Universidad Latina – Sede Veraguas

Facultad de Ciencias Dr. William C Gorgas

Carrera de Tecnología Médica

Guía N° 8
Determinación Analítica de Urea en Muestras de Suero y Orina

Objetivos:
- Conocer el significado clínico que nos permite evaluar y/o diagnosticar la
determinación cuantitativa del Urea en muestras de sangre.
- Aprender los fundamentos del método para determinar el analito de Urea.
- Evaluar la determinación de Urea en sangre con dos reactivos de proveedores
diferentes y con la misma metodología.

Introducción:
La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos (NNP) más abundantes en el cuerpo.
Los demás son la creatinina, el ácido úrico, el amonio y los aminoácidos. En otros tiempos
todos eran medidos juntos (prueba del NNP), pero debido a que el análisis de cada
componente por separado es bastante sencillo y proporciona datos más precisos, las
pruebas individuales han sustituido al global casi por completo.

La urea es el principal producto nitrogenado de desecho del metabolismo de las proteínas

y sólo se sintetiza ene l hígado. Su concentración es igual en todos los líquidos corporales,
con excepción de la sangre entera debido a la diferencia de valores que existe entre el
suero y los eritrocitos. Por lo tanto, se prefiere el suero o plasma a la sangre entera para
analizar el nitrógeno de urea.

Las determinaciones de urea y creatinina en suero son dos de los estudios más solicitados
para detecta la capacidad del riñón para excretar desechos metabólicos. La elevación de
estos valores s e emplea, junto con otros, como indicador de la necesidad de diálisis en
pacientes con insuficiencia renal crónica. La interpretación de los valores del nitrógeno de
urea exige el conocimiento de la ingestión de proteína exógena y de líquidos, y las
condiciones que pueden incrementar la producción endógena (por ejemplo: la actividad
muscular, un traumatismo, la infección de una dieta muy restringida, el ayuno o la
inanición). Cualquiera de estas variables puede aumentar la concentración sanguínea o
urinaria que en sí mismo no es un reflejo real de la depuración renal de urea.

Patologías relacionadas:
HIPERATOZEMIA
 Azotemia: es el exceso de urea o de otros productos nitrogenados en la sangre.
Sólo se producen elevaciones consistentes de la concentración del nitrógeno de
urea cuando la función renal, específicamente el Índice de Filtración Glomerular,
está disminuido de 40-60 por ciento. El índice de filtración glomerular puede
alterarse no sólo por disfunción renal sino por también por desviación prerrenal
 de agua (pérdida de volumen circulante por una causa cualquiera), la cual
conduce a un aumento de retención de la urea. Por lo general, la azotemia se
presenta debido a pérdida de volumen circulante, catabolismo proteínico excesivo
o deterioro de la función renal. La interpretación del incremento en la urea
sanguínea depende del conocimiento de ambos grupos de factores, renales y
extrarrenales, y su importancia relativa. Sólo puede considerarse ciertamente
como tal la que supere los 50 mg ,a no ser que no se conozcamos para el individuo
cifras anteriores más bajas. Hay que tener en cuenta también, como en otro
análisis, comprendidas entre 30 y 50, serán claramente patológicas. Según el
grado, puede hablarse de una retención incipiente la que llega hasta 80,
moderada y 100, grave entre 100 y 150, y gravísima por encima de 150.

 Urea alta neuropática y urológica (uremia renal y posrenal).

La hiperazotemia es el signo humoral más simple de la insuficiencia renal orgánica

y constituye la uremia genuina en clínica. Pero hay que tener bien clara la idea de
que no toda la urea alta significa uremia ni nefropatía, muchas veces la elevación
de la urea obedece a causas extrarrenales.

 Uremia aguda

Va acompañada de anuria u oliguria con orina densa. Aunque rápidamente se

alcanzan cifras muy altas o muy altas de urea, el cuadro es, a veces irreversible. En
la glomérulo-nefritis aguda en la que, a diferencia de la crónica, la reacción
xantroproteica es normal, pues salvo la anuria absoluta no existe retención de
sustancias aromáticas

En la nefropatía anúrica (nefrosis de neurona distal, anuria traumática, etc), el en

shock, necrosis muscular isquémica, shocks hemolíticos o transfusionales. En la
nefrosis necrotizante por el sublimado y otros tóxicos.

