo con su aplicación.
4.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS
El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 1 min ± 5 s.

Además, si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min, el producto debe
demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s.
4.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS

demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s.
4.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS

Además, si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min, el producto debe satisfacer el
requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1 min ± 5 s, 2 min ±
10 s, 3 min ± 10 s, 4 min ± 10 s. El tiempo adecuado de contacto no debe ser superior al tiempo de
exposición recomendado por el fabricante.
4.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS

satisfacer el requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1
min ± 5 s, 2 min ± 10 s, 3 min ± 10 s, 4 min ± 10 s. El tiempo adecuado de contacto no debe ser
superior al tiempo de exposición recomendado por el fabricante.
4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS
Los productos que cumplen con los requisitos según lo indicado en los numerales 4.2 o 4.3 y
se van a utilizar adicionalmente para la desinfección quirúrgica de manos, no requieren de
ensayo adicional en la fase 2/etapa 1 (para el ensayo de fase 2/etapa 1, véase Anexo F).
Nota. Los requisitos de los numerales 4.4 y 4.5 se aplican a productos utilizados únicamente
para desinfección quirúrgica de manos y que no se han sometido a ensayo previamente según
lo indicado en los numerales 4.2 o 4.3.
5. MÉTODO DE ENSAYO
5.1 PRINCIPIO
Una suspensión de bacterias para el ensayo se adiciona a una muestra preparada del producto
que se somete a prueba. Únicamente para productos de lavado de manos, la muestra se
prepara en agua dura (véase el numeral 5.2.2.7). La mezcla se conserva a una temperatura de
3
20 °C. A intervalos de tiempo especificados, incluyendo todos los períodos indicados en las
instrucciones del fabricante, pero siempre en los intervalos establecidos en la Tabla 1, se toma
una porción alícuota; la acción bactericida de esta porción se neutraliza o suprime
inmediatamente mediante un método validado. El método de elección es el de dilución-
neutralización. Sin embargo, si no se puede establecer un medio de neutralización adecuado,
se utiliza la filtración por membrana. Se determina la cantidad de bacterias sobrevivientes.
La cantidad de bacterias en la suspensión de ensayo también se determina y se calcula la

reducción en el recuento viable.
Tabla 1. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto
Tiempo de contacto
Procedimiento recomendado por el Tiempo de contacto “t” usado en el ensayo
fabricante
Fricción higiénica de 1 minuto 1 min ± 5 s
manos < 1 minuto 1 min ± 5 sy 30 s ± 5 s
Lavado higiénico de 1 minuto 1 min ± 5 s
manos < 1 minuto 1 min ± 5 s y 30 s ± 5 s
Fricción quirúrgica de 5 minuto 5 min ± 10 s
manos < 5 minuto 5 min ± 10 s y opcional:
1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s, 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s
Lavado quirúrgico de 5 minuto 5 min ± 10 s
manos < 5 minuto 5 min ± 10 s y opcional:
1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s, 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s
El ensayo se lleva a cabo utilizando Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus

hirae y Staphylococcus aureus.
5.2 MATERIALES Y REACTIVOS
5.2.1 Organismos de ensayo
La actividad bactericida se debe evaluar utilizando cuatro cepas. Se deben utilizar las
siguientes cepas:
Escherichia coli (K12) NCTC1) 10538
Pseudomonas aeruginosa ATCC1) 15442
Staphylococcus aureus ATCC1) 6538
Enterococcus hirae ATCC1) 10541

1
5.2.2 Medios de cultivo y reactivos
5.2.2.1 Generalidades
1)
NCTC 10538, ATCC 15442, ATCC 6538 y ATCC 10541 son los números de colección de la cepas
suministradas por la colección nacional de cultivos tipo y la colección estadounidense de cultivos tipo. Esta
información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación
por parte de ICONTEC del producto mencionado. Las cepas correspondientes suministradas por otras
colecciones se pueden utilizar si se puede demostrar que producen los mismos resultados.
1
NOTA Véase el Anexo E para el número de cepa correspondiente en algunas otras colecciones de
cultivos.
4
Los reactivos deben tener grado analítico y deben ser apropiados para los propósitos
microbiológicos.
NOTA Para mejorar la reproducibilidad, se recomienda la utilización de material deshidratado disponible en el

comercio para la preparación de los medios de cultivo. Se recomienda cumplir rigurosamente las instrucciones del
fabricante relacionadas con la preparación de estos productos.
5.2.2.2 Agua
El agua debe estar libre de sustancias que sean tóxicas o inhibitorias para las bacterias. El
agua debe estar destilada en vidrio recientemente y no desmineralizada. Esterilice en autoclave
(véase el numeral 5.3.1).
NOTA 1 Si el agua se esteriliza durante la esterilización de los reactivos, este paso no es necesario.
NOTA 2 Si el agua destilada con calidad adecuada no está disponible, se puede utilizar agua para preparaciones
inyectables (véase la Farmacopea Oficial).
5.2.2.3 Agar tripticasa de Soya (TSA)
Para la conservación de las cepas bacterianas y la realización de los recuentos viables.
Triptona, digerido pancreático de caseína 15,0 g
Peptona de soya, digerido papaínico de harina de soya 5,0 g
NaCl 5,0 g
Agar 15,0 g
Agua (5.2.2.2) 1 000,0 ml
Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3.1). Después de la esterilización, el pH del medio

debe ser equivalente a 7,2 +/- 0,2 cuando se mide a 20 °C.
5.2.2.4 Diluyente
Solución de cloruro de sodio y triptona:
Triptona, digerido pancreático de caseína 1,0 g
NaCl 8,5 g
Agua (véase el numeral 5.2.2.2) 1 000,0 ml
Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3.1). Después de la esterilización, el pH del medio

debe ser equivalente a 7,0 +/- 0,2 cuando se mide a 20 °C.
5.2.2.5 Neutralizador
El neutralizador se debe validar para el producto que se somete a ensayo, de acuerdo con lo
indicado en el Anexo A. El neutralizador debe estar estéril.
NOTA En el Anexo B se presenta información sobre los neutralizadores adecuados para algunas categorías de
productos.
5
5.2.2.6 Solución de enjuague (para filtración por membrana)
La solución debe ser estéril, compatible con la membrana filtrante y con capacidad para la
filtración a través de la membrana, bajo las condiciones de ensayo que se describen en el
Anexo A.
NOTA En el Anexo C se presenta información sobre las soluciones de enjuague adecuadas para algunas
categorías de productos.
5.2.2.7 Agua dura para la dilución del producto de lavado de manos
El agua dura para la dilución de los productos se debe preparar de la siguiente manera:
Prepare:
- Solución A:
Disuelva 19,84 g de cloruro de magnesio anhidro (MgCl2) o un cloruro de magnesio

hidratado equivalente y 46,24 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) o un cloruro de
calcio hidratado equivalente en agua (véase el numeral 5.2.2.2) y diluya hasta completar
1 000 ml.
Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3.1). Almacene la solución a una

temperatura entre 2°C y 8°C durante un período no superior a un mes.
- Solución B:
Disuelva 35,02 g de bicarbonato de sodio (NaHCO3) en agua (véase el numeral 5.2.2.2)

