Purificacin de gama globulina por precipitacin con sulfato de amonio

Buscar que protenas se encuentran en las fracciones alfa 1, alfa 2, b1, b2 del suero
Las protenas y los pptidos que encontramos en cada una de las bandas son:
Albmina: Es la fraccin ms grande. La albmina es una protena no glicosilada cuya funcin principal es el mantenimiento de la presin
osmtica de la sangre. Adems sirve como molcula transportadora para multitid de sustancias: hormonas, tiroxina, cidos grasos,
bilirrubina y frmacos, entre otros.
Globulinas alfa 1: En ella encontramos la alfa-1-antitripsina, globulina fijadora de tiroxina (TBG), alfa-1-glucoprotena y protena fijadora
de retinol (RBP).
Globulinas alfa 2: Contiene la alfa-2-macroglobulina, haptoglobina y eritropyetina.
Globulinas beta: Transferrina, beta-lipoprotena, factor C3 del complemento. La protena C-reactiva (CRP) se encuentra entre las bandas
beta y gamma.
Globulinas gamma: Esta fraccin la forman las inmunoglobulinas que tambin son conocidas como anticuerpos (IgA, IgG, IgM, IgE).
Adems de la albmina y las globulinas el plasma contiene el fibringeno y los dems factores de la coagulacin, los factores del
complemento y citoquinas.
Buscar, descubrir y analizar mtodos inespecficos de purificacin de gama globulina y en especial de igg
Optimizacin de la purificacin de IgG humana por cromatografa de intercambio inico
La purificacin de inmunoglobulinas humanas constituye el paso inicial para obtencin de antisueros de gran utilidad en el diagnstico de
diferentes patologas. En el presente trabajo se desarroll un experimento con diseo factorial 2En para la opti mizacin de un
procedimiento para la purificacin de IgG a partir de suero humano normal. El mismo combina la precipitacin con sulfato de amonio al
50% de saturacin y la cromatografa de intercambio inico en una columna de 40 g de DEAE-Celulosa. Se realizaron cuatro
experimentos con el objetivo de optimizar la velocidad de flujo y el volumen de suero. Como resultado quedaron seleccionadas como las
mejores condiciones de nuestro experimento para la purificacin de IgG por su recobrado y pureza la velocidad de 19,1 cm/h y 8 ml de
volumen de suero.
Purificacin rpida de inmunoglobulina M a partir de suero de cachama blanca (piaractus brachypomus) y preparacin de antisuero
policlonal en conejo
A pesar de la reconocida rusticidad de la cachama, la tendencia creciente hacia la intensificacin de los sistemas de produccin de la
especie comienzan a favorecer el aumento de problemas sanitarios, los cuales debern ser caracterizados a fin de poder establecer
mtodos de diagnstico y planes de prevencin racionales. Dado que el conocimiento ictiopatolgico de especies nativas es incipiente
(entre otras cosas porque la disponibilidad de informacin sobre aspectos bsicos de histologa, embriologa, fisiologa, anatomopatolgia,
inmunologa y epidemiologa es escasa), se hace necesario el establecimiento de proyectos de investigacin que permitan conocer tales
aspectos a fin de apoyar tcnicamente la produccin de estas especies. Con este trabajo se desea aportar al conocimiento de los
aspectos inmunolgicos bsicos de la cachama blanca (Piaractus brachypomus). Para este fin, se purificaron gammaglobulinas mediante
su elusin a partir de geles de agarosa, se confirmaron la presencia de dos posibles agregados de IgM, y la confiabilidad de este mtodo
de purificacin que nos permite obtener pequeas cantidades de protena sin la presencia de contaminantes. Los antisueros obtenidos
reaccionaron exclusivamente contra la fraccin de las gammaglobulinas, lo que se comprob mediante la tcnica de inmunoelectroforesis.
Adems se obtuvieron con SDS PAGE bajo condiciones sin reduccin dos bandas: la primera con un peso aproximado de 80 kDa y la
segunda de 70 kDa, y bajo condiciones reducidas tambin dos bandas: la primera con un peso aproximado de 90 kDa y la segunda de 70
kDa.
Para preparar comercialmente la gammaglobulina que puede ser dada a pacientes con inmunodeficiencia, la gammaglobulina debe
primero purificarse (ser extrada) del plasma sanguneo de individuos normales y sanos. Cada donador debe ser aceptable como donador
sanguneo de acuerdo con las reglas estrictas reforzadas por la Asociacin Americana de Bancos de Sangre. Los donadores son
tamizados para ver si existen comportamientos o viajes que puedan incrementar el riesgo de adquirir enfermedades infecciosas. Despus,
la sangre de cada donador se analiza cuidadosamente para ver si se encuentra evidencia de enfermedades transmisibles, tales como
SIDA o hepatitis, y cualquier prueba de la que se sospeche que tenga alguna de estas enfermedades es desechada. La sangre se colecta
de unos 60,000 personas y se hace entonces un fondo comn. El primer paso de la produccin de gammaglobulina es centrifugar la
sangre para remover todos los glbulos rojos y blancos. Despus, las gammaglobulinas se purifican qumicamente del lquido plasmtico
en una serie de pasos que involucran tratamiento con alcohol. Este proceso resulta en la purificacin de anticuerpos de inmunoglobulinas
clase G (IgG), pero en la fraccin final quedan solo rasgos de cantidades de IgA e IgM. El proceso de purificacin remueve otras protenas
de la sangre y es tambin muy eficiente para destruir virus y otros grmenes que puedan encontrarse en la sangre.
PURIFICACIN DE ANTICUERPOS
Los anticuerpos son protenas, por lo que los mtodos de purificacin a partir de muestras biolgicas (suero, fluido asctico o sobrenadante
de cultivo) son formas especializadas de los mtodos de purificacin de protenas. La purificacin se puede hacer en forma cruda, es decir
precipitando todas las inmunoglobulinas y otras protenas, o solo los anticuerpos que puedan fijarse a un antgeno especfico.La
purificacin cruda de anticuerpos se puede hacer con diferentes mtodos como precipitacin con persulfato de amonio, adsorcin tioflica
o cromatografa de intercambio inico. Estos mtodos son tiles dependiendo de la aplicacin en la que vayamos a utilizar nuestro
anticuerpo. En aplicaciones a mayor escala normalmente se utiliza el intercambio inico para purificar un tipo de inmunoglobulina, en
cambio en investigacin y en produccin a pequea escala se utiliza ms la purificacin por afinidad. La cromatografa por afinidad
(purificacin por afinidad), un ligando es unido a un soporte slido, como por ejemplo crosslinkado a gel de bolas de agarosa. La muestra
fluida sa a travs del soporte material permitiendo que las inmunoglobulinas se unan al ligando inmovilizado. Mientras que los
componentes que no se han unido se lavan y eluyen del soporte. Posteriormente ponemos un buffer que nos cambie las condiciones del

