ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

PRACTICA N° 9
TEMA: Determinación enzimática de Urea en suero
sanguíneo

CURSO: Bioquímica II – Laboratório.

DOCENTE: Q.F. León Mejía, Enrique.

TURNO: Mañana CICLO: VI

ALUMNA: Villanueva Velasquez, Liseth Madelein

FECHA DE ENTREGA: 29 de marzo de 2018

DETERMINACIÓN ENZIMATICA DE UREA EM SUERO SANGUINEO
INTRODUCCION

La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) más

abundantes en el cuerpo. Los demás son la creatinina, el ácido úrico, el amonio
y los aminoácidos. En otros tiempos todos eran medidos juntos (prueba del
NNP), pero debido a que el análisis de cada componente por separado es
bastante sencillo y proporciona datos más precisos, las pruebas individuales han
sustituido al global casi por completo.1
La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del metabolismo de las
proteínas y sólo se sintetiza ene l hígado. Su concentración es igual en todos los
líquidos corporales, con excepción de la sangre entera debido a la diferencia de
valores que existe entre el suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere
el suero o plasma a la sangre entera para analizar el nitrógeno de urea.1
Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios más
solicitados para detecta la capacidad del riñón para excretar desechos
metabólicos. La elevación de estos valores s e emplea, junto con otros, como
indicador de la necesidad de diálisis en pacientes con insuficiencia renal
crónica. La interpretación de los valores del nitrógeno de urea exige el
conocimiento de la ingestión de proteína exógena y de líquidos, y las
condiciones que pueden incrementar la producción endógena (por ejemplo: la
actividad muscular, un traumatismo, la infección de una dieta muy restringida,
el ayuno o la inanición). Cualquiera de estas variables puede aumentar la
concentración sanguínea o urinaria que en sí mismo no es un reflejo real de la
depuración renal de urea.1
Pueden usarse dos pruebas, con las debidas precauciones y la interpretación,
como indicadores aproximados de mejoría o deterioro de la función renal del
individuo. Aunque las determinaciones de urea es mucho menos específica que
de la creatinina sérica, es de uso común, particularmente en pediatría, como una
prueba de rutina para la función renal y para conocer algo sobre el estado de
hidratación del individuo. Grados menores de disfunción renal requieren
análisis más sostificados como las pruebas de depuración.1
9.1. MARCO TEÓRICO:

Urea
La urea constituye la fracción de nitrógeno no proteico más importante en la
mayoría de los líquidos biológicos. En el hombre es el principal producto final
del metabolismo proteico. Se produce en el hígado y es excretada por la orina a
través de los riñones.2
Una elevación de la concentración sérica de urea, se interpreta generalmente
como una posible disfunción renal. Sin embargo, no debe dejarse de lado el
hecho de que los valores séricos de urea se encuentran íntimamente
relacionados con la dieta y el metabolismo proteico, por lo que cualquier
alteración en estas variables se traducirá en un cambio de la concentración de
urea en suero.2

Urea como producto final en el ser humano

Un ser humano moderadamente activo que consume cerca de 300 g de
carbohidratos, 100 g de grasa y 100 g de proteínas diariamente, debe excretar
aproximadamente 16.5 g de nitrógeno al día, 95% en la orina y 5% en las heces.
Para las personas que consumen dietas occidentales, la urea sintetizada ene
l hígado, liberada hacia la sangre y depurada por los riñones, constituye de 80-
90% del nitrógeno excretado.1

Ciclo de urea
La síntesis de un mol de urea requiere de tres moles de ATP, un mol de
amoniaco y el nitrógeno de alfa amino del aspartato.1
Enzimas que catalizan las reacciones:
1. Carbamoil fostafo sintasa I
2. Orinitin transcabamoilasa
3. Arginasa
 4. Argininosuccinasa
5. Acido argininosuccínico sintasa.