y diluya hasta completar 1 000 ml. Esterilice mediante filtración por membrana (véase el
numeral 5.3.2.7). Almacene la solución a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante un
período no superior a una semana.
- Agua dura:
Para la preparación de 1 litro, vierta por lo menos 600 ml de agua (véase el numeral
5.2.2.2) en un matraz volumétrico de 1 000 ml (véase el numeral 5.3.2.12) y adicione 6,0
ml de la solución A, luego 8,0 ml de la solución B.
Mezcle y diluya hasta completar 1 000 ml con agua (véase el numeral 5.2.2.2).
El pH del agua dura debe ser de 7,0 +/- 0,2.
Si es necesario, ajuste el pH utilizando una solución de aproximadamente 40 g/l (cerca

de 1 mol/l) de hidróxido de sodio (NaOH) o aproximadamente 36,5 g/l (cerca de 1 mol/l)
de ácido clorhídrico (HCl).
El agua dura debe ser de preparación reciente bajo condiciones asépticas y se debe utilizar en
un período de 12 h.
NOTA Cuando se preparan las soluciones de ensayo del producto (véase el numeral 5.4.2), la adición del producto
a esta agua dura produce una dureza final del agua diferente en cada uno de los tubos de ensayo.
En todo caso la dureza final es inferior a 300 mg/kg de carbonato de calcio (CaCO3) en el tubo
de ensayo.
6
5.3 EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO
5.3.1 Generalidades
Esterilice el material de vidrio y las partes del equipo que tendrán contacto con el medio de
cultivo y los reactivos o la muestra, excepto aquellos que se suministran estériles, mediante
uno de los siguientes métodos:
a) en un autoclave (véase el numeral 5.3.2.1) conservando una temperatura de 121+30 °C

durante un tiempo continuo mínimo de 15 min;
b) en un esterilizador de calor seco (véase el numeral 5.3.2.1) conservando una

temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min, 170 °C para un
tiempo continuo mínimo de 1 h o 160 °C para un tiempo continuo mínimo de 2 h.
5.3.2 Equipo microbiológico de laboratorio común2) y, en particular, el siguiente:
5.3.2.1 Equipos para esterilización
a) Para esterilización con calor húmedo, un autoclave con capacidad para conservar una
temperatura de 121+30 °C para un tiempo continuo mínimo de 15 min;
b) Para esterilización con calor seco, un horno de aire caliente con capacidad para
conservar una temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min,
170 °C para un tiempo continuo mínimo de 1 hora o 160 °C para un tiempo continuo
mínimo de 2 h.
5.3.2.2 Baños de agua o de maría, con capacidad para controlar la temperatura a 20 °C ±

1 °C y 45 °C ± 1 °C.2
5.3.2.3 Incubadora, con capacidad para controlar la temperatura a 36 °C ± 1 °C o 37 °C ± 1 °C.

Se puede utilizar una incubadora a 37 °C ± 1 °C si no se dispone de una incubadora a 36 °C ±
1 °C.
5.3.2.4 Medidor de pH con una exactitud de calibración de ± 0,1 unidades de pH a 25 °C.
5.3.2.5 Cronómetro
5.3.2.6 Agitador (agitador electromecánico, como el mezclador Vortex ®.3
5.3.2.7 Equipo para filtración por membrana construido con un material compatible con el
producto que se somete a ensayo, con un porta filtro de volumen utilizable mínimo de 50 ml y
adecuado para utilizar con filtros de diámetro entre 47 mm y 50 mm, con tamaño de poro 0,45 μm
(para el método de filtración por membrana) y tamaño de poro de 0,22 μm (para esterilización por
filtración).
La fuente de vacío utilizada debe suministrar una tasa de flujo de filtración uniforme. Con el fin
de obtener una distribución uniforme de los microorganismos sobre la membrana en el método
2)
El equipo desechable es una alternativa aceptable para el material de vidrio reusable.
3
VORTEX ® es un ejemplo de un producto adecuado que se encuentra en el comercio. Esta información se
suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este
producto por parte de ICONTEC.
7
de ensayo de filtración por membrana y para evitar una filtración excesivamente prolongada, el
dispositivo se debe ajustar de manera tal que se obtenga la filtración de 100 ml del líquido de
enjuague en un período entre 20 s y 40 s.
5.3.2.8 Recipiente: tubos de ensayo, frascos o matraces de cultivo con capacidad adecuada.
5.3.2.9 Pipetas graduadas, con capacidades nominales de 10 ml, 1 ml y 0,1 ml, se pueden
utilizar pipetas calibradas automáticas.
5.3.2.10 Cajas de Petri que tengan un diámetro entre 90 mm y 100 mm.
NOTA Para el método de recuento de caja, por el método de dispersión, se pueden utilizar cajas de tamaño
superior (140 mm).
5.3.2.11 Perlas de vidrio con diámetro entre 3 mm y 4 mm.
5.3.2.12 Matraces volumétricos calibrados a 20 °C.
5.3.2.13 Agitador mecánico
5.4 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES PARA ENSAYO
5.4.1 Suspensiones bacterianas
5.4.1.1 Cultivos iniciales de los microorganismos de ensayo
Los cultivos iniciales se deben conservar de acuerdo con los requisitos de la NTC 5593:2008
5.4.1.2 Cultivo de trabajo de los microorganismos
Con el fin de preparar el cultivo de trabajo de las cepas (véase el numeral 5.2.1), realice un
subcultivo a partir del cultivo inicial (véase el numeral 5.4.1.1) mediante trazos en los cultivos
inclinados de TSA (véase el numeral 5.2.2.3) e incube (véase el numeral 5.3.2.3).
Después de un período entre 18 h y 24 h, prepare de la misma manera un segundo subcultivo

a partir del primero y lleve a incubación durante 18 h a 24 h. A partir de este segundo
subcultivo se puede producir de la misma manera un tercer subcultivo.
Nota. El segundo y/o tercer subcultivos representan el cultivo de trabajo.
Si no es posible preparar el segundo subcultivo en un día particular, se puede utilizar un

