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Pract 3 Inmuno Fagocitosis
Pract 3 Inmuno Fagocitosis
LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
PRACTICA NO. 3
“FAGOCITOSIS”
CATEDRATICO:
DRA. MARISOL ESPINOZA RUIZ
ALUMNO:
RODAS HERRERA MIGUEL ANGEL
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MARCO TEORICO
La composición de la sangre
El plasma sanguíneo
Tiene el aspecto de un fluido claro, algo semejante a la clara de huevo, y el 90% está
formado de agua. En él se hallan disueltas importantes sales minerales, como el
cloruro sódico, el cloruro potásico y sales de calcio, escindidas en sus componentes. Su
concentración oscila muy poco para que no se rompa su equilibrio con el líquido que
baña los tejidos ni con el intracelular. Gracias a ellas pueden disolverse las proteínas
en el plasma, para ser transportadas por la sangre, y la acidez de los líquidos del
cuerpo se mantiene dentro de estrechos límites.
Las proteínas más importantes que se hallan disueltas en el plasma son el fibrinógeno
y la protrombina, que intervienen en la coagulación sanguínea; las albúminas, que
desempeñan un importante papel en el transporte y para mantener el volumen de
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plasma, y las globulinas, que son parte del sistema defensivo de nuestro cuerpo. Todas
estas proteínas, a excepción de las últimas, se forman en el hígado.
Además, en el plasma existen todas las sustancias transportadas por la sangre, como
las partículas de alimento y los productos que son el resultado del metabolismo, y,
como ya hemos mencionado, las hormonas.
Los leucocitos o glóbulos blancos son las células sanguíneas encargadas de la defensa.
Su tamaño es variable, de 6 a 20 micras de diámetro, y se encuentran en la sangre,
según su tipo, en un número que oscila entre los 5.000 y los 9.000 por milímetro
cúbico. Todos ellos tienen núcleo, aunque la forma de éste es muy distinta. Algunos de
ellos, el grupo de los granulocitos, poseen unos gránulos en el citoplasma, mientras
que otros, los agranulocitos, carecen de ellos. Los granulocitos se subdividen en
neutrófilos, eosinófilos y basófllos, y los agranulocitos en monocitos y linfocitos.
Neutrófilos
Se originan en la médula ósea roja, donde gran proporción de ellos permanece hasta
que son necesarios en la sangre. Constituyen el 70% del total de los granulocitos, y
sus gránulos son pequeños y muy numerosos. El núcleo posee varios lóbulos, y el
diámetro es de unas 10 micras. Su función es la fagocitosis, es decir, devorar los
cuerpos extraños, después de lo cual el neutrófilos muere y es destruido, formándose
partículas de pus. La vida media de estas células es de una semana.
Eosinófilos
Originados de la misma forma que los neutrófilos, los eosinófilos constituyen el 3% del
total de granulocitos y su núcleo presenta sólo dos nódulos ovalados. Sus gránulos son
grandes y numerosos y su diámetro de unas 10 micras. Su función es la fagocitosis, al
igual que la de los neutrófilos, y su número aumenta mucho durante las alergias y las
enfermedades por parásitos.
Basófilos
Los gránulos de los basófilos son gruesos pero escasos. Son células de unas 10 micras
de diámetro y su núcleo tiene una forma que recuerda a una 5. Se originan en el
mismo lugar que el resto de los granulocitos, y son los menos numerosos, ya que
constituyen sólo el 0,5% del total. Su función no se conoce bien, pero parece que
evitan la coagulación dentro de las arterias y las venas.
Monocitos
Son los más grandes de entre los glóbulos blancos, con un tamaño que oscila entre las
15 y las 20 micras. Su núcleo tiene forma arriñonada y poseen gran cantidad de
citoplasma, que no tiene gránulos. Constituyen el 5% de los glóbulos blancos, y se
dedican a devorar partículas de un tamaño considerable. Por tanto, al igual que los
tipos antes descritos, los monocitos viven muy poco tiempo, pues mueren destruidos
después de fagocitar. Algunos de ellos se desplazan hasta donde los necesitan, pero
también los hay fijos en el hígado, el bazo, los ganglios linfáticos y la médula.
