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PRCTICA No.3
DETERMINACIN CUANTITATIVA DE UREA EN SUERO
INTRODUCCIN
La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) ms
abundantes en el cuerpo. Los dems son la creatinina, el cido rico, el amonio y los
aminocidos. En otros tiempos todos eran medidos juntos (prueba del NNP), pero
debido a que el anlisis de cada componente por separado es bastante sencillo y
proporciona datos ms precisos, las pruebas individuales han sustituido al global casi
por completo.
La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del metabolismo de las protenas y slo se sintetiza en
e l hgado. Su concentracin es igual en todos los lquidos corporales, con excepcin de la sangre entera debido
a la diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere el suero o plasma a
la sangre entera para analizar el nitrgeno de urea.
Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios ms solicitados para detecta la
capacidad del rin para excretar desechos metablicos. La elevacin de estos valores s e emplea, junto con
otros, como indicador de la necesidad de dilisis en pacientes con insuficiencia renal crnica. La interpretacin
de los valores del nitrgeno de urea exige el conocimiento de la ingestin de protena exgena y de lquidos, y
las condiciones que pueden incrementar la produccin endgena (por ejemplo: la actividad muscular, un
traumatismo, la infeccin de una dieta muy restringida, el ayuno o la inanicin). Cualquiera de estas variables
pueden aumentar la concentracin sangunea o urinaria que en si mismo no es un reflejo real de la depuracin
renal de urea.
Pueden usarse dos pruebas, con las debidas precauciones e la interpretacin, como indicadores aproximados
de mejora o deterioro de la funcin renal del individuo. Aunque las determinaciones de urea es mucho menos
especfica que de la creatinina srica, es de uso comn, particularmente en pediatra, como una prueba de
rutina para la funcin renal y para conocer algo sobre el estado de hidratacin del individuo. Grados menores de
disfuncin renal requieren anlisis ms sostificados como las pruebas de depuracin.
UREA COMO PRODUCTO FINAL EN EL SER HUMANO
Un ser humano moderadamente activo que consume cerca de 300 g de carbohidratos, 100 g de grasa y 100 g
de protenas diariamente, debe excretar aproximadamente 16.5 g de nitrgeno al da, 95% en al orina y 5% en
las heces.
Para las personas que consumen dietas occidentales, la urea sintetizada ene l hgado, liberada hacia la sangre
y depurada por los riones, constituye de 80-90% del nitrgeno excretado.
FORMACIN DE LA UREA
La sntesis de un mol de urea requiere de tres moles de ATP, un mol de amoniaco y el nitrgeno de alfa amino
del aspartato.
Enzimas que catalizan las reacciones:
1. Carbamoil fostafo sintasa I
2. Orinitin transcabamoilasa
3. Arginasa
4. Argininosuccinasa
5. Acido argininosuccnico sintasa.
De los seis aminocidos participantes el N- acetilglutamato funciona nicamente como un activador enzimtico.
Los dems sirven como portadores de tomos que en ltima instancia se convierten en urea.
En los mamferos, la funcin principal de la ornitina, la citrulina y al argininosucinato est en la sntesis de urea.
La biosntesis de urea es un proceso cclico. La ornitina consumida en la reaccin es degenerada en la reaccin
5 y no hay prdida ni ganancia total de ornitina, citrulina, argininosuccinato o arginina. Sin embargo el ion
amonio, CO2 y ATP y aspartato s se consumen, algunas reacciones de la sntesis de urea tiene lugar e n la
matriz mitocondrial en tanto que otras se realizan en el citosol.
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FISIOLOGA
La urea se forma a travs de un proceso de degradacin protenica, la protena se transforma a partir de
aminocidos en amoniaco (desaminacin oxidatixa), como un producto final y de ah en urea (ciclo de la
ornitina) dentro del hgado.
Debido a que el organismo no utiliza urea, es trasportada en la sangre hasta que es excretada por va urinaria.