 Uremia Crónica

Con una cantidad normal de orina o con poliuria compensadora. La orina tiene
una densidad densa. Corresponde a lesiones renales avanzadas e irreversibles, de
ahí la razón pronostica para separar este grupo del anterior. En la glomérulo-
nefritis crónica, aquí la reacción xantoproteica de cifras altas.

En la esclerosis renal primaria o secundaria.

En las nefropatías quirúrgicas (hidronefrosis, tuberculosis renal, pielonefritis, riñón

poliquístico, etc.) En la nefropatía calcéra de la osteítis fibrosis quística avanzada,
también en el mieloma múltiple se observa a menudo insuficiencia renal, en un
caso neutro, la retención ureica alcanza 360 mg.
DISMINUCIÓN DE UREA: La disminución de urea tiene escaso significado clínico, ya que no
es una sustancia necesaria para del organismo. Los valores bajos se encuentran con
menos frecuencia que los elevados. Se ha sugerido que una concentración disminuida de
nitrógeno de urea puede ser signo de un pronóstico favorable, debido a que indica una
función renal normal con excreción adecuada.

EN ANÁLISIS CLÍNICOS:

La urea Es el principal metabolito de las proteínas. Los valores oscilan entre 16 y 45

mg/dl . Se suele expresar como BUN o nitrógeno ureico sanguíneo (urea = BUN x 2,146).
Se cuantifica mediante una prueba espectrofotométrica cinética.

Su aumento puede ser debido a un incremento importante del aporte proteico, a

aumento del catabolismo proteico, a disminución de la perfusión renal (shock,
deshidratación, insuficiencia cardiaca, síndrome hepatorrenal), a insuficiencia renal
parenquimatosa aguda o crónica o a insuficiencia renal post renal por obstrucción.
Aunque la urea sanguínea es un parámetro muy utilizado en la valoración de la función
renal, es poco sensible, ya que sólo se eleva cuando se ha perdido más de la mitad de la
función renal, y no demasiado específica.

La urea sanguínea disminuye en situaciones de hemodilución y en la insuficiencia

hepática, ya que se sintetiza en el hígado. La uremia es mejor evaluada en conjunto con la
creatinina. Tanto en la azotemia prerenal y postrenal el BUN está más elevado que la
creatinina. Sin embargo en el 88% de los niños deshidratados por gastroenteritis quienes
presentan una acidosis metabólica presentan concentraciones de BUN < de 18 mg/dl.

En la enfermedad renal progresiva crónica, cerca del 75% del parénquima renal es
destruido antes de que se desarrolle la azotemia. El nitrógeno ureico refleja el radio entre
la producción de urea y su depuración. El BUN aumentado puede ser debido al aumento o
disminución de la producción de excreción. A pesar de que la creatinina es considerada la
prueba más específica para evaluar la función renal, se utilizan la mayoría de las veces
juntos.

Valores normales: 16-45 mg /dl

Preparación del paciente: ayuno de 8 hrs
Muestra: Suero o plasma.
Metodología: Espectrofotometría

UREA URINARIA
La urea representa entre el 80 – 90% del nitrógeno urinario. En condiciones normales, y
tratándose de un sujeto no estresado metabólicamente, las pérdidas urinarias de
nitrógeno ureico suelen ser de 5 gramos en 24 horas. Luego, la excreción urinaria de
nitrógeno ureico constituye una herramienta indispensable en la comprensión del estado
metabólico del ser humano en los diferentes procesos de salud y enfermedad, y en
consecuencia un indicador valioso del estado de la vertiente catabólica del metabolismo
celular y tisular. La excreción urinaria de nitrógeno ureico puede indicar la intensidad del
catabolismo proteico: las pérdidas nitrogenadas serán mayores mientras más intenso sea
el estrés metabólico propio de la enfermedad.

Asimismo, diferentes situaciones clínicas podrían resultar en diversos ritmos de excreción

de nitrógeno ureico urinario. La hipercatabolia así establecida pudiera identificar a los
enfermos en riesgo de complicarse, e incluso de fallecer. Un pobre recambio proteico
resultante de un intenso catabolismo no solo resulta en depleción significativa de los
tejidos magros, sino también en un riesgo incrementado de complicaciones (la muerte
incluida).