De los seis aminoácidos participantes el N-acetilglutamato funciona

únicamente como un activador enzimático. Los demás sirven como
portadores de átomos que en última instancia se convierten en urea. En los
mamíferos, la función principal de la ornitina, la citrulina y al
argininosucinato está en la síntesis de urea. La biosíntesis de urea es un
proceso cíclico. La ornitina consumida en la reacción es degenerada en la
reacción5 y no hay pérdida ni ganancia total de ornitina,
citrulina, argininosuccinato arginina. Sin embargo el ionamonio, CO2 y
ATP y aspartato sí se consumen, algunas reacciones de la síntesis de urea
tiene lugar e n la matriz mitocondrial en tanto que otras se realizan en el
citosol.3

Fisiología
La urea se forma a través de un proceso de degradación proteínica, la proteína
se transforma a partir de aminoácidos en amoniaco (desaminación oxidatixa),
como un producto final y de ahí en urea (ciclo de la ornitina) dentro del hígado.
Debido a que el organismo no utiliza urea, es trasportada en la sangre hasta que
es excretada por vía urinaria. Sus concentraciones varían fisiológicamente,
dependiendo de una manera directa del consumo de proteínas en la dieta
(exógeno) y del estado de hidratación o de modo indirecto por la tasa del
catabolismo tisular, o por la tasa de anabolismo tisular. La urea se excreta en el
filtrado glomerular y se reabsorbe en el túbulo de la neurona. Sólo se excreta
una fracciónde todo el material de desperdicio contenido en el filtrado
glomerular, pero a causa de que la urea se reabsorbe los túbulos de manera
deficiente, se reabsorbe poca urea, esto es un efecto benéfico.1

Patologías relacionadas:
Hiperatozemia
Azotemia: es el exceso de urea o de otros productos nitrogenados en la sangre.
Sólo se producen elevaciones consistentes de la concentración del nitrógeno de
urea cuando la función renal, específicamente el IFG, está disminuido de 40-60
por ciento. Por lo general, la azotemia se presenta debido a pérdida de volumen
circulante, catabolismo proteínico excesivo o deterioro de la función renal. Sólo
puede considerarse ciertamente como tal la que supere los 50 mg, a no ser
que no se conozcamos para el individuo cifras anteriores más bajas. Hay que
tener en cuenta también, como en otro análisis, comprendidas entre 30 y 50,
serán claramente patológicas. Según el grado, puede hablarse de una retención
incipiente la que llega hasta 80, moderada y 100, grave entre 100 y 150, y
gravísima por encima de 150.
Urea alta neuropática y urológica (uremia renal y posrenal): La hiperazotemia
es el signo humoral más simple de la insuficiencia renal orgánica y constituye la
uremia genuina en clínica. Pero hay que tener bien clara la idea de que no toda
la urea alta significa uremia ninefropatía, muchas veces la elevación de la
urea obedece a causas extrarrenales.

Uremia aguda: Va acompañada de anuria u oliguria con orina densa. Aunque

rápidamente se alcanzan cifras muy altas o muy altas de urea, el cuadro es, a
veces irreversible.
 En la glomerulonefritis aguda en la que, a diferencia de la crónica, la
reacción xantroproteica es normal, pues salvo la anuria absoluta
no existe retención de sustancias aromáticas.
 En la nefropatía anúrica, necrosis muscular isquémica, shocks
hemolíticos o transfusionales.
 En la nefrosis necrotizante por el sublimado y otros tóxicos.
Uremia Crónica: Con una cantidad normal de orina o con poliuria
compensadora. La orina tiene una densidad densa.Corresponde a lesiones
renales avanzadas e irreversibles, de ahí la razón pronostica para separar este
grupo del anterior.
Urea alta extrarrenal o prerrenal: Es decir, sin nefropatía demostrable, aunque
puede existir, por lo menos en algunos casos, una insuficiencia renal funcional.
Es un trastorno irreversible en la eliminación renal y no da lugar a la uremia
propiamente dicha. Se presenta siempre en forma aguda o subaguda,
alcanzándose rápidamente a veces cifras muy altas, superiores a la azotemia
neuropática.1
Disminución de urea
La disminución de urea tiene escaso significado clínico, ya que no es una
sustancia necesaria para el funcionamiento del organismo. Los valores bajos se
encuentran con menos frecuencia que los elevados. Se ha sugerido que una
concentración disminuida de nitrógeno de urea puede ser signo de un pronóstico
favorable, debido a que indica una función renal normal con excreción
adecuada.4
 1. Cualquier trastorno con aumento de la secreción de hormonas
andrógenos o del crecimiento, tal vez debido al efecto anabólico de estas
hormonas.
2. Embarazo normal, relacionado con: Aumento de la circulación renal
plasmática y del IFG, secundario a la expansión del volumen
plasmático. El estado anabólico del cuerpo.
3. Insuficiencia hepática grave, en particular la que acompaña a la
obstrucción de la circulación en la vena porta, debido a la incompetencia
del hígado para convertir el amoniaco en urea.
4. Cambios rápidos en la hidratación como: Rehidratación rápida cuando
se han agregado compuestos no nitrogenados a la solución intravenosa.
El paciente que ha estado sobre hidratado y después sometido a una
diuresis rápida.
5. Es un hallazgo raro que puede ocurrir en: Ingesta elevada de bebidas o
administración endovenosa abundante de líquidos. Durante El
embarazo, por aumento de filtrado glomerular.4