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Linfocitos
Linfocitos T. Estas células colaboran con los linfocitos B, y además tienen otras
funciones, como la de estimular la actividad de algunas células que fagocitan.
FAGOCITOSIS
La fagocitosis se lleva a cabo en células especializadas llamadas fagocitos, donde se
incluyen los macrófagos, neutrófilos y otros glóbulos blancos de la sangre. La
invaginación produce una vesícula llamada fagosoma, las cual usualmente se fusiona
con uno o más lisosomas conteniendo enzimas hidrolíticas. Los materiales en el
fagosoma son rotos por estas enzimas y degradados.
La fagocitosis (del griego -phagos, “el que come”, kytos, “célula”), es un tipo de
endocitosis por el cual algunas células rodean con su membrana citoplasmática a una
sustancia extracelular (un sólido generalmente) y la introducen al interior celular. Esto
se produce gracias a la emisión de pseudópodos alrededor de la partícula u
microorganismo hasta englobarla completamente y formar alrededor de él una
vacuola, la cual fusionan posteriormente con lisosomas para degradar la sustancia
fagocitada, la cual recibirá el nombre de fagosoma.
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Células fagocitarias
Muchos de los protistas son fagocíticas, sin embargo, en los animales, la fagocitosis es
una función de células especializadas del sistema inmune capaces de remover cuerpos
extraños y combatir infecciones como primera línea de defensa natural. Estas células
existen tanto en humanos como en otros animales, como pájaros, mamíferos y peces.
De hecho, la fagocitosis es la función principal de algunas células, por lo que se les
llama fagocitos profesionales. Varias células en el cuerpo humano ejercen funciones
fagocitarias, neutrófilos, macrófagos, células dendríticas, eosinófilos, basófilos, etc.
Otras células como las células de Kupffer en el hígado, las células de la microglía en el
SNC son fagocitarias en la mayoría de los animales.
PROCESO DE LA FAGOCITOSIS
Fenómeno que favorece el reconocimiento, fijación, englobamiento, formación de
vesícula fagocítica y degradación; se ve favorecida por las opsoninas IgG y C3b.
Consiste en 3 pasaos interrelacionados y son:
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Mecanismos dependientes de oxígeno: Se activa una ruta metabólica (hexosa
monofosfato) que consume grandes cantidades de oxígeno, lo que a su vez
produce grandes cantidades de radicales tóxicos antimicrobianos (como el O2-,
H2O2, OH-, O21), que a su vez pueden reaccionar para dar otras sustancias
tóxicas, como hipocloritos y cloruros. Estas sustancias provocan una intensa
halogenación que afecta a muchas bacterias y virus.
Mecanismos dependientes de óxido nítrico (NO).
Mecanismos independientes de oxígeno: Liberación de enzimas hidrolíticos:
lisozima, proteínas catiónicas, proteasas, etc., que ejecutan un efecto
bactericida o bacteriostático.
PERITONEO
Membrana
que cubre la
cavidad
abdominal.
El peritoneo es una membrana serosa (llamada así porque cubre cavidades interiores
del cuerpo humano), fuerte y resistente, que tapiza las paredes de la cavidad
abdominal y forma pliegues (los mesos, los epiplones y los ligamentos) que envuelven,
total o parcialmente, gran parte de las vísceras situadas en esa cavidad, sirviendo de
sostén para las mismas.
Está en contacto, por un lado, con la cara interna de la cavidad abdominal y, por el
otro, con la cara externa de los órganos. Este doble contacto es posible gracias al
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aspecto característico del peritoneo de ser una membrana serosa de dos capas u
hojas.
La capa exterior, llamada peritoneo parietal, está adherida a la pared abdominal y la
capa interior, peritoneo visceral, envuelve los órganos situados dentro de la cavidad
abdominal.