Sus concentraciones varan fisiolgicamente, dependiendo de una manera directa del consumo de protenas en
la dieta (exgeno) y del estado de hidratacin (proporcin de soluto a solvente ene l cuerpo), o de modo
indirecto por al tasa del catabolismo tisular (rpida degradacin corporal, que incrementa el desperdicio de
nitrgeno), o por la tasa de anabolismo tisular (disminucin de las concentraciones por un mayor ndice de
construccin tisular, como sucede durante al gestacin o convalecencia. La urea se excreta en el filtrado
glomerular y se reabsorbe (probablemente por difusin) en el tbulo de la neurona. Slo se excreta una fraccin
de todo el material de desperdicio contenido en el filtrado glomerular, pero a causa de que la urea se reabsorbe
en los tbulos de manera deficiente, se reabsorbe poca urea, esto es un efecto benfico.
PATOLOGAS RELACIONADAS:
HIPERATOZEMIA
Azotemia: es el exceso de urea o de otros productos nitrogenados en la sangre. Slo se producen elevaciones
consistentes de la concentracin del nitrgeno de urea cuando la funcin renal, especficamente el IFG, est
disminuido de 40-60 por ciento. El ndice de filtracin glomerular puede alterarse no slo por disfuncin renal
sino por tambin por desviacin prerrenal de agua (prdida de volumen circulante por una causa cualquiera), la
cual conduce a un aumento de retencin de la urea. Por lo general, la azotemia se presenta debido a prdida de
volumen circulante, catabolismo protenico excesivo o deterioro de la funcin renal. La interpretacin del
incremento en la urea sangunea depende del conocimiento de ambos grupos de factores, renales y
extrarrenales, y su importancia relativa. Slo puede considerarse ciertamente como tal la que supere los 50 mg,
a no ser que no se conozcamos para el individuo cifras anteriores ms bajas. Hay que tener en cuenta tambin,
como en otro anlisis, comprendidas entre 30 y 50, sern claramente patolgicas. Segn el grado, puede
hablarse de una retencin incipiente la que llega hasta 80, moderada y 100, grave entre 100 y 150, y gravsima
por encima de 150.
Urea alta neuroptica y urolgica (uremia renal y posrenal).
La hiperazotemia es el signo humoral ms simple de la insuficiencia renal orgnica y constituye la uremia
genuina en clnica. Pero hay que tener bien clara la idea de que no toda la urea alta significa uremia ni
nefropata, muchas veces la elevacin de la urea obedece a causas extrarrenales.
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Uremia aguda
Va acompaada de anuria o oliguria con orina densa. Aunque rpidamente se alcanzan cifras muy altas o muy
altas de urea, el cuadro es, a veces irreversible.
- En la glomerulonefritis aguda en la que, a diferencia de la crnica, la reaccin xantroproteica es normal, pues
salvo la anuria absoluta no existe retencin de sustancias aromticas.
- En la nefropata anrica (nefrosis de neurona distal, anuria traumtica, etc), el en shock, necrosis muscular
isqumica, shocks hemolticos o transfusionales.
- En la nefrosis necrotizante por el sublimado y otros txicos.
Uremia Crnica
Con una cantidad normal de orina o con poliuria compensadora. La orina tiene una densidad densa.
Corresponde a lesiones renales avanzadas e irreversibles, de ah la razn pronostica para separar este grupo
del anterior.
- En la glomrulonefritis crnica, aqu la reaccin xantoproteica de cifras altas.
- En la esclerosis renal primaria o secundaria.
- En las nefropatas quirrgicas (hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis, rin poliqustico, etc.)
- En la nefropata calcra de la ostetis fibrosis qustica avanzada, tambin en el mieloma mltiple se observa a
menudo insuficiencia renal, en un caso neutro, la retencin ureica alcanz 360 mg.
Urea alta extrarrenal o prerrenal
Es decir, sin nefropata demostrable, aunque puede existir, por lo menos en algunos casos, una insuficiencia
renal funcional. Es un trastorno irreversible en al eliminacin renal y no da lugar ala uremia propiamente dicha.
Se presenta siempre en forma aguda o subaguda, alcanzndose rpidamentea veces cifras muy altas,
superiores a la azotemia neuroptica. Suele acompaarse de oliguria, con orina de densidad normal o
concentrada y de color oscuro.