subcultivo de 48 h para el cultivo posterior, siempre que el subcultivo se haya conservado en
una incubadora durante un periodo de 48 h. En estas circunstancias, prepare un cultivo de 24 h
adicionales después del procesamiento. No tome un cuarto subcultivo.
5.4.1.3 Suspensión bacteriana para ensayo
Tome 10 ml del diluyente (véase el numeral 5.2.2.4) y colóquelo en un matraz de 100 ml con
cinco gramos de perlas de vidrio (véase el numeral 5.3.2.11). Tome los cultivos de trabajo
(véase el numeral 5.4.1.2) y transfiera con el asa redonda las células hacia el diluyente. Las
células se deben suspender en el diluyente, sumergiendo el asa en éste y frotándola contra la
pared lateral del matraz para desprender las células. Agite el matraz durante 3 min utilizando
un agitador mecánico (véase el numeral 5.3.2.13). Aspire la suspensión de las perlas de
vidrio y transfiera a otro tubo. Ajuste el número de células en la suspensiones hasta un
8
valor entre 1,5 x 108 ufc/ml y 5 x 108 ufc / ml 4 utilizando el diluyente, estimando la cantidad de
unidades mediante algún método adecuado. Conserve esta suspensión en el baño de agua o
maría a 20 °C ± 1 °C y utilice dentro de las 2 h siguientes.
Prepare cuatro suspensiones bacterianas para ensayo, una utilizando Escherichia coli, una con
Pseudomonas aeruginosa, otra con Enterococcus hirae y otra con Staphylococcus aureus.
Para el recuento de la suspensión bacteriana para ensayo, prepare diluciones de 10-6 y 10-7 de
la suspensión de ensayo utilizando el diluyente (véase el numeral 5.2.2.4) y mezcle (véase el
numeral 5.3.2.6). Tome una muestra de 1,0 ml de cada dilución en duplicado e inocule usando
la técnica de siembra en caja o de dispersión en caja. (Siembra en superficie)
Si se utiliza la técnica de siembra en caja, (siembra en profundidad) vierta con pipeta cada
muestra de 1,0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5.3.2.10) independientes y adicione 12 ml a
15 ml de TSA (véase el numeral 5.2.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.
Si se utiliza la técnica de dispersión en caja, disperse cada muestra de 1,0 ml sobre una
cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.2.2.3).
5.4.1.4 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo
Incube las cajas a temperatura de 36 ºC ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.3.2.3.)

durante 24 h. Deseche las cajas que, por cualquier razón, no se puedan contar. Realice el
recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.
Incube las cajas durante 24 h adicionales. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan
colonias bien separadas.
Vuelva a contar las cajas restantes. Determine el mayor número de colonias para cada muestra
de 1,0 ml. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión para ensayo (N) utilizando el método
que se indica en el numeral 5.6.1.1.
5.4.2 Solución del producto para ensayo
5.4.2.1 Soluciones de ensayo para fricción de manos
El producto para fricción de manos se utiliza sin diluir como solución del producto para ensayo.
Se deben registrar los detalles de las muestras de producto tal como se reciben.
5.4.2.2 Solución de ensayo para lavado de manos
Utilizando agua dura (véase el numeral 5.2.2.7.) como diluyente, prepare una dilución al 55 %
(V/V) de la preparación del producto de lavado de manos para ensayo.
La solución del producto para ensayo debe ser de preparación reciente y se debe utilizar
durante un día de trabajo máximo (o menos si tiene baja estabilidad).
4
ufc/ml = unidades formadoras de colonias por mililitro
9
5.5 PROCEDIMIENTO
5.5.1 Generalidades
El método de elección es el de dilución-neutralización. Para determinar un neutralizador

adecuado, se debe adoptar el siguiente procedimiento. La validación del método de dilución-
neutralización (véase el literal A.4.1) se deben llevar a cabo utilizando un neutralizador
adecuado, seleccionado de acuerdo con la experiencia del laboratorio y los datos publicados.
Si este neutralizador no es válido, repita el ensayo de validación utilizando un neutralizador

alterno que contenga una combinación de: polisorbato 80 (30 g/l), saponina (30 g/l), L-histidina
(1 g/l), lecitina (3 g/l), tiosulfato de sodio (5 g/l) bien sea en diluyente (véase el numeral 5.2.2.4)
o en 0,002 5 mol/l de solución amortiguadora de fosfatos. Si ambos neutralizadores no son
válidos, se puede utilizar el método de filtración por membrana en lugar del método de dilución-
neutralización.
5.5.2 Método de dilución-neutralización
Antes del ensayo, equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo, suspensión
bacteriana para ensayo, neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20°C ± 1°C utilizando el
baño de agua o maría (véase el numeral 5.3.2.2). Verifique que la temperatura de los reactivos
se estabilice en 20 °C ± 1 °C.
5.5.2.2 Procedimiento de ensayo para determinar la actividad bactericida de los

productos para fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos,
usados para el tratamiento poscontaminación de las manos
Vierta con pipeta 9,0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el
numeral 5.4.2.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5.4.2.2)
en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Añada 1,0 ml de una de las
suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.4.1.3). Ponga en marcha
inmediatamente el cronómetro, mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría
controlado a 20 °C ± 1.
NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para
evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.
La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s. Si el

fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min, el producto también se debe ensayar en
un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s.
Mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado.
En el tiempo de contacto seleccionado, vierta con pipeta 1,0 ml de la mezcla para ensayo en un
tubo que contenga 8,0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.2.2.5) y 1,0 ml de agua (véase
el numeral 5.2.2.2). Mezcle y coloque en el baño de agua o maría controlado a 20 °C ± 1 °C.
a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización
de 1 min ± 5 s, prepare una dilución de 10-1 de la mezcla neutralizada en el diluyente
(véase el numeral 5.2.2.4). Tome una muestra de 1,0 ml de la mezcla y su dilución de
10-1 en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en caja o dispersión en caja.
b) Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización
de 1 min ± 5 s, prepare una dilución de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en el
10
diluyente (véase el numeral 5.2.2.4). Tome una muestra de 1,0 ml de las diluciones de
10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en duplicado e inocule utilizando la técnica de
siembra en caja o dispersión en caja ( siembra en superficie)
Si se utiliza la técnica de siembra en caja (siembra en profundidad), vierta con pipeta cada
muestra de 1,0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5.3.2.10) independientes y adicione 12 ml a
15 ml de TSA fundido (véase el numeral 5.2.2.3) y enfriado a 45 °C ± 1 °C.
Si se utiliza la técnica de dispersión en caja, disperse cada muestra de 1,0 ml sobre una
Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo.
Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.3.2.3.)

recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.
colonias bien separadas. Vuelva a contar las cajas restantes. Determine el mayor número de
colonias para cada caja. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando
el método que se indica en el numeral 5.6.1.2. Para calcular el recuento viable de la mezcla de
ensayo, el factor de dilución es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de
manos).
5.5.2.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para

fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos
Vierta con pipeta 9,0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el
numeral 5.4.2.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el numeral
5.4.2.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Añada 1,0 ml de una de las
inmediatamente el cronómetro, mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) y coloque el recipiente en un
baño de agua o maría (véase numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C.
NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución
para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.

fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min, el producto también se debe ensayar para
un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s, 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.
Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase numeral 5.3.2.6). En
el tiempo de contacto seleccionado, vierta con pipeta 1,0 ml de la mezcla para ensayo en un
tubo que contenga 8,0 ml de neutralizador (véase numeral 5.2.2.5) y 1,0 ml de agua (véase el
numeral 5.2.2.2). Mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) y coloque en el baño de agua o maría
(véase el numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C.
a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización
de 5 min ± 10 s, prepare una serie de diluciones decimales de la mezcla neutralizada
en el diluyente (véase el numeral 5.2.2.4). Tome una muestra de 1,0 ml de la mezcla y
su dilución de 10-1 por duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en
profundidad en caja o siembra en superficie.
11
b) Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización
de 5 min ± 10 s, prepare una serie de diluciones de decimales de a mezcla neutralizada
en el diluyente (véase el numeral 5.2.2.4). Tome una muestra de 1,0 ml de las
diluciones de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada por duplicado e inocule utilizando la
técnica de siembra en profundidad en caja o siembra en superficie.
Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad, vierta con pipeta cada muestra de 1,0 ml en
cajas de Petri (véase el numeral 5.3.2.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA
fundido (véase el numeral 5.2.2.3) y enfriado a temperatura de 45°C ± 1°C.
Si se utiliza la técnica de siembra en superficie, disperse cada muestra de 1,0 ml sobre una
Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.3.2.3)

recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.
el método que se indica en el numeral 5.6.1.2. Para calcular el recuento viable de la mezcla de
ensayo, el factor de diluciones es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de
manos).
5.5.3 Método de filtración por membrana
Antes del ensayo, lleve todos los reactivos (solución del producto para ensayo, suspensión
bacteriana para ensayo, solución de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C
utilizando el baño de agua o maría (véase el numeral 5.3.2.2) y controle la temperatura a 20 °C
± 1 °C. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.
5.5.3.2 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para

fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos
Vierta con pipeta 9,0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el
numeral 5.4.2.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5.4.2.2)
en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Añada 1,0 ml de una de las
inmediatamente el cronómetro, mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría
controlado a 20 °C.
NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para

fabricante recomienda una exposición inferior a 1 minuto, el producto también se debe ensayar
en un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s.
Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5.3.2.6).
En el tiempo de contacto seleccionado, vierta con pipeta dos muestras de 1,0 ml de la mezcla
12
para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana
independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de la solución de
enjuague (véase el numeral 5.2.2.6). Filtre inmediatamente. El tiempo necesario para transferir
y filtrar no debería exceder 1 min. Si es superior a 1 min, este tiempo se debe registrar en el
informe del ensayo. Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de
enjuague (véase el numeral 5.2.2.6). Luego transfiera las membranas sobre la superficie de
dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.3.2.10).
NOTA 2 Al realizar la transferencia, se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en
la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y
la superficie de agar.
5.5.3.3 Recuento de la mezcla de ensayo
Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h (véase el

numeral 5.3.2.3). Deseche las cajas que, por cualquier razón, no se puedan contar.
Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de
colonias en cada una. Incube las cajas durante 24 h adicionales. No vuelva a contar las
cajas que ya no presentan colonias bien separadas. Vuelva a contar las cajas restantes.
Determine el mayor número de colonias para cada caja. Calcule el número de ufc/ml en la
mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.6.1.2.
5.5.3.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos de

fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos
Vierta con pipeta 9,0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el
numeral 5.4.2.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el
numeral 5.4.2.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Añada 1,0 ml de
una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.4.1.3). Ponga en
marcha inmediatamente el cronómetro, mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) y coloque el
recipiente en un baño de agua o maría (véase el numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C.
NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para

fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min, el producto también se debe ensayar
para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s, 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.
Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5.3.2.6).
En el tiempo de contacto seleccionado, vierta con pipeta dos muestras de 1,0 ml de la mezcla
para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana
independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de solución de enjuague
(véase el numeral 5.2.2.6). Filtre inmediatamente. El tiempo necesario para transferir y filtrar no
debería exceder 1 minuto. Si es superior a 1 minuto, este tiempo se debe registrar en el informe
del ensayo. Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de
enjuague (véase el numeral 5.2.2.6). Luego transfiera las membranas sobre la superficie de
dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.3.2.10).
NOTA 2 Al realizar la transferencia, se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en
la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y
la superficie de agar.
13
5.5.3.5 Recuento de la mezcla de ensayo
Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.3.2.3)

recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.
el método que se indica en el numeral 5.6.1.2.
5.5.4 Validación del método de dilución-neutralización y del método de filtración por

membrana
Los métodos de dilución-neutralización y de filtración por membrana se deben validar para

cada uno de los de los cuatro microorganismos de ensayo (véase el Anexo E), según se indica
en el Anexo A.
El ensayo de validación (véase el Anexo A) también se debe realizar al mismo tiempo que el
procedimiento (véase el numeral 5.5) utilizando las mismas condiciones (suspensiones bacterianas
para ensayo, solución del producto para ensayo, agua dura si se utiliza y neutralizador o solución
de enjuague) usadas en el ensayo (Véanse los numerales 5.5.2 y 5.5.3).
5.6 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS
5.6.1 Cálculo de los recuentos viables (ufc/ml)
5.6.1.1 Suspensión bacteriana para ensayo
Los recuentos viables de la suspensión bacteriana para ensayo (véase el numeral 5.4.1.4) se
deben calcular según los principios que se describen a continuación:
a) Se deben tener en cuenta únicamente los recuentos de colonias inferiores a 300

ufc/caja para el cálculo de los recuentos viables. Para que un resultado sea válido, por
lo menos una caja debe contener 15 o más colonias; es recomendable calcular los
recuentos viables utilizando por lo menos un par de cajas, en las cuales una o ambas
cajas contengan más de 15 colonias y ambas contengan menos de 300 colonias. Si las
cajas provenientes de dos diluciones están dentro de este rango, se calcula el número
de ufc/ml como el recuento recuento medio ponderado. Si las cajas provenientes de una
sola dilución están dentro de este rango, se calcula la media aritmética.
Para el cálculo del recuento medio ponderado (en ufc/ml) se utiliza la fórmula (1):
c
d (1)
( n1 + 0,1 n2 )
en donde
c es el número de colonias contadas en todas las cajas consideradas;
n1 es el número de cajas consideradas en la primera dilución;
n2 es el número de cajas consideradas en la segunda dilución;
d es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución considerada.
14
Los resultados calculados se aproximan hasta dos cifras decimales. Para ello, si la última cifra
está por debajo de cinco, la cifra anterior no se modifica; si la última cifra está por encima de 5,
la cifra precedente se incrementa en una unidad; si la última cifra es igual a cinco, se aproxima
la cifra precedente hasta la cifra superior más próxima. Prosiga por pasos hasta obtener dos
cifras decimales.
a) como resultado, la cantidad de ufc/ml se expresa con un número entre 1,0 y 9,9
multiplicado por la potencia de 10 adecuada.
EJEMPLO:
168 + 215 + 14 + 25 422

= = 1,918 2 x 108 → 1,9 x 108 (en ufc / ml ) (1)
( 2 + 0,1 − 2 ) 10 −6 2,2 − 10 − 6
5.6.1.2 Procedimiento y validación del ensayo

