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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“Aglutinación pasiva”

● Sosa García Luis Francisco


GRUPO: 5FM01 EQUIPO 6
● Velasco Quijano Jessica Sayuri
INTRODUCCIÓN
➔ Específica
Interacción ➔ Reversible
➔ Rápida
➔ Espontánea

Reacción
➔ Complemento
Ag-Ac
Natural ➔ Citotoxicidad dependiente de anticuerpos
➔ Desgranulación de mastocitos
➔ Opsonización
Manifestación

➔ Precipitacion
Artificial ➔ Aglutinación
➔ Inmunoenzimáticas
➔ Inmunofluorescencia
La reacción de un antígeno particulado con su
anticuerpo correspondiente se visualiza por la
formación de “aglutinados”
Aglutinación pasiva

● Si el antígeno es
soluble

● El antígeno se puede
absorber física o
químicamente sobre
una partícula
Antigeno anticuerpo no aglutinación anti-anticuerpo Aglutinación

Fig.1.0 Proceso de hemaglutinación pasiva, en donde los eritrocitos son utilizados


como soporte de los antígenos solubles
Fig.2.0 Proceso de aglutinación pasiva
¿Cuando utilizar una reacción de aglutinación
pasiva?

● Cuando se pretende buscar anticuerpos


en el suero contra antígenos solubles y
haptenos
Fig.3.0 Aglutinación pasiva, diagnóstico
precoz de embarazo
● Diagnóstico precoz del embarazo

● Factor reumatoide

● Determinar proteína C reactiva

Fig.4.0 Aglutinación pasiva, diagnóstico de factor


reumatoide
OBJETIVO

● Realizar una prueba de aglutinación pasiva semi cuantitativa y cualitativa


utilizando eritrocitos y partículas de látex como soporte

● Desarrollar y analizar las pruebas de embarazo por cromatografía lateral, y por


aglutinación pasiva

● Realizar y analizar la prueba de diagnóstico de factor reumatoide

● Desarrollar y analizar la prueba de diagnóstico de proteína C


Fundamento

➔ Convertir una reacción de precipitación en una reacción de


aglutinación, para aumentar la sensibilidad de la prueba
Hemaglutinación

Los eritrocitos se acoplan químicamente con los antígenos y/ o haptenos , antes de reaccionar con los
antisuero problema.

C. ácido tánico
adhesión de moléculas en

anticuerpos contra
unión con moléculas solubles antígenos o el hapteno
eritrocitos

C. ácido cloruro cromico

Aglutinación
C. glutaraldehido
Desarrollo experimental
sensibilización de eritrocitos usando cloruro de cromo

Adicionar 0.2 ml de Agregar 0.2 ml de Crl3


Colocar 0.1 ml Mezclar
sulfametazina-albúmina
de eritrocitos
humana

agregar 20 ml de Resuspender 3 ml de
regulador TBS-G regulador de TBS-G lavar con solución Incubar 5 min. T.A.
salina, 4 veces
Desarrollo experimental
sensibilización de eritrocitos usando ácido tánico

Lavar con solución salina, 4 veces


Adicionar 3 ml de ácido tánico Incubar 10 min. baño
Colocar 3 ml de
maria a 37°C
eritrocitos

Colocar 1 ml de antígeno y 1 ml
Incubar 10 min. T.A. Mezclar de suspensión de eritrocitos Resuspender 3 ml de PBS
Desarrollo experimental
sensibilización de eritrocitos usando ácido tánico

Centrifugado Lavar con PBS-G Resuspender 20 ml de PBS-G


Decantar el sobrenadante
1,000 rpm/ 5 min.
Fundamento de la prueba precoz de embarazo
● Detección inmunológica de la gonadotrofina coriónica
humana (GCH) mediante la inhibición de la
hemaglutinación

● hemaglutinación pasiva orina

● Recubrimiento químico de eritrocitos con la GCH

● Interacción entre los eritrocitos recubiertos con GCH con


los anticuerpos, se dirigen hacia la hormona, generando
una hemaglutinación

● La preincubación del antisuero con la muestra problema


(orina), genera la neutralización de anticuerpo, por
efecto de la combinación con la GCH.