La urea en orina se encuentra en proporcin normal, mientras que decrece la concentracin de sodio (<15
mEq/l). Estos hallazgos permiten diferenciar la uremia prerrenal de la debida insuficiencia renal. Existen dos
grandes mecanismos, a menudo coincidentes en un mismo enfermo, de uremia prerrenal, por dficit de oferta
de sangre al rin y por hiperproduccin. La creatinina plasmtica es alta en la uremia prerrenal circulatoria y
normal en al debido a hiperproduccin (sangre retenida en intestino,infartos o neumonas masivas, etc)
En la insuficiencia circulatoria: se trata de una retencin prerrenal por dficit de oferta hemtica al rin.
En la insuficiencia cardiaca congestiva. Como uno ms de los signos de estasis visceral. Se alcanzan valores
de 60,80 y hasta 100 mg de urea.
- En la insuficiencia perifrica, en al hipotensin del shock, colapso txico o infecciosos, etc.
- En la deshidratacin natropnica (uremia por falta de sal) por vmitos, diarreas, lavadosgstricos, leo,
sudoracin profusa, quemaduras extensas, etc. Responde rpidamente a la recloruracin del enfermo.
Recurdese que en los pacientes renales pueden complicar su uremia y aumentar exageradamente la retencin
ureica por este factor extrarrenal debido a los vmitos.
En las infecciones, aunque no existen las circunstancias anteriores, por el hecho de la protelisis mstica
aumentada. Suele tratarse de cifras moderadas, inferiores a los 100 mg. Esto se ve especialmente en la
neumona, en ciertas sepsis, a veces en la difteria o escarlatinas graves, en el tifus exantemtico, etc.
En las hemorragias digestivas con retencin y desintegracin el intestino de grandes cantidades de sangre.
En los cuadros neurolgicos agudos: en los ictus por hemorragia cerebral, en al intoxicacin por xido de
carbono, en traumatismos cerebrales, etc.
En el coma diabtico: a veces se trata de una verdadera uremia neuroptica por glomerulosclerosis diabtica,
pero generalmente se debe a una insuficiencia renal funcional con prdida de la funcin de ahorro de base y
natropenia subsiguiente. Interesa conocer este hecho para no diagnosticar el coma urmico por el simple
hallazgo de una urea alta y para tratarlo con suero salino, adems hacerlo con la insulina.
Tiroxicosis, debido al catabolismo protenico excesivo, el cual permite aumentar el nitrgeno de urea en
diabetes sacarina no controlada, hiperfuncin suprarrenocortical y algunas enfermedades neoplsicas.
Rechazo de trasplante de un rin, debido ala reduccin de la filtracin urinaria.
Los atletas despus de una actividad extraordinaria, debido a la degradacin muscular excesiva.
Obstruccin intestinal, debido a una prdida de volumen circulante por el tercer espacio, para lquidos en el
intestino.
DISMINUCIN DE UREA
La disminucin de urea tiene escaso significado clnico, ya que no es una sustancia necesaria para el
funcionamiento del organismo. Los valores bajos se encuentran con menos frecuencia que los elevados. Se ha
sugerido que una concentracin disminuida de nitrgeno de urea puede ser signo de un pronstico favorable,
debido a que indica una funcin renal normal con excrecin adecuada.
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1. Cualquier trastorno con aumento de la secrecin de hormonas andrgenas o del crecimiento, tal vez debido al
efecto anablico de estas hormonas.
2. Embarazo normal, relacionado con:
Aumento de la circulacin renal plasmtica y del IFG, secundario a la expansin del volumen plasmtico.
El estado anablico del cuerpo.
3. Insuficiencia heptica grave, en particular la que acompaa ala obstruccin de la circulacin en al vena porta,
debido a la incompetencia del hgado para convertir el amoniaco en urea. Cabe esperar un incremento
concomitante en la concentracin sangunea de amoniaco.
4. Cambios rpidos en la hidratacin como: Rehidratacin rpida cuando se han agregado compuestos no
nitrogenados ala solucin intravenosa. El paciente que ha estado sobrehidratado y despus sometido a una
diuresis rpida. La disminucin del nitrgeno d e urea que se relaciona con cambios rpidos en al hidratacin,
es en si misma temporal y por lo comn slo tiene inters acadmico.
5. Es un hallazgo raro que puede ocurrir en:
Ingesta elevada de bebidas o administracin endovenosa abundante de lquidos.
