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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE
CIENCIAS BIOLÓGICAS

Microbiología general

TINCIONES SELECTIVAS

Arellano Padilla Lizzeth Mylene


Cruz Buendía Estefany

6VF01
Profesores:
Sánchez Sánchez Antonio
Ortiz García Cesar Ismael
OBJETIVO
• Realizar varias técnicas de coloración selectiva que
permitirán observar algunas estructuras bacterianas.
1. Observación de la
capsula
1a. Método de la tinta china Metodología
Observar con
objetivo seco
Colocar fuerte y con el
cubreobjetos de inmersión
Hacer
suspensión en
Tomar la gota de agua
crecimiento de y mezclar con la
Gota de agua Klebsiella tinta china
del mismo pneumoniae
Con el asa tamaño a un
poner una gota lado
pequeña de
tinta china

Figura 1. Método de la
tinta china
Método de la tinta
China.
• Tinciones negativas (Tinta china).
• No son una verdadera tinción.
• El colorante contiene partículas finas de
carbono suspendidas en agua formado
un coloide.
• Permite visualizar las esporas como entes
refringentes sobre un campo de fondo
oscuro.
• Capsula: Compuesta en su mayor parte
de agua, y bajo porcentaje de
polisacáridos.
Klebsiella pneumoniae

Figura 2. Método de la tinta china, microscopía de Klebsiella


pneumoniae 100x
1b. Método del rojo Congo

Observar
con objetivo
Lavar y de
secar. inmersión.
Cubrir con
mordente de
Hacer frotis capsula (1
y secar al min.)
Suspenderlo aire
en la gota de
Cultivo de K. rojo Congo
pneumoniae
Gota
pequeña de
rojo Congo
Método del rojo • Es un colorante anicónico
Congo

• Mordente de cápsula
Solución de cloruro férrico 6%
Ácido acético glacial
Fenol 5%
Ficsina básica al 5% en agua
Figura 3: ejemplo de capsulas por
tinción rojo Congo.
-Zona clara, bacteria rojo, fondo azul
oscuro.-
Klebsiella pneumoniae

Figura 4. Método del rojo Congo, microscopía de Klebsiella pneumoniae 100x


2. Observación de la pared celular con la tinción de Knaysi

Observar al
microscopio
Poner con el objetivo
cubreobjetos de inmersión
Gota de
fucsina sobre
Lavar la preparación
Mordente de
Knaysi (10
Frotis de min.)
Bacillus
megaterium y
fijarlo al calor

Figura 5. Estructura con la tinción de


Knaysi
Observación de la pared
celular con la tinción de • El mordente, compuesto de ácido
Knaysi tánico(mordiente) y alumbre de potasio
(mordiente), engrosa la pared.
• La tinción para la pared celular se
aprovecha del hecho de que los
contenidos citoplasmáticos se pueden
hidrolizar diferencialmente, dejando la
pared sin afectar. Después de teñir se
puede observar la pared celular con
citoplasma como ahuecado

Figura 6. Tinción de Knaysi, microscopía de Bacillus


megaterium, 100x
Bacillus megaterium

Figura 7. Tinción de Knaysi, microscopía de Bacillus megaterium, 100x


3. Observación de esporas con la tinción de Shaeffer y Fulton

Observar al
microscopio
Lavar con el objetivo
de inmersión
Cubrir con
safranina (1
Lavar min.)

Cubrir con
verde de
Frotis de malaquita y
Bacillus calentar
megaterium y suavemente
fijarlo al calor

Figura 8. ejemplo de una endoespora con tinción


de schaeffer y fulton.
Observacion de esporas con la • Algunas bacterias son capaces de
tinción de Shaeffer y Fulton
desarrollar formas de resistencia
denominadas esporas como mecanismo
de defensa.
• Son impermeables a los colorantes.
• las endosporas se pueden teñir aplicando
calor a la preparación previamente
cubierta con una solución de colorante;
verde de malaquita.

Figura 9. Tinción de Shaeffer y Fulton Microscopía de


Bacillus megaterium. 100x
Bacillus megaterium

Figura 10. Tinción de Shaeffer y Fulton Microscopía


de Bacillus megaterium. 100x
4. Observacion de gránulos metacromáticos con la
tinción de Löeffer.

Observar al
microscopio con
Lavar y secar el objetivo de
inmersión.
Cubrir con azul
de metileno
Frotis de Löeffer (1 min.)
Corynebacterium
y fijarlo al calor
Observación de gránulos
metacromáticos con la tinción
de Löeffler
• Es una coloración simple
• Muchos microorganismos pueden
acumular gránulos de volutina, que se
tiñen con colorantes básicos tales como
azul de metileno (granulos
metacromaticos).
• Los gránulos deben su comportamiento
metacromático a la presencia de grandes
cantidades de polifosfato inorgánico

Figura 11. Tinción de Löeffler. Microscopía de Mycobacterium phlei.


100x
Mycobacterium phlei

Figura 11. Tinción de Löeffler. Microscopía de Mycobacterium phlei. 100x


• Se hizo uso de diversos métodos de tinciones
• Se observo distintas estructuras bacterianas
• Las estructuras bacterianas tienen afinidad a
ciertos colorantes por lo cual permite la
visualización de estructuras especificas

CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFÍA

• Microbiología general, Hans G. Schlegel. Editorial Omega pag 123-125


• Lockin, M. 1985. Manual de Microscopía. Editorial Labor. Barcelona, España. Pag. 135-137
• Manual de Microbiología práctica. Jorgue Ortigoza Ferado , Sandra Luz Ruiloba De León Frescas.
5ª edición. Ciudad de México, 2018.
• “Pared celular Bacteriana”. Publicado el 30 de abril de 2015 por Ramón Contreras. <<
https://biologia.laguia2000.com/microbiologia/pared-celular-bacteriana>>
Cuestionario
1. ¿Por qué crees que la capsula no se puede teñir?
Debido a la composición química de la capsula, no es posible que se retengan colorantes (tinta china y rojo
Congo)
2. Cite tres microorganismos que tengan capsula
• Streptococcus pneumoniae
• Klebsiella pneumoniae
• Haemophilus influenzae
3. ¿Cuáles es la naturaleza química y funciones de la capsula?
Hidrofilica.
Funciones. Protección contra la fagocitosis, adherencia, resistencia a la desecación, protección vs colorantes,
antibioticos, factor de patogenicidad (Ag K)
4. ¿tienen pared celular todas las bacterias?
No todas las bacterias tienen una pared celular . Por ejemplo las Micobacterias, no presentan la membrana
fosfolipídica de las GRAM negativas, pero contiene un 55% de lípidos, además está formada por un complejo
macromolecular de ácidos micólicos (exclusivos de este grupo y usados como carácter
taxonómico), arabinogalactano y peptidoglucano.
5. ¿Pueden teñirse con la tinción de Shaeffer y Fulton las esporas de actinomicetos o de hongos?
Si, es posible hacer la tinción sin embargo hay que considerar que el tiempo de calentamiento debe ser menor