El espacio entre ambas capas se denomina cavidad peritoneal; y contiene una pequeña
cantidad de fluido lubricante (alrededor de 50 ml) que permite a ambas capas
deslizarse entre sí y facilitar el movimiento de las vísceras.
Esta cavidad peritoneal está cerrada en el hombre y abierta en la mujer al nivel del
pabellón de la trompa de Falopio y del ovario.
La mayor parte de los órganos abdominales están adheridos a la pared abdominal por
el mesenterio, que es una parte del peritoneo a través de la cual los órganos son
alimentados por los vasos sanguíneos, linfáticos y nervios.
Debajo de las células mesoteliales se encuentra la matriz extracelular constituida por
colágeno, glicoproteínas, glicosaminoglucanos, proteoglucanos, linfocitos, macrófagos,
PMN; las estructuras vasculares y linfáticas se encuentran por debajo de la serosa.
La serosa peritoneal tiene diversas funciones entre las que se encuentran: Funciones
inmunitarias y de barrera a las infecciones. Y la producción de numerosos mediadores
como Interleucinas, FNT, ICAM-1, prostaglandinas, etc.
Las estructuras del abdomen están clasificadas como intraperitoneales y
extraperitoneales, dependiendo de si están cubiertas de peritoneo visceral o no lo
están y tienen mesenterio.
Las estructuras o vísceras abdominales que se encuentran recubiertas por el peritoneo
se llaman vísceras intraperitoneales.
Estas vísceras o estructuras son: el estómago, el hígado, la porción superior del
duodeno, el yeyuno, el íleon, el apéndice, el bazo, el colon transversal, el colon
sigmoide, y en las mujeres: el útero y las trompas de Falopio.
Estructura
básica del
peritoneo.
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Otras vísceras o estructuras quedan por detrás o fuera del peritoneo denominándose
retroperitoneales o extraperitoneales, ya que no están totalmente recubiertas por esta
membrana.
Estas son: el hígado (zona desnuda), la vesícula biliar, los conductos biliares, partes del
tracto gastrointestinal (duodeno, páncreas, colon ascendente, colon descendente,
recto), principales vasos sanguíneos (aorta, vena cava inferior), las glándulas
suprarrenales, los riñones, los uréteres, la vejiga, los ovarios.
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MECANISMOS DE DEFENSA PERITONEAL EN EL SER
HUMANO
El macrófago peritoneal
La célula mesotelial como presentadora de antígeno
El neutrófilos peritoneal
El M0 perivascular
El M0 intersticial
El M0 submesotelial
El M0 adherido a la superficie externa mesotelial
El M0 flotante
La célula mesotelial es probablemente la primera célula peritoneal que contacta con los
gérmenes
Tiene capacidad para reclamar células defensivas a través de producción de Il- 1 (M0)
e Il-8 (PMN)
La respuesta se amplifica por los M0 y PMNs
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OBJETIVO
Que el alumno lleve acabo la inoculación del ratón por vía peritoneal
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Materiales y reactivos
Guantes
Alcohol
Anticoagulante EDTA
Gradilla
Masking tape
Estufa o incubadora
Microscopio
Porta objetos
Aceite de inmersión
Centrifuga
Material de disección
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METODOLOGÍA
FAGOCITOSIS IN VITRO
Punción venosa
La sangre se extrae de una vena, usualmente de la parte interior del codo o del
dorso de la mano.
Se coloca una banda elástica alrededor de la parte superior del brazo con el fin
de aplicar presión en el área y hacer que la vena se llene de sangre.
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Después de haber recogido la muestra de sangre, se toma con mucho cuidado
la jeringa con la sangre y se pegara en una superficie vertical, a fin de que se separa el
plasma sanguíneo transcurrido el tiempo.