Durante El embarazo, por aumento de filtrado glomerular.
En hepatopatias graves, fulminantes, con insuficiencia de sntesis de urea.
6. Tambin en:
Acromegalia.
Uso de esteroides anablicos.
Enfermedad celaca.
Aviso clnico:
Si un paciente se encuentra confuso, desorientado o como convulsiones, se debe verificar La urea, ya que su
elevacin puede explicar los sntomas.
En la nefropata crnica, el BUN se correlaciona mejor con los sntomas de uremia que la creatinina srica.
El valor pnico del BUN es mayor de 100 mg / dl.
EN ANLISIS CLNICOS
La urea Es el principal metabolito de las protenas. Los valores oscilan entre 16 y 45 mg/dl . Se suele expresar
como BUN o nitrgeno ureico sanguneo (urea = BUN x 2,146). Se cuantifica mediante una prueba
espectrofotomtrica cintica.
Su aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a aumento del catabolismo
proteico, a disminucin de la perfusin renal (shock, deshidratacin, insuficiencia cardiaca, sndrome
hepatorrenal), a insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crnica o a insuficiencia renal postrenal por
obstruccin.
Aunque la urea sangunea es un parmetro muy utilizado en la valoracin de la funcin renal, es poco sensible,
ya que slo se eleva cuando se ha perdido ms de la mitad de la funcin renal, y no demasiado especfica. La
urea sangunea disminuye en situaciones de hemodilucin y en la insuficiencia heptica, ya que se sintetiza en
el hgado.
La uremia es mejor evaluada en conjunto con la creatinina. Tanto en la azotemia prerenal y postrenal el BUN
est ms elevado que la creatinina. Sin embargo en el 88% de los nios deshidratados por gastroenteritis
quienes presentan una acidsis metablica presentan concentraciones de BUN < de 18 mg/dl.En la enfermedad
renal progresiva crnica, cerca del 75% del parmquima renal es destruido antes de que se desarrolle la
azotemia.
El nitrgeno ureico refleja el radio entre la produccin de urea y su depuracin. El BUN aumentado puede ser
debido al aumento o disminucin de la produccin de excrecin. A pesar de que la creatinina es considerada la
prueba ms especfica para evaluar la funcin renal, se utilizan la mayora de las veces juntos.
Valores normales: 16-45 mg /dl
Preparacin del paciente: ayuno de 8 hrs
Muestra: Suero o plasma.
Metodologa: Espectrofotometra
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INTERFERENCIAS:
Se puede reducir el nivel del BUN si se combina con una dieta con pocas protenas y abundantes
carbohidratos.
El BUN normalmente es bajo en nios y mujeres debido a que en su masa muscular es menor que la del
varn adulto.
Al final del embarazo y durante al lactancia el BUN se eleva ya que aumentan el uso de protenas.
Los ancianos pueden padecer BUN elevado cuando su rin no concentra al orina de manera adecuada.
Al principio del embarazo el BUN puede disminuir tambin por hidremia fisiolgica.
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Medicamentos:
- Aumentado: Allopurinol, aminocidos, anfotericina B, captotril, carbamacepina, cimetidina, aspirina,
cisplatino, ciclosporina, furosemida, gentamicina, neomicina, tetraciclina, hidroclorotiazida, interleukina 2,
pentamidina, tertratolol, ketoprofeno.
- Disminuido: Hormona de crecimiento, prednisona, cido ascrbico, heparina, amikacina, iodoacetato,
parametasona, fenotiazinas.
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PRINCIPIO DEL METODO
La urea presente en la muestra reacciona con el o-ftalaldehido en medio cido originando un complejo
coloreado que puede cuantificarse espectrofotomtricamente:
a Isoindolin ftaldehdo o Urea
H
+
+
La intensidad del color formado es proporcional a la concentracin de urea en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLNICO
La urea es el resultado final del metabolismo de las protenas; se forma en el hgado a partir de su destruccin.
Puede aparecer la urea elevada en sangre (uremia) en dietas con exceso de protenas, enfermedades renales,
insuficiencia cardaca, hemorragias gstricas, hipovolemia y obstrucciones renales.