Análisis clínicos

Se suele expresar como BUN o nitrógeno ureico sanguíneo (urea = BUN x

2,146). Se cuantifica mediante una prueba espectrofotométrica cinética. Su
aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a
aumento del catabolismo proteico, a disminución de la perfusión renal, a
insuficiencia renal parenquimatosa aguda o crónica o a insuficiencia renal
postrenal por obstrucción. El nitrógeno ureico refleja el radio entre la
producción de urea y su depuración. El BUN aumentado puede ser debido al
aumento o disminución de la producción de excreción. A pesar de que
la creatinina es considerada la prueba más específica para evaluar la función
renal, se utilizan la mayoría de las veces juntos.4

 Valores normales: 16-45 mg /dl

 Preparación del paciente: ayuno de 8 horas
 Muestra: Suero o plasma.
 Metodología: Espectrofotometría
9.2. PARTE EXPERIMENTAL
Materiales y equipos a usar:
 Tubos de ensayo
 Ligadura
 Algodon
 Alcohol 70
 Aguja N 20
 Centrifuga
 Micropipetas
 Tips o puntas

- M.P. Suero sanguíneo

- Reactivos

 R1: Ac. Salicílico Nitroprusiato

 R2: Hipoclorito de NaOH
 R3: Ureasa

- Solución Stand [66,0 mg/dL]

9.3. PROCEDIMIENTO

Obtención de la M.P. suero sanguíneo

Para este análisis, la persona a quien se la va extraer la sangre tiene que estar
con 12 horas de ayuno aproximadamente.

Extracción de sangre venosa

Empezamos extrayendo la sangre en un tubo de ensayo, un aproximado de la

mitad del tubo.
 Luego de la extracción de sangre venosa, lo llevamos a centrifugar por 5
minutos a 2500 RPM con una cantidad de agua igual al de la muestra en otro
tubo de ensayo y lo pusimos frente a la muestra para poder equilibrar.

Finalmente obtuvimos la M.P. suero sanguíneo

DETERMINACIÓN DE UREA

Técnica
I. Preparación del Reactivo de trabajo

Mezclar 1 mL de Reactivo 1 + 50uL de Reactivo 3

II. Una vez obtenido el Reactivo de trabajo, empezamos a realizar la técnica e
determinación.
1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Pipetear en tubos rotulados:
Tubos Blanco St D

Rvo. de trabajo 1 mL 1mL 1mL

Sol. Stándar - 10 μL -

Suero sanguíneo - - 10 μL

Incubar a 5 minutos a temperatura ambiente 37 C. Agregar:

Rvo. 2 1mL 1mL 1mL

Mezclar, incubar 10 minutos temperatura ambiente. Leer en el

espectrofotómetro a 540 nm.

Procedimiento:
Vamos a coger tres tubos de ensayo rotulados (blanco, solución stándar y
muestra) vamos a poner 1mL del reactivo de trabajo a cada uno de los tubos.

Luego al tubo de solución estándar agregar 10 microlitros de solución estándar

y finalmente al tubo de muestra agregar 10 microlitros de suero sanguíneo
(muestra).
Incubamos por 5 minutos a temperatura de ambiente: Luego agregamos 1 mL
del Reactivo 2 a cada uno de los tubos (Standar, blanco y desconocido).

Mezclamos e incubamos 10 minutos a temperatura ambiente .Leemos la

absorbancia(A) en el espectrofotómetro a - 540 nm.
9.4. RESULTADOS:
Los resultados obtenidos en la determinación de la Urea en suero sanguíneo, se
encuentra dentro de los valores normales.
Cálculos

Resultados obtenidos:
Rangos de
Rangos de referencia
referencia de
de Urea
Urea B= 0,00
10 – 50 mg/dL Ab. St = 0,675
10 – 50 mg/dL
Ab.D = 0,118

Formula

Urea (mg/dL) = Lec.abs. D x (66, 0)

Lec.abs. St

Reemplazamos e la formula con los valores obtenidos

Urea (mg/dL) = 0, 118 x (66, 0)

0,675
Urea(mg/dL) = 11,53

El resultado obtenido de Urea fue 11,53 mg/dL

9.5. CONCLUSIONES:

 En esta práctica se logró hacer la determinación de urea en suero

(debido a que si se utiliza la sangre entera, es decir plasma + suero, por
lo que se prefiere el suero o en su defecto el plasma para esta
determinación) mediante una reacción colorimétrica.