Para el procedimiento de ensayo (véanse los numerales 5.5.2.2, 5.5.2.4, 5.5.3.2 y 5.5.3.4) y el
ensayo para la validación (véanse los literales A.2, A.4.1 y A.4.2) el recuento viable se debería
calcular utilizando el siguiente método. Se recomienda utilizar únicamente los recuentos de
colonias inferiores a 300 ufc por caja para el cálculo de los recuentos viables. Tales recuentos
se deberían calcular utilizando las colonias provenientes de ambas cajas. Cuando por lo menos
una caja contienen 15 o más colonias, se utiliza la siguiente fórmula (2) para el cálculo de los
recuentos viables (en ufc/ml):
c
(2)
n − d− V
en donde:
c es la suma de las colonias contadas en ambas cajas;
n es la cantidad de cajas consideradas;
d es el factor de dilución que corresponde a la dilución considerada. Para el procedimiento de

ensayo de dilución-neutralización (véanse los numerales 5.5.2.3 y 5.5.2.5) y la suspensión
bacteriana (véase el literal A.2) el factor de dilución es 10-1;
V es el volumen de la muestra. Para el método de dilución-neutralización y el procedimiento de

validación (véanse los numerales 5.5.2.2, 5.5.2.4 y Anexo A literal A.4.1) y la suspensión
bacteriana (véase el Anexo A.2), el volumen de la muestra es de 1,0 ml. Para el método filtración
por membrana y el procedimiento de validación (véanse los numerales 5.5.3.2, 5.5.3.4 y Anexo
A.4.2) el volumen de la muestra es de 0,1 ml.
Para el procedimiento de ensayo (véase el numeral 5.5) cuando el número de ufc en todas las
cajas contadas es inferior a 15, registre la cantidad de recuentos viables de la mezcla de
ensayo como inferior a 1,5 x 101 ufc/ml (<1,5 x 101 ufc/ml). Cuando el número de ufc en todas
las cajas contadas es superior a 300, registre el recuento viable de la muestra de ensayo como
superior a 3 x 102 ufc/ml (> 3 x 102 ufc/ml).
15
5.6.2 Verificación de la metodología
5.6.2.1 Método de dilución-neutralización
Asegúrese de lo siguiente:
a) ningún recuento de caja individual utilizado para calcular el valor de N, A y B debe ser
superior a 300 ufc/ml;
b) N, A y B están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml;
c) B y A son iguales o superiores a 0,5 veces N;
d) C es igual o superior a 0,5 veces B.
en donde
N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el
numeral 5.4.1.4);
A es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las
condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A A.4.1.2);
B es el recuento promedio de la caja de no toxicidad del control del neutralizador (en ufc/ml) (véase
el Anexo A A.4.1.3);
C es el recuento promedio de la caja del control del método de dilución-neutralización (en ufc/ml)
(véase el Anexo A A.4.1.4)
5.6.2.2 Método de filtración por membrana
Asegúrese de lo siguiente:
a) ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de N y A es superior a 300 ufc/ml y
que N y A están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml;
b) ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de B es superior a 150 ufc/ml y
que B está entre 50 ufc/ml y 150 ufc/ml;
c) C es igual o superior a 0,5 veces B.
en donde
N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el
numeral 5.4.1.4);
A es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las
condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A. 4.2.2);
B es el recuento promedio del control de filtración (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A.4.2.3);
C es el recuento promedio de la caja del control del método de filtración por membrana (en ufc/ml)
(véase el Anexo A literal A.4.2.4).
16
5.7 CONCLUSIÓN
5.7.1 Se considera que los productos para la fricción higiénica de manos que demuestran
una reducción de 105 en los recuentos viables en un periodo de 1 minuto ± 5 s a 20 °C en las
condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli,
Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus, se considera
aprobado el ensayo. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto,
se considera que el producto ha pasado la prueba si se logra una reducción similar en 30 s ± 5
s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas
para desinfección higiénica de manos y se puede proseguir a la evaluación adicional para
calificar su eficacia en las condiciones que simulan su uso sobre las manos –UNE- EN 1500).
5.7.2 Se considera que los productos para lavado higiénico de manos que demuestran
una reducción de 103 en los recuentos viables en un periodo de 1 min ± 5 s a 20 °C en las
Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el
ensayo. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto, se considera
que el producto ha aprobado el ensayo si se logra una reducción similar en 30 s ± 5 s. Los
productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para
desinfección higiénica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar
su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso (EN 1499)
5.7.3 Se considera que los productos para fricción quirúrgica de manos que demuestran
ensayo. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min, se considera que
el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s,
3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir
como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir
la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las
prácticas rutinarias de uso (EN 12791).
5.7.4 Se considera que los productos para lavado quirúrgico de manos que demuestran
ensayo. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min, se considera que
el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s, 2 min ± 10 s,
3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir
como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir
la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las
prácticas rutinarias de uso EN 12791).
5.7.5 Se considera que los productos que han cumplido con los requisitos para ficción
higiénica de manos ( véase el numeral 4.2) también han cumplido con los requisitos para
fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 4.4). Los productos que han cumplido con los
requisitos para lavado higiénico de manos (véase el numeral 4.3) también se consideran
conformes con los requisitos para el lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 4.5).
17
5.8 INFORME DE ENSAYO
El informe debe hacer referencia a esta norma.
El informe de ensayo debe indicar como mínimo la siguiente información:
a) Identificación del laboratorio que realiza el ensayo.
b) Identificación de la muestra:
1) nombre del producto;
2) número del lote;
3) fabricante;
4) fecha de entrega;
5) condiciones de almacenamiento;
6) principios activos y sus concentraciones ;
7) diluyente para usar con el producto recomendado por el fabricante.
c) Método de ensayo y su validación:
- si se utilizó el método de dilución-neutralización, se deben suministrar detalles

completos de los ensayos para la validación del neutralizador.
- si se utilizó el método de filtración por membrana, se deben suministrar detalles

completos de los ensayos para la validación del método. También se deben
indicar todos los detalles de procedimiento que se realizaron para justificar el
uso del método de filtración por membrana.
d) Condiciones experimentales:
1) período de análisis;
2) concentraciones del producto para ensayo;
3) temperatura de ensayo;
4) tiempos de contacto;
5) procedimiento de recuento;
6) temperatura de incubación.
e) Resultados de ensayo:
- ensayos de validación.
- valuación de la actividad bactericida (véanse también las Tablas D.1 y D.2).
18
f) Conclusión.
g) Localidad, fecha y firma identificada.
NOTA En el Anexo D se suministra un ejemplo de un informe de ensayo típico.
19
ANEXO A
(Normativo)
MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DILUCIÓN-

NEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN POR MEMBRANA
A.1 PRINCIPIO
Para cada producto se selecciona un neutralizador según las indicaciones de véase el Anexo A
literal A.4.1 (véase el numeral 5.5). Si no se puede encontrar un neutralizador adecuado, se usa el
método de filtración por membrana según las indicaciones de véase el Anexo A literal A.4.2.
A.2 Preparación de la suspensión bacteriana
Para preparar la suspensión bacteriana, diluya la suspensión bacteriana para ensayo (véase el
numeral 5.4.1.3) con el diluyente (véase el numeral 5.2.2.4) para obtener la suspensión
bacteriana de 4,5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml.
Para el recuento de la suspensión, prepare una dilución de 10-1 con el diluyente (véase el
numeral 5.2.2.4) y mezcle (véase el numeral 5.3.2.6).
Tome una muestra de 1,0 ml de la dilución de 10-1 en duplicado e inocule usando la técnica de
siembra en profundidad o siembra en superficie.
Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad, vierta con pipeta cada muestra de 1,0 ml de
la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5.3.2.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de
TSA (véase el numeral 5.2.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.
Si se utiliza la técnica de siembra en superficie, disperse cada muestra de 1,0 ml de la mezcla

sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.2.2.3).
Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. Deseche las