El diagnstico clnico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clnicos y de laboratorio.
MATERIAL
4 sistemas vacutainer (aguja y jeringa)
4 ligaduras
4 tubos vacutainer con heparina
1 gradilla
4 tubos de ensaye (13x100ml)
Palillos
2 pipetas Pasteur con bulbo
1 pipeta de 100L
3 pipetas de 1ml
EQUIPO
Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 340 nm.
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
MUESTRAS BIOLGICAS
Suero o plasma heparinizado: No usar sales de amonio o fluoruro como anticoagulantes.
Orina: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por 50
(factor de dilucin); Evitar el crecimiento bacteriano, manteniendo el pH < 4.
*La urea es estable 5 das a 2-8C.
REACTIVOS
R 1 o-Ftalaldehido 4,8 mmol/L
R 2 Solucin borato 87 mmol/L
UREA CAL Patrn primario acuoso de Urea 50 mg/dL
PRECAUCIONES
R2: Corrosivo (C). R35: Provoca quemaduras graves .S26: En caso de contacto con los ojos, lvense
inmediatamente y abundantemente con agua y acuda a su medico. S30: No echar jams agua a este producto
.S45: En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al mdico (si es posible, mustrele la etiqueta).
CONSERVACIN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del vial, cuando
se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de la luz y se evita su contaminacin. No usar
reactivos fuera de la fecha indicada.
UREA CAL: Una vez abierto, es estable 1 mes si se mantienen los viales bien cerrados a 2-8C, protegidos de
la luz y se evita su contaminacin.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
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- Presencia de partculas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 510 nm > 0,20.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . 510 nm (500-550)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... .1 cm paso de luz
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37C
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada.
A) Cintica
1. Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Patrn Muestra
R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrn (L) -- 50 --
Muestra (L) -- -- 50
2. Mezclar e incubar 1 minuto y aadir:
R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0
3. Mezclar, incubar a 37C y leer las absorbancias a 1 minuto (A
1
) y a los 2 minutos (A
2
).
4. Calcular el incremento de la absorbancia A= A
2
A
1
.
dl mg calibrador Conc
Calibrador A
Muestra A
/ ) . ( 50
) (
) (
=
A
A
de Urea en la muestra.
B) Punto final
1. Pipetear en una cubeta:
Blanco Patrn Muestra
R 1 (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrn (L) -- 25 --
Muestra (L) -- -- 25
2. Mezclar y aadir:
R 2 (mL) 1,0 1,0 1,0
3. Mezclar e incubar 15 minutos a 37C.
4. Leer la (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
dl mg calibrador Conc
Calibrador A
Muestra A
/ ) . ( 50
) (
) (
=
de urea en la muestra
10 mg/L urea BUN dividido por 0,466 = 21 mg/L de urea = 0,36 mmol/L urea
.
Factor de conversin: mg/dL x 0,1665 = mmol/L.
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y
Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y
el calibrador.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que
los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L)
Orina: de 20 a 35 gr/24 horas
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores
de referencia.
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CARACTERSTICAS DEL MTODO
Rango de medida: Desde el lmite de deteccin de 0,70 mg/dL hasta el lmite de linealidad de 200 mg/dL. Si la
concentracin es superior al lmite de linealidad, diluir la muestra 1/2 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado
final por 2.
Precisin:
Intraserie (n=20)
Media(mg/D) 43,2 145
SD 1,51 1,10
CV (%) 3,49 0,76
Sensibilidad analtica: 1 mg/dL = 0.00459 A.
Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemticas significativas cuando se
comparan con otros reactivos comerciales (x). Los resultados obtenidos con 50 muestras fueron las siguientes:
- Coeficiente de correlacin (r):0.9884
- Ecuacin de la recta de regresin: y=0.975x+0.6
Las caractersticas del mtodo pueden variar segn el analizador utilizado.
INTERFERENCIAS
Como anticoagulante se recomienda la heparina. En ningn caso deben utilizarse sales de amonio o fluoruro.
Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinacin de la urea
NOTAS
1. UREA CAL: Debido a la naturaleza del producto, es aconsejable tratarlo con sumo cuidado ya que se puede
contaminar con facilidad.