● El anticuerpo neutralizado no reacciona con la hormona


acoplada a los eritrocitos de carnero, entonces no hay
aglutinación.
Cromatografía de flujo lateral
➔ Técnica usada en prueba de
embarazo
➔ Alta sensibilidad
➔ Utiliza partículas de oro
coloidal y tiras de papel
cromatográfico de
nitrocelulosa o
PVDF(polifluoruro de
vinilideno)
➔ Se emplea el uso de
anticuerpos monoclonales
murinos (anti-hCG y anti-
inmunoglobulinas de ratón)
Desarrollo experimental
Diagnóstico precoz del embarazo;Método cualitativo

Enfriar orina centrifugar 3,000 rpm/5 min.


T1; Agregar 0.25 ml de suero Adicionar 0.25 ml de orina
anti-GCH, T2; 0.25 ml de
sol.testigo

Colocar gradilla/2hrs. T.A.


Observar agregar 1 gota de eritrocitos
sensibilizados
Desarrollo experimental
Diagnóstico precoz del embarazo;Método cuantitativo

T9

colocar 0.1 ml de solución salina agregar 0.1 ml de solución


Adicionar 0.1 de solución control
salina T1-T9 mezclar

colocarlos en una mezclar agregar 0.1 ml de suero anti-


gradilla/2 hrs/T.A. Adicionar 30 ml
GCH
Fundamento de la determinación de factor reumatoide

➔ Factores reumatoides que son un


grupo de anticuerpos de tipo IgM
son detectados mediante una
reaccion de aglutinacion.
➔ Es utilizado reactivo de latex que
tiene absorbidos anticuerpos IgG
(anti-IgM) y al mezclarse
directamente con el suero generan IgG
Anti-IgG
un aglutinado que es visible humana
macroscopicamente.
Fundamento de la determinación de la proteína C

➔ Es detectada por una reacción de


aglutinación pasiva

➔ Se utiliza reactivo de látex que posee


anticuerpos anti-PCR adsorbidos
sobre partículas inertes de látex

➔ La mezcla directa de reactivo de látex


genera la aglutinación de las
partículas de látex,quese visualizan
macroscópicamente
Desarrollo experimental
Determinación de factor reumatoide

preparar una dilución 1:20 de suero colocar 1 gota del suero 1:20 agregar una gota de reactivo látex-
problema en solución salina amortiguadora gamma globulina
de glicina

observar la presencia oscilar mezclar


de aglutinado
Desarrollo experimental
Determinación de Proteína C reactiva

T9

colocar 1 gota del suero 1:20 y 1:50 agregar una gota de reactivo de
preparar una dilución 1:5 y 1:50 de suero en solución salina latex-anti-PCR
amortiguadora de glicina

observar la presencia oscilar


de aglutinado mezclar
Resultados

PRUEBA 1 (+) PRUEBA 2 (+)


CONTROL (-) PARA PARA
CONTROL (+) EMBARAZO EMBARAZO
PARA PARA
INHIBICIÓN DE POR POR
INHIBICIÓN DE INHIBICIÓN DE INHIBICIÓN DE
LA LA
AGLUTINACIÓN LA LA
AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN AGLUTINACIÓN

Imagen 1.0. Prueba precoz de embarazo mediante el método de aglutinación pasiva


PRUEBA 1 PRUEBA 2
(+) (+)

Imagen 2.0. Prueba precoz de embarazo mediante metodo de cromatografia de flujo lateral
CONTROL (-)
Proteína C reactiva

PRUEBA (-) CONTROL (+)


Proteína C reactiva Proteína C reactiva

PRUEBA (-) CONTROL (+)


Factor Factor
reumatoide reumatoide

CONTROL (-)
Factor
reumatoide

Imagen 3.0. Determinación de factor reumatoide y proteína C reactiva por el metodo de


aglutinacion inversa
Gráfica 1.0. Determinación de factor reumatoide y proteína C reactiva por el método de
aglutinación inversa
Conclusiones

● La reacción antígeno- anticuerpo, genera un aglutinado

● La prueba precoz de embarazo mediante los métodos de


aglutinación pasiva y cromatografía de flujo lateral resultaron
positivas para ambas pacientes

● De acuerdo al análisis de ANOVA para las pruebas de factor


reumatoide y proteína C reactiva para el grupo de mujeres existe
diferencia significativa
Aplicación farmacéutica
Análisis general en el laboratorio de:

➔ Hormonas
➔ Drogas
➔ Fármacos
Bibliografía

● Rojas,Espinosa,O.(2017), ”Inmunología de memoria”.Editorial médica


panamericana.4ta edición. pp 258-274.
● Guia de tecnicas inmunologicas.(2010). Consultado el día 14 de octubre
de 2017 en http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/gt2010.pdf.