cajas que, por cualquier razón, no se puedan contar. Realice el recuento de las cajas y
determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Incube las cajas
durante 24 h adicionales. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien
separadas. Vuelva a contar las cajas restantes. Determine el mayor número de colonias para
cada caja. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión bacteriana (Nv) utilizando el método
que se indica en el numeral 5.6.1.2.
A.3 PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DEL PRODUCTO PARA ENSAYO
Véase el numeral 5.4.2. Para productos de fricción de manos, el producto se utiliza sin diluir
como la solución de producto para ensayo. Para productos de lavado de manos, prepare una
dilución al 55% (V/V) del producto de lavado de manos de ensayo en agua dura (véase
numeral 5.2.2.7) como solución del producto para ensayo
A.4 ENSAYO PARA VALIDACIÓN
A.4.1 Método de dilución-neutralización
A.4.1.1 Generalidades
Antes del ensayo, equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo, agua,
suspensión bacteriana para ensayo, neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C
20
utilizando el baño de agua (véase el numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Verifique que
la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.
A.4.1.2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A)
Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente, los
cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura.
Coloque 9,0 ml de agua dura (véase el numeral 5.2.2.7) en un tubo de ensayo estéril. Adicione
1,0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4,5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml
preparada según se indica en el Anexo A. literal A.2. Ponga en marcha inmediatamente el
cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s.
Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado

higiénico de manos) o 5 min ± 10 se (lavado quirúrgico de manos.
NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar
la parte superior de los lados del recipiente.
NOTA 2 Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado quirúrgico de manos
se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min.
Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s. Tome una
muestra de 1,0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en
profundidad o de siembra en superficie,
TSA (véase numeral 5.2.2.3) fundido y enfriado a 45°C ± 1°C.


cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua
dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5.6.1.2.
Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.
A.4.1.3 Validación de no toxicidad del neutralizador (B)
Coloque 9,0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.2.2.5) en un tubo de ensayo estéril.

Adicione 1,0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4,5 x 102 ufc/ml a 3 x
103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A literal A.2. Ponga en marcha
inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s.
Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado

higiénico de manos o fricción higiénica de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos
o fricción de manos quirúrgica).
21
NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento poscontaminación
como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto
más prolongado de 5 min.
profundidad o de siembra en superficie. .
la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5.3.2.10) independientes y adicione 12 ml a 15
ml de TSA (véase el numeral 5.2.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.


cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control de no toxicidad del neutralizador (B)
utilizando el método que se describe en el numeral 5.6.1.2.
A.4.1.4 Validación de la neutralización del método de dilución-neutralización (C)
Coloque 1,0 ml de diluyente para la suspensiones bacterianas (véase el numeral 5.2.2.4) en un

tubo estéril y luego, simultáneamente, encienda el cronómetro y adicione 9,0 ml de la solución
del producto para ensayo (véase el numeral 5.4.2). Deje en el baño de agua a 20 °C durante 5 min
± 10 s. Después, transfiera 1,0 ml de la mezcla en un tubo de ensayo que contenga 8,0 ml de
neutralizador (véase el numeral 5.2.2.5) que se ha mantenido previamente en un baño de agua a
20 °C ± 1 °C. Deje en el baño de agua durante 5 min ± 10 s.
Adicione 1,0 ml de una suspensión bacteriana que contengan de 4,5 x 102 ufc/ml a 3 x 103
ufc/ml preparada según se indica en el Anexo literal A A.2. Ponga en marcha inmediatamente
el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s.
Deje en el baño de agua a 20°C ± 1°C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado
higiénico de manos o fricción higiénica de manos)) o 5 min ± 10 s (desinfección quirúrgica de
manos).
NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento de las manos
poscontaminación como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el
tiempo de contacto más prolongado de 5 min.
profundidad o de siembra en superficie
TSA (véase el numeral 5.2.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.
22


cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de dilución-neutralización (C )
A.4.2 Método de filtración por membrana
A.4.2.1 Generalidades
Antes del ensayo, equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo, agua,
suspensión bacteriana para ensayo, líquido de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ±
1 °C utilizando el baño de agua (véase el numeral 5.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Verifique
que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.
A.4.2.2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A)
Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente, los
cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura.
Coloque 9,0 ml de agua dura (véase el numeral 5.2.2.7) en un tubo de ensayo estéril. Adicione
1,0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4,5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml
preparada según se indica en el Anexo A literal A.2. Ponga en marcha inmediatamente el
cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s.
Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 minuto ± 5 s

(lavado higiénico de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos).
Nota 1. Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener

precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.
Nota 2. Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado
quirúrgico de manos se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto
más prolongado de 5 min.
Al final del tiempo de contacto, mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos segundos.
Tome dos muestras de 0,1 ml de la suspensión bacteriana y transfiera cada muestra hacia un
equipo de filtración por membrana independiente, que disponga de una membrana y que
contenga 50 ml del líquido de enjuague (véase el numeral 5.2.2.5). Filtre y enjuague con 50 ml
del líquido de enjuague (véase el numeral 5.2.2.6) y luego transfiera las membranas sobre la
superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.2.2.3). El tiempo necesario
para transferir y filtrar no debería exceder 1 min. Si es superior a 1 min, este tiempo se debe
registrar en el informe de ensayo.
NOTA 3 Al realizar la transferencia, se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la
cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la
superficie del agar.
23
Incube las cajas a temperatura de 36 C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. Deseche las cajas

que, por cualquier razón, no se puedan contar. Realice el recuento recuento de las cajas y
cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua
dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5.6.1.2.
Repita el procedimiento anterior para cada organismo ensayo
A.4.2.3 Control del procedimiento de filtración (B)
Tome dos muestras de 0,1 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4,5 x 102
ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el literal A.2 y transfiera cada muestra
hacia un equipo de filtración con una capacidad mínima de 50 ml, que disponga de una
membrana independiente. Filtre y enjuague con 50 ml del líquido de enjuague (véanse los
numerales 5.2.2.5 y 5.2.2.6) y luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas
individuales de TSA (véase el numeral 5.2.2.3). El tiempo necesario para transferir y filtrar no
debería exceder 1 minuto. Si es superior a 1 minuto, este tiempo se debe registrar en el informe
de ensayo.
Nota. Al realizar la transferencia, se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se
encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede
aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.

cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control del procedimiento de filtración (B)
A.4.2.4 Validación de la neutralización mediante el método de filtración por membrana

(procedimiento de filtración)
Coloque 1,0 ml de diluyente para las suspensiones bacterianas (véase el numeral 5.2.2.3) en
un tubo estéril y luego, simultáneamente, active el cronómetro y adicione 9,0 ml de la solución
del producto para ensayo (véase el numeral 5.4.2). Mezcle y deje en el baño de maría a 20 °C
durante 5 min ± 10 s.
Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5.3.2.6) durante unos s. Tome dos
muestras de 0.1 ml de la mezcla y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración con
una capacidad mínima de 50 ml, que disponga de una membrana independiente ,
Filtre y enjuague la membrana con no menos de 150 ml y no más de 500 ml del líquido de
enjuague (véanse los numerales 5.2.2.5 y 5.2.2.6). Luego cubra las membranas con 150 ml de
líquido de enjuague y adicione 0,1 ml de la suspensión bacteriana diluida que contenga de 1 x
102 ufc/ml a 3 x 102 ufc/ml preparada según se indica en el literal A.2.
24
Transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el
numeral 5.2.2.3). El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min. Si es
superior a 1 minuto, este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo.
NOTA Al realizar la transferencia, se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la
cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la
superficie del agar.