2. El material empleado as como el agua destilada que se utilice deben estar libres de amoniaco y/o sus sales.
3. La calibracin con el Patrn acuoso puede dar lugar a errores sistemticos en mtodos automticos. En este
caso, se recomienda utilizar calibradores sricos.
4. Usar puntas de pipeta desechables limpias para su dispensacin.
5.SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de este reactivo en distintos
analizadores.
2
RESULTADOS Y DISCUSIONES
Tabla de resultados: 13 sujetos
Intraserie (n=20)
41,9 147
0,80 2,83
1,92 1,92
Sujetos Urea mg/dl
Braulio 25
Braulio 19.45
Zara 23.5449
Jazz 20.8994
Miriam 16.9312
Claudia 4.7619
Silvia 14.76
Mirna 17.61
Marian 25.71
Paco 15.25
Nayelly 23.21
Grecia 21.42
Josue 25.05
Media 19.5074923
Desviacin estndar 5.79727617
C.V. 29.718203
x + 25.3047685
x - 13.7102161
2 11.5945523
x + 2 31.1020446
8
Grfica de linealidad de determinacin de Urea
En esta tabla y grficos se integraron
tanto los resultados obtenidos en
sangre como en orina. Como se puede
observar en la tabla y en el grfico los
datos se encuentran muy dispersos.
Se realiz la grfica de Levey-Jennings
tambin y ah se pude ver como uno
de los datos incluso rebasa el lmite de
2, por lo cual este dato se eliminar
para tener un dato de referencia de
intervalo ms confiable. Pero antes se
analizaran los resultados de sangre y
orina por separado.
Grfica de Levey-Jennings de determinacin de Urea
Tabla de resultados de suero:
Suero
Sujetos Urea mg/dl
Braulio 25
Zara 23.5449
Jazz 20.8994
Miriam 16.9312
Claudia 4.7619
Silvia 14.76
Mirna 17.61
Josue 25.05
Media 18.569675
Desviacin estndar 6.78546792
C.V. 36.5405852
x + 25.3551429
x - 11.7842071
2 13.5709358
x - 2 7.91293997
3 58.5224769
x + 3 78.0299692
x - 3 -39.0149846
Determinacin cuantitativa de Urea (Datos completos)
2.66709
7.66709
12.66709
17.66709
22.66709
27.66709
Braulio Braulio Zara Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Marian Paco Nayelly Grecia Josue
Sujetos
U
r
e
a
m
g
/d
l
Grfica de Urea en sangre (datos compl etos)
2.73309
7.73309
12.73309
17.73309
22.73309
27.73309
Braulio Zara Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Josue
Sujetos
U
r
e
a

m
g
/
d
l
Grfica de Levey-Jennigs de determinacin de Urea
36.8993 UCL
19.5075 CL
2.1157 LCL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
Braulio Braulio Zara Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Marian Paco Nayelly Grecia Josue
Sujetos
U
r
e
a

m
g
/
d
l
9
Grfica de Urea en Sangre (Datos compl etos)
38.9261 UCL
18.5697 CL
-1.7867 LCL
-8.5725
-3.5725
1.4275
6.4275
11.4275
16.4275
21.4275
26.4275
31.4275
36.4275
41.4275
Braulio Zara Jazz Miriam Claudia Silvia Mirna Josue
Sujetos
U
r
e
a

m
g
/
d
l
x + 2 32.1406108
x - 2 4.99873915
3 20.3564038
x + 3 38.9260788
x - 3 -1.78672877
En los datos de sangre completos (de todos los sujetos, incluyendo el que se sali de parmetros), se pude
observar como el dato del sujeto Claudia, se sale por completo de la tendencia de los datos que van de
aproximadamente 14 a 25mg/dl de glucosa, incluso al realizar el grfico de Levey-Jennings con estos datos, se
puede observar como este dato alcanza a llegar al lmite de -2, razn por la cual se realizar un nuevo grfico
con estos datos eliminando el dato que se sale de los parmetros como se haba mencionado anteriormente
para obtener datos ms precisos.