 También con la práctica se logró cada paso para el análisis que se deben
realizar con los procedimientos adecuadamente y de la forma
determinada para que no tengamos discrepancias en nuestros resultados.

 Los resultados obtenidos en la práctica no presentó datos de urea

elevada se pueden descartar entonces casos de uremia y por lo tanto
de enfermedades renales, insuficiencia cardíaca, hemorragias
gástricas hipovolemia y obstrucciones renales.
9.6. CUESTIONARIO

1. ¿Qué patologías se presentan al haber valores elevados de Urea en

sangre?
Las patologías que se puede presentar al haber elevadas concentración de
Urea son: 5
 Alteraciones neurológicas.
 Insuficiencia renal
 Insuficiencia cardíaca
 Anemia
 Trastornos de la coagulación.
 Hipertiroidismo.
 Síntomas gastrointestinales
 Afección ósea (Huesos débiles)

2. ¿Qué otro tipos de muestras biológicas utilizaría para este trabajo

practico?
Las muestras biológicas más utilizadas para determinar la urea en este
trabajo práctico son: Muestra: Suero, plasma u orina.
3. Explique usted. El ciclo urea.

Ciclo de urea

El ciclo de la urea comienza en el interior de las mitocondrias de los

hepatocitos.6

Reacciones:

1. El primer grupo amino que ingresa al ciclo proviene del amoníaco

libre intramitocondrial. El amoníaco producido en las mitocondrias,
se utiliza junto con el bicarbonato (producto de la respiración
celular), para producir carbamoil-fosfato. Reacción dependiente de
ATP y catalizada por la carbamoil-fosfato-sintetasa I. Enzima
alostérica y modulada (+) por el N-acetilglutamato.
2. El carbamoil-fosfato cede su grupo carbamoilo a la ornitina, para
formar citrulina y liberar Pi. Reacción catalizada por la ornitina
transcarbamoilasa. La citrulina se libera al citoplasma.
3. El segundo grupo amino procedente del aspartato (producido en la
mitocondria por transaminación y posteriormente exportado al
citosol) se condensa con la citrulina para formar argininosuccinato.
 Reacción catalizada por la argininosuccinato sintetasa citoplasmática.
Enzima que necesita ATP y produce como intermediario de la
reacción citrulil-AMP.
4. El argininosuccinato se hidroliza por la arginino succinato liasa, para
formar arginina libre y fumarato.
5. El fumarato ingresa en el ciclo de Krebs y la arginina libre se
hidroliza en el citoplasma, por la arginasa citoplasmática para formar
urea y ornitina.
6. La ornitina puede ser transportada a la mitocondria para iniciar otra
vuelta del ciclo de la urea.

En resumen, el ciclo de la urea consta de dos reacciones mitocondriales y

cuatro citoplasmáticas.6
 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. Black Bullet [internet]. Determinación cuantitativa de Urea en

suero.2005.[Citado el 26 de marzo de 2018].Disponible en:
https://es.scribd.com/doc/22632638/3-Determinacion-Cuantitativa-de-Urea-en-
Suero

2. Sánchez L[internet]. Determinación de Urea: Laboratorio Bioquímica.

2012.[Citado el 26 de marzo de 2018].Disponible en:
http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-urea-informe-
de.html

3. Pintos G, Briones [Internet]. Protocolo de diagnóstico y tratamiento de los

trastornos del ciclo de la urea: Trastornos del ciclo de urea.[Citado el 26 de
marzo de 2018].Disponible en: http://ae3com.eu/protocolos/protocolo1.pdf

4. Kaplan A. Urea. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St Louis.
Toronto. Princeton 1984; 1257-1260 and437 and 418.

5. Sosa S[internet]. Alimentos Prohibidos con Urea alta: Centro Universitario de

Oriente: Guatemala: 2014.[Citado el 27 de marzo de 2018].Disponible en:
https://diagnosticoencasa.com/alimentos-prohibidos-en-urea-alta/

6. Bioquímica [internet]. Destino del grupo amino 2.- CICLO DE LA UREA:

Reacciones y regulación: Universidad de Alcalá: 2006.[Citado el 27 de marzo de
2018].Disponible en:
http://www3.uah.es/bioquimica/Tejedor/bioquimica_quimica/tema20-3.htm