A pesar de la utilidad clínica de la excreción urinaria del nitrógeno ureico (NUU), sigue
siendo un desafío la determinación de este indicador del catabolismo nitrogenado en un
ámbito hospitalario. La exactitud de la determinación del NUU depende estrictamente de
la calidad de la colección de la orina propia de un día en la vida del enfermo. Colecciones
incompletas de orina resultan en estimados del NUU no útiles para el diagnóstico clínico y
metabólico. El 60% de las colecciones de 24 horas de orinas son incompletas, por
numerosos factores.

La excreción urinaria de nitrógeno ureico se incluye dentro de las pérdidas diarias de este
compuesto, como paso previo al cálculo del balance nitrogenado: figura matemática que
resulta de la suma de los aportes hechos y las pérdidas ocurridas. Junto con las pérdidas
nitrogenadas que ocurren diariamente en un sujeto adulto se incluyen las de origen fecal
(0.5 gramos.día-1) y tegumentario (7 mg.Kg-1.día-1), respectivamente.

Las pérdidas diarias de nitrógeno deben incorporar también las resultantes de fístulas,
quemaduras, lesiones abiertas de la piel, y otras situaciones similares en las que ocurran
pérdidas de fluidos biológicos.

Principio de la metodología que emplearemos para determinar el analito de Ácido Úrico:

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoníaco (NH3) y

anhídrido carbónico (CO2). El amoníaco formado se incorporan al alfa-cetoglutarato por
acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a NAD+ :

La disminución de la concentración de NAD+ en el medio es proporcional a la

concentración de urea de la muestra ensayada.
Materiales

1. Espectrofotómetro

2. Centrífugas

3. Incubadora

4. Materiales para el para realizar flebotomía. (guantes, jeringuillas, tubos, etc)

5. Tubos de ensayo de vidrio

6. Tubos de lectura para el espectrofotómetro.

7. Gradillas

8. Pipetas manuales serológicas.

9. Micropipetas

10. Puntas de polipropileno

11. Reactivos provistos para determinar ácido úrico en sangre

Procedimiento:

1. Conecte y encienda el espectrofotómetro en la mesa de trabajo.

2. Realice el procedimiento de Flebotomía según la pareja de trabajo que le corresponde.

3. Leer el inserto o instrucciones que le provee su reactivo de trabajo y seguir

cuidadosamente las especificaciones, pautas y procedimientos que indica el fabricante.

4. Centrifugar las muestras, para obtener el suero de trabajo

5. Rotule los tubos de lectura del espectrofotómetro como indica la siguiente tabla; o siga el
procedimiento que le indica el inserto que continua en la siguiente página.

Tubos ------------ Blanco (B) (Standard) Muestras

Reactivo
Standard o Patrón
Muestra
NOTA: Los volúmenes en cada tubo van a depender del proveedor de su reactivo.
6. Lea cuidadosamente el inserto que le provee su reactivo, para la determinación de éste
analito; de tal manera que debe seguir cada punto del procedimiento como lo indica el
proveedor, verificando las condiciones de trabajo y los volúmenes de muestras, patrones o
estándares y controles.

7. Mezclar e incubar de acuerdo a las especificaciones del inserto según sea su reactivo de
trabajo.

8. Leer las absorbancias en el espectrofotómetro

9. Realizar los cálculos necesarios para obtener las concentraciones cada muestra, patrón y
controles.

10. Entregue su reporte al profesor, llenando el formulario siguiente:

 Experiencia Nº ____
Laboratorio de Química Clínica I
Reporte de los Resultados
Facilitadora: Licda. Blanche O. Núñez

Determinación de ______________________________
Metodología_________________________________

Integrantes del Grupo de Trabajo:

_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________

Indicaciones: Escriba al lado de la A, las absorbancias obtenidas según su lectura en el

espectrofotómetro y al lado de la C escriba la concentración calculada según sea el factor que le
indica la metodología.