medio y haga que se rompa la unin entre la inmunoglobulina y el ligando de manera que podamos eluir nuestro anticuerpo en una forma
purificada. Proteica A, protena G y sus formas recombinantes, son componentes de la pared celular bacteriana que se unen a la regin Fc
de las inmunoglobulinas y son de lejos las ms escogidas para purificar IgG por afinidad. La protena L es la tercera protena de origen
bacteriano que ha sido desarrollada para usarla en purificacin anticuerpos por afinidad, se une a diferentes clases de inmunoglobulinas
(por ejemplo IgG, IgM, IgA) siempre y cuando tengan la cadena ligera Kappa. Algunas lectinas se unen especficamente a IgA humana.
Mannan binding protein (MBP) nos permite purificar IgM tanto humana como de ratn. como en cualquier mtodo de purificacin, los
buffers de unin como de elusin son componentes importantes en la purificacin de anticuerpos cuando se usan los ligandos comentados
anteriormente. Generalmente, la fuerza inica y el pH son los factores ms importantes afectando la eficiencia de unin y
consecuentemente la elusin de las inmunoglobulinas de estos ligandos. Sin embargo, la temperatura y otros componentes son tambin
importantes en casos particulares. Para purificar anticuerpos especficos contra antgenos, hemos de inmovilizar el antgeno a un soporte
y lo utilizamos para purificar por afinidad las inmunoglobulinas que se unan a l.
Usos de la gama globulina
Las inmunoglobulinas, tambin conocidas como anticuerpos, son glucoprotenas producidas por clulas plasmticas que se originan en los
linfocitos B. La gammaglobulina endovenosa es una fraccin del plasma preparada por el mtodo de separacin de protenas de Cohn
constituida en su mayor parte por inmunoglobulina G. Es un medicamento inmunomodulador que acta como buffer o amortiguador
inmunolgico uso anticuerpos especficos

Uso de anticuerpos monoclonales

Que importancia y para que sirve el amortiguador de salina boratos
Inmunizacin y sangrado de animales (adyuvantes)
Respuesta primaria

Respuesta secundaria
Adyacentes en las vacunas
Escualeno
Clulas formadoras de anticuerpos
Seminario jerne
1. Diferencias entre:
Respuesta inmuno primaria
Respuesta inmune secundaria
2. Describir tcnica cunniham
3. Diferencias entre tcnica de jerne y cunniham
4. Clculos y resultados
Reacciones de precipitacin
1.
2.
3.
4.

Usos de la inmuno electroforesis en la clnica

Usos de la tcnica de mancin en la clnica
Usos contra inmunoelectroforesis
Tcnica de roquet