Tabla de resultados de orina:
Orina
Sujetos Urea mg/dl
Braulio 19.45
Marian 25.71
Paco 15.25
Nayelly 23.21
Grecia 21.42
Media 21.008
Desviacin estndar 3.95945956
C.V. 18.8473894
x + 24.9674596
x - 17.0485404
2 7.91891912
x + 2 28.9269191
x - 2 13.0890809
3 11.8783787
x + 3 32.8863787
x - 3 9.12962132
En los datos de urea se puede observar como uno de los datos (el de Paco) se sale de la lnea de tendencia, sin
embargo en este caso no se eliminar el dato debido a que se cuenta con muy pocos datos en total y en la
Grfico de Urea en Orina
14.204
16.204
18.204
20.204
22.204
24.204
26.204
28.204
Braulio Marian Paco Nayelly Grecia
Sujetos
U
r
e
a

m
g
/
d
l
10
grfica de Levey-Jennings se puede observar que este dato apenas se sale de los datos de -1 y an entra
dentro de los datos de -2, por lo que se podr decir que entra en los parmetros, sin embargo en la hoja de
datos de especificacin para los anlisis dice que la orina que se debe utilizar para la determinacin de orina en
sangre debe de ser de una muestra de por lo menos 24hrs debido a que lo que se analiza en esta prueba es el
sedimento para determinar la presencia de clulas o cristales (elementos tradicionales), razones por las cuales
estos datos no son vlidos y por lo cual en la grfica final no se tomarn en cuenta tampoco.
Grfico de Levey-Jennigs de Urea en Orina (Datos completos)
32.89 UCL
21.01 CL
9.13 LCL
5.15
10.15
15.15
20.15
25.15
30.15
35.15
1 2 3 4 5
Sujetos
U
r
e
a

m
g
/
d
l
Tabla de resultados corregidos de
Urea en sangre:
Sangre (Suero)
Sujetos Urea mg/dl
Braulio 25
Zara 23.5449
Jazz 20.8994
Miriam 16.9312
Silvia 14.76
Mirna 17.61
Josue 25.05
Media 20.5422143
Desviacin estndar 4.01746624
CV 19.5571236
X + 1 24.5596805
X - 1 16.5247481
2 8.03493247
X + 2 28.5771468
X - 2 12.5072818
3 12.0523987
X + 3 32.594613
X - 3 8.48981558
GRFICA DE UREA EN SUERO
13.731
15.731
17.731
19.731
21.731
23.731
25.731
Braulio Zara Jazz Miriam Silvia Mirna Josue
SUJETOS
U
R
E
A

m
g
/
d
L
11
Clculos (ejemplos):
MUESTRA ABSORBANCIA (1MIN) ABSORBANCIA (2MIN) DIFERENCIA DE A (A)
PATRN 0.312 0.330 0.018
BRAULIO 0.572 0.581 0.009
dl mg Urea / 25 50
018 . 0
009 . 0
= =
Como se pude observar en la grfica de linealidad algunos datos varan, sin embargo en la grfica de Levey
Jennings se pude observar como todos los datos entran en el rango de 2 y cumplen con las reglas de
Schewart para la grfica de control de calidad de Levey Jennings, por lo que nuestro lmite de confianza en el
intervalo de 2 al 95% de confianza sera de 12.51 28.58 19.56%
GRFICA DE LEVEY JENNINGS DE UREA EN SUERO
33.0566 UCL
20.5422 CL
8.0278 LCL
3.856
8.856
13.856
18.856
23.856
28.856
33.856
38.856
1 2 3 4 5 6 7
SUJETOS
U
R
E
A

m
g
/
d
L
Comparacin de datos con la t de student:
H0 = 15 45 mg/dl
H1 = 12.51 28.58 19.56% (mg/dl)
-
Hiptesis Nula: H0 = H1
-
Hiptesis Alterna: H0 H1
Aplicacin:
= 20.54
= n 1 = 7 1 = 6
= 4.017
del inserto () = 30
768527002 . 5
6
017 . 4
30 54 . 20
=

=
n
x
t

Despejando:
12
Adems sabiendo que la funcin t de Student es simtrica respecto al eje x = 0, la probabilidad acumulada a la
izquierda de -x es igual a la probabilidad acumulada a la derecha de x:
Sustituyendo en la expresin anterior, nos da el resultado:
Donde el valor:
3
Por lo tanto: la probabilidad de que una variable t de Student de 6 grados de libertad deja a la izquierda de
-5.77:
) 77 . 5 (
6
< t P
Los valores negativos no vienen en la tabla, pero segn lo anterior:
) 77 . 5 ( 1 ) 77 . 5 (
6 6
< = < t P t P
En la tabla encontramos:
Si observamos en la tabla para 6 grados de libertad 5.7685 se encuentra cerca de 0.0005 y si se aplica regla de 3
