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Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas BUAP

Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Práctica 11

DETERMINACIÓN DE ANTIESTREPTOLISINAS

Laboratorio Inmunología
MC. Laura Martínez Pérez
Practica No. 11
DETERMINACIÓN DE ANTIESTREPTOLISINAS
Objetivo

Determinar el título de anticuerpos contra la estreptolisina “O” en el suero


problema

Introducción

Las infecciones por Estreptococos de grupo A constituyen cerca del 95 o/o de las
infecciones por estreptococos beta hemoliticos en el hombre. Dichas infecciones
son comunes particularmente en niños de edad escolar y en raras ocasiones
pueden dar lugar a serias complicaciones no supurativas como la Fiebre
Reumática y la Glomerulonefritis. Durante la invasión de los tejidos del paciente,
los estreptococos de Grupo A (y algunas sepas de los grupos C y G) producen
sustancias extracelulares de diferentes tipos. Una de dichas sustancias tiene
actividad enzimática y es capaz de producir lisis (hemolisis) de los eritrocitos
humanos y de conejo. Debido a que lábil en presencia de oxígeno, se le llama
estreptolisina O. Los anticuerpos que se producen contra esta Usina se llaman
Antiestreptolisinas O. A pesar de que el diagnóstico definitivo de la infección
estreptocócica aguda solamente puede hacerse mediante la demostración de la
bacteria por medio de cultiv, a menudo no se puede establecer esta evidencia, ya
sea porque se han utilizado antibióticos, porque se está en presencia de un
portador (11) o porque la bacteria ya no se encuentra en la faringe como sucede
en los casos subagudos y crónicos. La evaluación serológica es una manera muy
útil para estudiar estos pacientes, investigando la presencia de Antiestreptolisinas
O y otros anticuerpos antiestreptocócicos.

El examen por antiestreptolisinas O se basa en la capacidad de estos anticuerpos


en el suero del paciente, usado en distintas diluciones, para neutralizar una
preparación estandarizada de estreptoüsina O, impidiendo su actividad hemolftica.
El título es el último tubo que muestra ausencia de hemolisis. Todd estandarizó la
estreptoüsina O de tal manera que 0.5 mi justamente hemolina 0.5 mi. de una
suspensión de eritrocitos de conejo a 37°C. en una hora y consideró esta como
una dosis hemolítica mínima. El mismo después definió una unidad de
antiestreptolisina O como la cantidad de suero que justamente neutraliza 2.5 dosis
hemolíticas mínimas de estreptolisina O.

La mayor dilución de suero que no muestra hemolisis se considera como el título


de antiestreptolisinas O, el recíproco de este título se usa para informar los
resultados y se desginan como unidades Todd. (Estas unidades no deben
confundirse con las unidades de estreptolisina definidas en la estandarización de
la estreptolisina).

Metodología

Añadir a cada tubo 0.25 mL de una


Preparar a partir del suero problema Mezclar por agitación e incubar a 37°C
suspensión de eritrocitos al 5%.,
las siguientes diluciones iniciales: por 15 min.
mezclar e incubar a 37°C por 30 min.

a) 1:10 con 0.2 mL del suero problema


+ 1.8 mL de solución amortiguadora
b) 1:100 con 0.3 mL de la dilución 1:10 Mezclar suavemente y añadir a cada
Centrifugar los tubos a 2500 rpm por 2
+ 2.7 mL de solución amortiguadora tubo 0.25 mL de estreptolisina,
min..
c) 1:500 con 0.6 mL de la dilución EXCEPTO al tubo control (-).
1:100 + 2.4 mL de solución
amortiguadora.

Rotular los tubos de ensaye con


Comprobar la presencia de hemólisis
números del 1 al 12 y dos más como
A todos los tubos se les agregará una completa en el tubo control (+) y la
control (+) y control (-). A todos los
cantidad pequeña de suero. ausencia de hemólisis en el tubo
tubos se les agregará una cantidad
control (-)
pequeña de suero.

Resultados

El resultado fue positivo debido a que se presentó la aglutinación en el control


positivo.
Imagen 1. La aglutinación se hizo
visible en el círculo uno y circulo
dos.