cada caja. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de filtración por membrana (C)
A.5 Validación
Verifique que los resultados de ensayo cumplen con los requisitos correspondientes de los
numerales 5.6.1.2 o 5.6.2.
25
ANEXO B
(Informativo)
NEUTRALIZADORES
Cuando se especifica un neutralizador, se puede utilizar cualquiera de los que se indican a

continuación.
NOTA La siguiente lista no es exhaustiva y se pueden probar otros medios.
Tabla B.1. Ejemplos de neutralizadores
Desinfectante Neutralizadores (concentración por litro de fluido o diluyente de

muestreo)
Gluconato de clorhexidina polisorbato 80 a) (30 ml)
+
lecitina de huevo (3 g)
+
histidina (1 g)
(puede ser necesario utilizar concentraciones superiores, hasta cinco
veces, para la neutralización completa)
Compuestos de cloro y yodo polisorbato 80 a) (30 ml)

povidona +
+
histidina (1 g)
+
tiosulfato de sodio (5 g)
+
albúmina de suero bovino, liofilizada (1 g)
Compuestos fenólicos polisorbato 80 a) (30 ml)

+
+
histidina (1 g)
+
tiosulfato de sodio (5 g)
Compuestos de amonio polisorbato 80 a) (30 ml)

cuaternario +
saponina (30 g)
+
histidina (1 g)
+
cisteína (1 g)
a)
Con grado analítico, no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN
80® es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta información se
suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de
este producto por parte de ICONTEC
26
ANEXO C
(Informativo)
LÍQUIDOS DE ENJUAGUE
Se puede utilizar cualquiera de los siguientes líquidos de enjuague:
- agua (véase el numeral 5.2.2.2);
- diluyente (véase el numeral 5.2.2.4);
- solución acuosa al 0,1 % (V/V) de polisorbato 80 5);
- solución acuosa al 0,5 % (V/V) de polisorbato 80 5);
- solución acuosa al 0,5 % (V/V) de polisorbato 805) 5) y 0,07 % de lecitina;
- neutralizador (véase el numeral 5.2.2.5);
- soluciones amortiguadoras.
NOTA Esta lista no es exhaustiva y se pueden probar otros líquidos de enjuague.
5)
Con grado analítico, no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN 80® es un
ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta información se suministra para
conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de
ICONTEC
27
ANEXO D
(Informativo)
EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO
Actividad bactericida de un producto de lavado higiénico de manos destinado para el

tratamiento postcontaminación de las manos
1. Identificación del laboratorio de ensayo Besson Test House
2. Identificación de la muestra
Nombre del producto......................................................... Lavado de manos Bacticen
Número de lote ................................................................. 96-71-51
Fabricante ......................................................................... Centipede Formulations Inc.
Fecha de entrega .............................................................. 1996-05-11
Condiciones de almacenamiento ..................................... aquellas del fabricante
Sustancias activas y sus concentraciones (opcional) ........ no se indican
Diluyente para uso con el producto recomendado
por el fabricante ................................................................. agua dura
3. Método de ensayo y su validación

Método ............................................................................... dilución-neutralización
Neutralizador ..................................................................... 30 g/l, lecitina, esterilizada
en autoclave
4. Condiciones experimentales
Período de análisis ............................................................ 1996-02-20 a 1996-03-12
Concentración del producto para ensayo........................... producto diluido al 55 %
(V/V) en agua dura
Temperatura de ensayo .................................................... 20 °C ± 1 °C
Tiempo de contacto .......................................................... 1 minuto
Procedimiento de recuento ........................................
siembra en superficie
Temperatura de incubación .............................................. 36 °C ± 1 °C
5. Resultados de ensayo
Véanse las Tablas D.1 y D.2.
6. Conclusión
Según el documento EN 12054, el lote 96-71-51 del producto "lavado de manos Bacticen" tiene
una actividad bactericida para las cepas indicadas de Escherichia coli (K 12) NCTC 10538,
Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442, Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Enterococcus
hirae ATCC 10541 en un tiempo de contacto de 1 minuto acorde con los requisitos para un
producto de lavado higiénico de manos.
7. Localidad, fecha y firma identificada
NOTA El producto, el número de lote y el fabricante se suministran únicamente como ejemplos imaginarios.
28
Tabla D.1. Verificación de la metodología y la validación del método

de dilución-neutralización
A) validación del método de dilución-neutralización

Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja
(cantidad promedio de ufc)
Suspensión bacteriana Validación de la neutralización
para ensayo (véase el
numeral 5.4.1.4) Control Ensayo
Staphylococcus aureus 149, 147 135, 143 129, 121
(N = 148) (B = 139) (C = 125)
Pseudomonas aeruginosa 143, 149 134, 140 128, 131
(N = 146) (B = 137) (C = 130)
Escherichia coli 142, 150 135, 139 120, 124
(N = 146) (B = 137) (C = 122)
Enterococcus hirae 149, 141 133, 140 143, 131
(N = 145) (B = 137) (C = 137)
Para las cepas sometidas a ensayo:
N y B están entre 100 ufc y 300 ufc;
B es mayor a 0,5 veces N;
C es mayor a 0,5 veces B.
La neutralización se valida con el neutralizador que se ensaya.
B) Validación de las condiciones experimentales (agua dura)
Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja
(cantidad promedio de ufc)
Suspensión bacteriana para Ensayo experimental con
ensayo (véase el numeral agua dura
5.4.1.4)
Staphylococcus aureus 149, 147 142, 148
(N = 148) (A = 145)
Pseudomonas aeruginosa 143, 149 139, 147
(N = 146) (A = 143)
Escherichia coli 142, 150 146, 142
(N = 146) (A = 144)
Enterococcus hirae 149, 141 139, 145
(N = 145) (A = 142)
Para las cepas sometidas a ensayo:
N y A está entre 100 ufc y 300 ufc;
A es mayor a 0,5 veces N.
El método se valida para la condiciones experimentales de la dilución del producto al 55 % (V/V) en agua
corriente.
Tabla D.2. Resultados de ensayo para el producto de lavado de manos

diluido al 55% en agua dura
Organismo de Muestra de Recuento de colonias por caja

ensayo ensayo después de 1 min de contacto ufc/ml de la mezcla de ensayo
Recuento En tiempo de
inicial (N) contacto de 1 min (C)
Staphylococcus dilución 10-2 110 ; 98 1,48 x 10
7
1,04 x 103
aureus dilución 10-3 2;0
-2
Pseudomonas dilución 10 >300 ; >300 1,46 x 107 2,8 x 1 03
-3
aeruginosa dilución 10 29 ; 29
Escherichia coli dilución 10-2 114 ; 110 1,46 x 10
7
1,12 x 103
dilución 10-3 10 ; 9
Enterococcus hirae dilución 10-2 143 ;139 1,45 x 10

7
1,41 x 103
dilución10-3 19 ; 11
29
ANEXO E
(Informativo)
CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES DE CULTIVO
Pseudomonas aeruginosa: ATCC 15442