entonces tenemos que:
0004803 . 0 10 8403 . 4
9588 . 5
0005 . 0 7685 . 5
4
= =

As que:
4
10 8403 . 4 ) 77 . 5 (

= < t P
Por lo tanto:
0004803 . 0 1 10 8403 . 4 ) 77 . 5 (
4
= = <

t P
Con lo que obtenemos:
9995 . 0 ) 77 . 5 (
6
= < t P
Lo que indica que la probabilidad de que el intervalo del inserto sea igual a la de nuestros datos es del
99.95%, por lo tanto se acepta la hiptesis nula y por lo tanto se aplicara nuestro intervalo para el anlisis de
los datos el cual como se observ en las tablas de linealidad y sobre todo en la de Levey-Jennings se pude
observar como todos los datos entran dentro de nuestro rango en una probabilidad del 95% para 2
CONCLUSIONES
En esta prctica se logr hacer la determinacin de urea ( la cual es el resultado final del metabolismo de las
protenas) en suero (debido a que si se utiliza la sangre entera, es decir plasma + suero, en estos hay una
gran diferencia de valores que existe entre el suero y los eritrocitos, por lo que se prefiere el suero o en su
defecto el plasma para esta determinacin) mediante una reaccin colorimtrica en donde la urea presente en
las muestras reaccion con el o-ftalaldehido en medio cido (solucin de boratos, que son sales o steres de
cido brico) originando as un complejo coloreado (rosa) que se cuantific espectrofotomtricamente dando
as como producto a la isoindolina, la cual le proporcion la coloracin a la muestra y de esta manera la
intensidad del color formado por la reaccin fue proporcional a la concentracin de urea en la muestra
ensayada. De esta manera al realizar la lectura en el espectrofotmetro logramos obtener las absorbancias
en el espectro de luz visible en verde (que va de 500 560nm y nuestra lectura fue en 510nm) de urea de
cada muestra y con ayuda de las frmulas para los clculos.
Tambin con la prctica se logr observar como para cada anlisis se deben realizar los procedimientos
adecuadamente y de la forma determinada para cada anlisis para que no tengamos discrepancias en
nuestros resultados como ocurri con las muestras de orina.
Ya que ninguno de los sujetos a prueba presentaron datos de urea elevada se pueden descartar entonces
casos de uremia y por lo tanto de enfermedades renales, insuficiencia cardaca, hemorragias gstricas,
13
hipovolemia y obstrucciones renales. En el caso del dato que fue eliminado por su baja concentracin de urea
(4.7619), no es de gran importancia clnica ya que la urea no es una sustancia necesaria para el
funcionamiento del organismo y segn la literatura se ha sugerido que una concentracin disminuida de
nitrgeno de urea puede ser signo de un pronstico favorable, debido a que indica una funcin renal normal
con excrecin adecuada.
REFERENCIAS

1
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Govantes, B.J. Dr, Lorenzo, V.P Dr, Manual Normon , 8 Edicin, Editorial laboratorios Normon S.A, Departamento de
publicaciones cientficas, Espaa, 2007.
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Murray, R.K, Bioqumica de Harper, 14 Edicin, 2 reimpresin, Editorial el manual moderno, Mxico, 1997.
Tietz N. W. Clinical Guide to Laboratory test, edited by W.B. Saunders Company, third edition, United States of America
,2002.
Treseler, K.M. Laboratorio clnico y pruebas de diagnostico, 1a Edicin, traducida de la 3 edicin en ingles, Editorial el
manual moderno, Mxico, 1999.
http://bq.unam.mx/~evazquez
www.farestaie.com.ar
2
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Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
3
http://es.wikibooks.org/wiki/Tablas_estad%C3%ADsticas/Distribuci%C3%B3n_t_de_Student