Estándar/Patrón Muestra ___ Muestra ___ Muestra ____ Muestra ____

A: C: A: C: A: C: A: C: A: C:

Conteste las siguientes preguntas: (Refiérase a las instrucciones o inserto de reactivo)

1. Cuál es el nombre del control que se debería utilizar según el reactivo que utilizó en su
experiencia?
2. Mencione las sustancias que podrían interferir en la determinación del urea según el
reactivo que utilizó?
3. Escriba el rango de linealidad de su metodología, de acuerdo a los reactivos utilizados.
 Universidad Latina – Sede Veraguas
Facultad de Ciencias Dr. William C Gorgas
Carrera de Tecnología Médica

Guía N° 9
Determinación Analítica de Creatinina en Muestras de Suero y Orina

Objetivos:
- Conocer el significado clínico que nos permite evaluar y/o diagnosticar la
determinación cuantitativa del Creatinina en muestras de sangre.
- Aprender los fundamentos del método para determinar el analito de Creatinina.
- Evaluar la determinación de Creatinina en sangre con dos reactivos de
proveedores diferentes y con la misma metodología.

Introducción
Creatinina (del griego''''kreas, carne) es un producto de descomposición del fosfato de
creatina en el músculo, y generalmente se produce a un ritmo bastante constante por
parte del cuerpo (en función de la masa muscular).

La creatinina es el resultado de la degradación de la creatina, que es un componente de

los músculos. La creatinina puede ser transformada en ATP que es una fuente de alta
energía para las células. La producción de creatinina depende de la modificación de la
masa muscular, y ello varía poco y los niveles suelen ser muy estables.

La creatinina se forma en los músculos y las células nerviosas, de donde llegan a la sangre.
La formación de creatinina en el cuerpo depende sólo en menor medida de la masa
muscular, a diferencia de la urea. Como la creatinina también se elimina casi
exclusivamente a través de los riñones, la creatinina del suero (cantidad de creatina en la
sangre) sirve como parámetro sensible de la función del filtrado renal.
Existe una limitación: los niveles de creatinina en la sangre se elevan hasta valores
patológicos sólo cuando la tasa de filtrado del riñón desciende a menos de la mitad del
valor normal, es decir, con la pérdida avanzada de la función renal.

Sin embargo, el valor la creatinina se suele determinar en los análisis de sangre de forma
estándar, lo que es relativamente sencillo y rápido. Sirve de base para poder determinar
la tasa de filtrado glomerular (TFG) y es por tanto una parte esencial del diagnóstico de
las enfermedades renales. Sobre la base de la TFG, los médicos clasifican las
enfermedades renales según diferentes niveles de gravedad. Los valores de creatinina
sanguíneos también pueden ser útiles cuando se quiere supervisar el posible daño renal
ante un consumo de nefrotóxicos (medicamentos que dañan el riñón como por ejemplo la
gentamicina).
La concentración de creatina aumenta con la edad, porque la función de filtrado del riñón
se deteriora con los años. Por lo tanto, para personas mayores de 50 años se aplican
valores normales de creatinina superiores.

La creatinina es filtrada principalmente de la sangre por los riñones, aunque una cantidad
pequeña es activamente secretada por los riñones en la orina. Hay poco o nada de la
reabsorción tubular de la creatinina. Si el filtrado del riñón es deficiente, la sangre se
elevan los niveles. Por lo tanto, los niveles de creatinina en sangre y orina pueden ser
utilizados para calcular el aclaramiento de creatinina (CrCl), que refleja la tasa de filtración
glomerular (TFG).

El TFG es clínicamente importante porque es una medida de la función renal. Sin embargo,
en los casos de disfunción renal grave, el aclaramiento de creatinina se "sobrestimado",
porque la secreción activa de la creatinina explicará una fracción más grande de la
creatinina total deforestada. Cetoácidos, cimetidina y la trimetoprima reducir la secreción
tubular de la creatinina y por lo tanto aumentar la precisión de la estimación de la TFG, en
particular en la disfunción renal grave. (En ausencia de la secreción de creatinina se
comporta como la inulina.)

Una estimación más completa de la función renal se puede hacer en la interpretación de

la sangre (plasma) la concentración de creatinina, junto con la de la urea. BUN-a-
creatinina (la proporción de urea y creatinina) puede indicar otros problemas además de
los intrínsecos al riñón, por ejemplo, un nivel de aumento de la urea fuera de proporción a
la creatinina puede indicar un problema pre-renal, tales como la depleción de volumen.

Los hombres tienden a tener niveles más altos de creatinina porque suelen tener más
masa muscular esquelética que las mujeres. Los vegetarianos han demostrado tener
niveles más bajos de creatinina.

Valores Normales
Un resultado normal es de 0.7 a 1.3 mg/dL para los hombres y de 0.6 a 1.1 mg/dL para las
mujeres. Las mujeres generalmente tienen niveles de creatinina más bajos que los
hombres, debido a que ellas normalmente tienen menor masa muscular.