Conclusión

Para concluir esta práctica realizamos únicamente el examen cualitativo, para


determinar si es que existe una infección por estreptococo. Ya que estas
enfermedades a menudo son seriamente graves se debe tener el máximo cuidado
al momento de hallarse un resultado positivo. Aunque en esta práctica solo
realizamos el examen cualitativo, porque no encontramos estreptococo en el
paciente, el examen cuantitativo es de igual importancia. Las infecciones por
estreptococo suelen ser relativamente frecuentes en la población, por lo que esta
prueba podría ser un examen de rutina en algún laboratorio en el que llegáramos a
servir de laboratoristas clínicos. Es importante saber hacer la prueba bien.

Bibliografía

ESTREPTOCÓCICA, A. I. Interpretación del examen por antiestreptolisinas o.

Flórez, E. L. (1964). Antiestreptolisinas en las pacientes embarazadas hipertensas.


Revista Colombiana de Obstetricia y Ginecología, 15(5), 471-480.

Cuestionario

1. ¿Qué son las antiestreptolisinas e indica el fundamento de la prueba?


La antiestreptolisina O (ASLO) es un anticuerpo dirigido frente a la
estreptolisina O, toxina producida por la bacteria conocida como
estreptococo del grupo A. ASLO y anti-DNasa B son los anticuerpos más
frecuentemente producidos por el sistema inmune del organismo en
respuesta a una infección por estreptococo del grupo A. Esta prueba mide
la cantidad de antiestreptolisina O en la sangre.

El estreptococo del grupo A (Streptococcus pyogenes) es la bacteria


responsable de los dolores de garganta y de otras varias infecciones, entre
las que se incluyen infecciones de la piel (pioderma, impétigo, celulitis). En
la mayoría de casos las infecciones por estreptococo pueden identificarse y
tratarse con antibióticos, resolviéndose satisfactoriamente.

Sin embargo, cuando la infección no causa signos o síntomas identificables,


no se trata o se trata de manera inadecuada, pueden aparecer
complicaciones (secuelas) post-estreptocócicas, es decir, fiebre reumática y
glomerulonefritis, especialmente en niños y adolescentes. A pesar de que la
incidencia de estas complicaciones ha disminuido sustancialmente, todavía
pueden observarse y pueden afectar al corazón, ocasionar disfunción renal
aguda, hinchazón de los tejidos (edema) e hipertensión arterial. La prueba
ASLO permite conocer si estas complicaciones pueden ser debidas a una
infección reciente por estreptococo del grupo A. El anticuerpo
antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en
títulos bajos, debido a que las infecciones estreptocócicas son comunes.
Sin embargo un título alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una
infección reciente producida por un estreptococo beta hemolítico de grupo
A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela.
Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por su reacción
con la estreptolisina O adsorbida sobre soporte inerte de látex. Los
anticuerpos antiestreptolisina reaccionan con la estreptolisina produciendo
una aglutinación visible macroscópicamente

2. Menciona dos motivos para montar el control negativo y dos motivos para
montar el control positivo
Control positivo: Para validar los resultados, evidenciar la presencia de
grumos visibles.
3. ¿Por qué la enzima estreptolisina se tiene que activar en el momento de
utilizarla?
Para que así la antiestreptolisina (anticuerpo dirigido frente a la
estreptolisina O) interactúe con la enzima.
4. ¿A partir de qué dilución, un suero positivo se considera sugestivo de
infección por Streptococcus?
Cuando la muestra dio positiva en la prueba cualitativa se realizaron
diluciones seriadas de la misma 1/2, 1/4, 1/8, 1/16, 1/32 y 1/64 con el buffer
correspondiente. Se reportó la mayor dilución que presentó aglutinación. La
sensibilidad de la prueba es de 200 Unidades Internacionales/mL, por lo
que se multiplicó el inverso del título por la sensibilidad para estimar la
concentración relativa.
5. ¿Qué complicaciones pueden presentarse debido a una infección por
Streptococcus pyogenes?
FIEBRE REUMÁTICA
GLOMERULONEFRITIS

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