CIP 103467
DSM 939
NCIMB 10421
Escherichia coli: ClP 54.117

NCTC 10538
NCIMB 10083
Staphylococcus aureus: ATCC 6538

CIP 4.83
DSM 799
NCTC 10788
NCIMB 9518
Enterococcus hirae: ATCC 10541

CIP 58.55
DSM 3320
NCIMB 8192
30
ANEXO F
(Informativo)
INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS

EUROPEAS SOBRE DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS
El comité CEN/TC 216 quiere llamar la atención del lector de esta norma a los acuerdos
logrados con respecto a la relación entre esta norma y normas futuras.
Se recomienda tener en cuenta esta información cuando se utilizan las Normas Europeas
sobre desinfectantes y antisépticos químicos.
F.1 GUÍA GENERAL PARA LA APLICACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LOS MÉTODOS

DE ENSAYO SEGÚN LAS NORMAS EUROPEAS PARA DESINFECTANTES Y
ANTISÉPTICOS QUÍMICOS
a) Todas las "recomendaciones de uso" para los productos desinfectantes y antisépticos

químicos deberán estar sustentadas por los resultados de ensayos bactericidas,
fungicidas, esporicidas y virucidas de EN que sean adecuados para el campo y el
método de aplicación previstos.
b) Para tal fin, los productos desinfectantes y antisépticos químicos se deberían someter
a un programa específico de ensayo que incluya ensayos de fase 1, fase 2/etapa 1 y
fase 2/etapa 2, excepto para las situaciones que se indican en los ítems e), f) y g).
c) “Las recomendaciones de uso” deben estar soportadas por los resultados de los
ensayos en fase 3, los cuales son apropiados para el campo de aplicación y el
método de aplicación.
d) Las diversas fases y etapas se definen así:
- ensayo de suspensión de fase 1 para la actividad básica del producto;
- ensayo de suspensión de fase 2/etapa 1 bajo las condiciones representativas del

uso práctico;
- otros ensayos de laboratorio de fase 2/etapa 2, por ejemplo ensayos de

superficies, de lavado y fricción de manos que simulen las condiciones prácticas;
- ensayos de campo de fase 3 bajo condiciones prácticas.
e) Se acepta que para algunas aplicaciones, los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2
pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos
adicionales de fase 1 pueden no ser pertinentes.
Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2
sin ensayos de fase 1 para sustentar las recomendaciones de uso, se recomienda indicar la
justificación para omitir los ensayos de fase 1. Tales aplicaciones estarán indicadas en la
propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para la aplicación e
interpretación de los ensayos.
31
f) Se acepta que para algunas aplicaciones, los ensayos de suspensión de fase 2/etapa 1
pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos
adicionales de fase 2/etapa 2 pueden no ser pertinentes.
Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 sin ensayos
de fase 2/etapa 2 para sustentar las recomendaciones de uso, se recomienda indicar la
justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 2. Tales aplicaciones estarán
indicadas en la propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para
la aplicación e interpretación de los ensayos.
g) Se acepta que para algunas aplicaciones los ensayos de fase 2/etapa 2 junto con
ensayos de fase 1 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular
y que los ensayos adicionales de fase 2/etapa 1 pueden no ser pertinentes.
Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 2 sin ensayos
de fase 2/etapa 1 para sustentar las recomendaciones de uso, se recomienda indicar la
justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 1. Tales aplicaciones pueden estar
indicadas en el "método estandar" o en la norma para la aplicación e interpretación de
los ensayos.
h) Todas las declaraciones de bactericidas, fungicidas, esporicidas como "sustancias

bioactivas" deben estar sustentadas por ensayos de fase 1 adecuados.
F.2 Guía para la interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos

químicos
Se elaborará una norma (o normas) independiente que será utilizada como "guía para la
interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos químicos" después de que se
pacten los métodos de ensayo normales; el propósito de esta norma será especificar en detalle
la relación entre los diversos ensayos entre sí y con las recomendaciones de uso.
32
DOCUMENTO DE REFERENCIA
EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION. EUROPEAN STANDARD, Chemical

Disinfectants and Antiseptics. Quantitative Suspension Test for the Evaluation of Bactericidal
Activity of Products for Hygienic and Surgical Handrub and Handwash Used in Human
Medicine. Test Method and Requirements (Phase 2/step 1). Bruselas, Bélgica. 2001, 31 p.
(prEN 12054:2001 E)
33

NTC 5732 Poder Bactericida Jabon Quirurgico

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NTC 5732 Poder Bactericida Jabon Quirurgico

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NORMA TÉCNICA NTC

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS.

E: CHEMICAL DESINFECTANTS AND ANTISEPTICS-

CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción idéntica

DESCRIPTORES: investigación; desarrollo; innovación;

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Prohibida su reproducción Editada 2009-12-24

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

La NTC 5732 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-12-16.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

3M DE COLOMBIA S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las

ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA

2. REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................1

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS.............................................................................3

4.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS...............................................................................3

4.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS ........................................................................3

4.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS ..........................................................................3

4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVDO HIGIÉNICO DE MANOS......................

5.2 MATERIALES Y REACTIVOS .....................................................................................4

5.3 EQUIPOS Y MATERIALES DE VIDRIO ......................................................................7

5.4 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES

5.6 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS .........................................................14

5.8 INFORME DE ENSAYO .............................................................................................18

Tabla 1. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS.

Campo de aplicación: se emplea en las áreas y situaciones donde se indica médicamente la

- en hospitales, en instalaciones médicas comunitarias y en instituciones odontológicas

- en clínicas de escuelas, jardines infantiles y hogares geriátricos.

No es posible determinar la actividad bactericida del producto para FRICCION de manos no

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de

NTC 5150, Antisépticos y desinfectantes químicos. Actividad bactericida básica. Método de

NTC 5593, Antisépticos y desinfectantes químicos. Conservación de las cepas microbianas

3.4 Fricción higiénica de manos. Procedimiento poscontaminación que implica la frotación

El producto, cuando se somete a ensayo según lo indicado en el numeral 5, debe demostrar

4.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS

El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 1 min ± 5 s.

4.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS

El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 1 min ± 5 s.

4.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS

El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 5 min ± 10 s.

4.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS

El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 5 min ± 10 s.

4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS

La cantidad de bacterias en la suspensión de ensayo también se determina y se calcula la

Tabla 1. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto

El ensayo se lleva a cabo utilizando Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus

5.2 MATERIALES Y REACTIVOS

5.2.1 Organismos de ensayo

Escherichia coli (K12) NCTC1) 10538

Pseudomonas aeruginosa ATCC1) 15442

Staphylococcus aureus ATCC1) 6538

Enterococcus hirae ATCC1) 10541

5.2.2 Medios de cultivo y reactivos

NOTA Para mejorar la reproducibilidad, se recomienda la utilización de material deshidratado disponible en el

5.2.2.3 Agar tripticasa de Soya (TSA)

Para la conservación de las cepas bacterianas y la realización de los recuentos viables.

Triptona, digerido pancreático de caseína 15,0 g

Peptona de soya, digerido papaínico de harina de soya 5,0 g

Agua (5.2.2.2) 1 000,0 ml

Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.3.1). Después de la esterilización, el pH del medio

Solución de cloruro de sodio y triptona:

Triptona, digerido pancreático de caseína 1,0 g