REACCIONES DE PRECIPITACIN

INMUNODIFUCIN E INMUNOELECTROFORESIS
Q.F.B. CRISTINA DELGADO URBINA
 REACCIONES DE PRECIPITACIN
Reaccin de precipitacin.
Cuando un antgeno en solucin se agrega de manera progresiva a un antisuero potente, se forman precipitados del complejo
antgeno-anticuerpo.
El entrecruzamiento de antgenos y anticuerpos da origen a estructuras enrejadas tridimensionales, las que coalescen, en gran
parte a travs de la interaccin Fc-Fc, para formar grandes agregados que precipitan.
Se alcanza un ptimo de modo uniforme y se forma menos precipitado. En esta etapa puede demostrarse que el sobrenadante
contiene complejos solubles de antgeno (Ag) y anticuerpo (Ac), gran parte con composicin Ag4Ac3, Ag3Ac2 y Ag2Ac.
El exceso de antgeno son complejos de forma Ag2Ac, un resultado directamente atribuible a los dos sitios de combinacin
(bivalencia) de la molcula del anticuerpo IgG.
Los sueros contienen con frecuencia hasta el 10% de anticuerpos no precipitantes, los que son efectivamente monovalentes
debido a la presencia asimtrica de oligosacridos en uno de los brazos de unin al antgeno de la molcula de anticuerpo, que
bloquea de modo estereoqumico el sitio de combinacin.
Los precipitados francos solo se observan cuando los antgenos, y en particular los anticuerpos, estn presentes en
concentraciones bastante grandes.
Cuando se forman los complejos que no precipitan de manera espontnea, deben aplicarse mtodos ms sofisticados para
estimar el nivel de anticuerpos.
REACCIONES DE PRECIPITACIN
 REACCIONES DE PRECIPITACIN
Reaccin de precipitacin.
Los pequeos agregados formados cuando se mezclan soluciones diluidas de antgeno y anticuerpo crean
una nubosidad o turbidez, que puede determinarse por dispersin angular anterior de una fuente de luz
incidente (nefelometra).
Para la realizacin de estas tcnicas se requiere que tanto el Ac como el Ag se encuentren en un medio
fluido en el que sea posible la precipitacin del complejo Ag-Ac. Existen diferentes modalidades siendo las
principales:
1. Tcnica de precipitacin propiamente dicha.
2. Tcnica de difusin radial de Ouchterlony.
3. Tcnica de inmunoelectroforesis.
4. Tcnica de difusin radial simple de Mancini.
 REACCIONES DE PRECIPITACIN

Tcnica de inmunodifucin (difusin radial doble de

Ouchterlony).
Esta tcnica se realiza en placas de agar en donde se
practican pocillos, en uno de estos pozos se coloca el
suero o muestras a investigar y en el resto se coloca el
anticuerpo preparado frente a la sustancia que se
quiere identificar.
Cuando difunden, ambos sistemas se encontrarn y
se formar en la zona de equivalencia el complejo Ag-
Ac correspondiente que se hace visible en forma de
una lnea de precipitacin.
 REACCIONES DE PRECIPITACIN

Tcnica de inmunodifucin (difusin radial

doble de Ouchterlony).
En una preparacin que contenga varios
antgenos, se obtendrn mltiples lneas de
precipitado. La tcnica de Ouchterlony
permite identificar sustancias segn la
forma de unirse las lneas de precipitacin
de dos o varios sistemas.
 REACCIONES DE PRECIPITACIN

Tcnica de inmunoelectroforesis.
La inmunoelectroforesis es una tcnica que se realiza en
dos fases:
Primero se separa la mezcla de Ags por electroforesis.
Posteriormente el antgeno que se desea detectar se hace
reaccionar con un anticuerpo especfico colocado en un
pocillo lateral.
Por difusin llegan a encontrarse los antgenos y el
antisuero, apareciendo el complejo Ag-Ac visible en forma
de lneas de precipitacin que pueden ser estudiadas por
comparacin con un sistema estndar (Figura 9). En
Inmunologa clnica, esta tcnica puede utilizarse en la
identificacin de las protenas de
 REACCIONES DE PRECIPITACIN

Tcnica de
inmunoelectroforesis.
Posteriormente el
antgeno que se desea
detectar se hace
reaccionar con un
anticuerpo especfico
colocado en un pocillo
lateral.
 REACCIONES DE PRECIPITACIN

Tcnica de inmunoelectroforesis.
Incremento de precipitacin por inmunoelectroforesis con
contracorriente.
Esta tcnica puede aplicarse a antgenos que migran hacia el polo
positivo en la electroforesis en agar (si es necesario, los antgenos
pueden sustituirse por grupos con carga negativa para lograr este
fin).
El antgeno y el antisuero se colocan en orificios realizados en el
agar y se les aplica una corriente elctrica. El antgeno migra de
manera progresiva a la zona del anticuerpo donde sucesivamente
se une ms y ms a las molculas del anticuerpo, en esencia con
un aumento artificial de la concentracin efectiva de anticuerpo y,
en consecuencia, forma una lnea de precipitina.
 REACCIONES DE PRECIPITACIN
Tcnica de inmunoelectroforesis.
Tcnica de difusin radial simple de Mancini.
Esta tcnica se basa en la difusin cuando un antgeno
difunde desde un orificio al agar que lleva
incorporado un anticuerpo especfico, en un
comienzo esta presente en una concentracin
relativamente alta y forma complejos solubles.
Al difundir el antgeno se genera un gradiente de
concentracin, a medida que el antgeno difunde
ms, la concentracin disminuye de modo continuo
hasta que se alcanza el punto en el cual los reactantes
estn ms cerca de las proporciones ptimas (zona de
equivalencia), el inmunocomplejo se insolubiliza y se
forma un anillo de precipitacin.
ANOTA QUE SIGNIFICAN LOS SIGUIENTES CONCEPTOS,
BUSCA Y COMPARA LO QUE ESCRIBISTE:
252. Prozona.
253. Postzona.
254.Tcnica de precipitacin propiamente dicha.
255. Tcnica de difusin radial de Ouchterlony.
326. Tcnica de inmunoelectroforesis.
257. Tcnica de difusin radial simple de Mancini.