Ya que se pego la jeringa (de preferencia con masking tape), doblar la aguja
con su tapa de plástico de esta forma.
observar al microscopio
FAGOCITOSIS IN VIVO
Sin soltarlo, tome en forma rápida, suave y firmemente, la piel del cuello con los dedos
índice y pulgar y luego sujete la cola entre el dedo menique y la palma de la mano.
Levante el animal.
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Después de una correcta sujeción, proseguimos al procedimiento para la
inyección de la solución de bacterias de candida:
Aplicando la sujeción con una mano e inmovilizando la pata izquierda del ratón,
se inclina al ratón con una dirección hacia el cráneo para producir un desplazamiento
de las vísceras con el fin de no lesionarlas.
CUIDADO Una rápida administración del fluido puede causar daños en el tejido
y hemorragia debido a la presión interna.
sacrificar los animales tomado su cola y cuello y tirar hasta separar las
vertebras. No tirar solo de la cola ya que esta puede desprenderse del ratón.
colocar los animales boca arriba sobre la charola de disección y fijarlos a las
misma utilizando alfileres o agujas
limpiar toda la superficie del animal con una torunda empapada en alcohol.
utilizando las pinzas y la parte roma de la tijera, romper las adherencias para
separar la piel del cuerpo del animal. No tratar de jalar la piel del ratón para sujetarla
de la placa de unicel, ya que así también podemos romper el peritoneo.
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Ya que tenemos expuesto el peritoneo del ratón, con una jeringa de 3 ml llena
de solución salina introducirla de manera horizontal, tenga cuidado de no rasgar los
recipientes abdominales importantes o usted conseguirá sangre en peritoneo e
introducir poco a poco la solución salina (con un golpeteo o sacudiéndolo suavemente
tratar de homogenizar la solución salina introducida en el animal).
Después de unos minutos extraer la solución salina poco a poco, ya que sino
las vísceras por la succión se podrán pegar a la aguja. Si no se puede extraer la misma
cantidad de solución salina introducida, no tratar de extraerla.
Se extraen las células (que van contenidas en la solución salina extraídas del
peritoneo), se centrifuga a 1200 rpm durante 10 minutos, se decanta el sobrenadante
y se realiza el frotis del botón celular (el aplicador se debe de rotar) y tinción de
Wrigth.
observar al microscopio
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OBSERVACIONES Y RESULTADOS
En el tubo de la
Plasma sanguíneo ya derecha tenemos el
separado botón celular
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Aquí tenemos descubierto Inyectando la solución
el peritoneo para proseguir salina en el peritoneo del
a introducir la sol. Salina ratón
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DISCUSIONES
en los dos tipos de experimento, tanto in vitro como en in vivo se llevo acabo el
proceso de la fagocitosis por las células del sistema inmune (principalmente por los
macrófagos)
Según esta fotografía que muestra la presentación antigénica, nos damos cuenta cuan
sorprendente es nuestro sistema inmune ya que reacciono de manera rápida y precisa
al poner en contacto células de nuestro sistema inmune con un Ag. Podemos ver como
macrófagos ya tienen en sus superficies a los Ag, ahí comprobamos que las células del
sistema inmune son muchísimas ya que no solo un macrófago esta fagocitando. El
macrófago es una célula componente de la inmunidad innata. Comprobamos también
que cuando un Ag entra a nuestro organismo no solo la inmunidad innata o inmunidad
adaptativa trabajan por separado, sino que se lleva acabo un sin fin de procesos que
engloban, tanto inmunidad innata como adaptativa. Se comprueba lo que dice la
literatura de que la inmunidad adaptativa utiliza mecanismos mediados por la
inmunidad innata, este es el caso de la participación del macrófago el cual fagocita y
lleva acabo la presentación antigénica hacia un linfocito. No podemos diferenciar que
tipo de linfocito es mediante la tinción utilizada, pero según la literatura los LThelper
son los encargados en mandar las señales para la creación de células efectoras y de
memoria en contra un Ag.
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CONCLUSIONES
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BIBLIOGRAFÍA
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