Significado Clínico: Los niveles superiores a lo normal pueden deberse a:

 Obstrucción de las vías urinarias.

 Problemas renales, como insuficiencia o daño en el riñón, infección o reducción del
flujo de sangre. 
 Pérdida de líquido corporal (deshidratación).
 Problemas musculares, como descomposición de las fibras musculares
(rabdomiólisis).
 Problemas durante el embarazo, como convulsiones, eclampsia o hipertensión
arterial causada por el embarazo (preeclampsia).
Los niveles inferiores a lo normal pueden deberse a:

 Afecciones que comprometen y los nervios que los controlan (miastenia grave).
 Problemas musculares, pérdida muscular avanzada (distrofia muscular).

INVESTIGUE: ¿A qué se refiere el término Depuración de Creatinina? ¿Qué valor clínico

aporta en el monitoreo diagnóstico y tratamiento de enfermedades relacionadas al
sistema renal?

PRINCIPIO DEL MÉTODO

El ensayo de la creatinina está basado en la reacción de la creatinina con el picrato

alcalino descrito por Jaffé. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un
complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran
parte de las interferencias conocidas del método.

La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de creatinina en la

muestra ensayada.

Materiales

1. Espectrofotómetro

2. Centrífugas

3. Incubadora

4. Materiales para el para realizar flebotomía. (guantes, jeringuillas, tubos, etc)

5. Tubos de ensayo de vidrio

6. Tubos de lectura para el espectrofotómetro.

7. Gradillas

8. Pipetas manuales serológicas.

9. Micropipetas

10. Puntas de polipropileno

11. Reactivos provistos para determinar ácido úrico en sangre

Procedimiento:

1. Conecte y encienda el espectrofotómetro en la mesa de trabajo.

2. Realice el procedimiento de Flebotomía según la pareja de trabajo que le corresponde.

3. Leer el inserto o instrucciones que le provee su reactivo de trabajo y seguir

cuidadosamente las especificaciones, pautas y procedimientos que indica el fabricante.

4. Centrifugar las muestras, para obtener el suero de trabajo

5. Rotule los tubos de lectura del espectrofotómetro como indica la siguiente tabla; o siga el
procedimiento que le indica el inserto que continua en la siguiente página.

Tubos ------------ Blanco (B) (Standard) Muestras

Reactivo
Standard o Patrón
Muestra
NOTA: Los volúmenes en cada tubo van a depender del proveedor de su reactivo.

6. Lea cuidadosamente el inserto que le provee su reactivo, para la determinación de éste

analito; de tal manera que debe seguir cada punto del procedimiento como lo indica el
proveedor, verificando las condiciones de trabajo y los volúmenes de muestras, patrones o
estándares y controles.

7. Mezclar e incubar de acuerdo a las especificaciones del inserto según sea su reactivo de
trabajo.

8. Leer las absorbancias en el espectrofotómetro

9. Realizar los cálculos necesarios para obtener las concentraciones cada muestra, patrón y
controles.

10. Entregue su reporte al profesor, llenando el formulario siguiente:

 Experiencia Nº ____
Laboratorio de Química Clínica I
Reporte de los Resultados
Facilitadora: Licda. Blanche O. Núñez

Determinación de ______________________________
Metodología_________________________________

Integrantes del Grupo de Trabajo:

_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________
_______________________________________

Indicaciones: Escriba al lado de la A, las absorbancias obtenidas según su lectura en el

espectrofotómetro y al lado de la C escriba la concentración calculada según sea el factor que le
indica la metodología.
Estándar/Patrón Blanco ___ Muestra ___ Muestra ____ Muestra ____
A: C: A: C: A: C: A: C: A: C:

Conteste las siguientes preguntas: (Refiérase a las instrucciones o inserto de reactivo)

1. Cuál es el nombre del control que se debería utilizar según el reactivo que utilizó en su
experiencia?
2. Mencione las sustancias que podrían interferir en la determinación del creatinina según el
reactivo que utilizó?
3. Escriba el rango de linealidad de su metodología, de acuerdo a los reactivos utilizados.
4. Escriba los intervalos de referencia que establece el inserto del reactivo que utilizó para
determinar creatinina en suero y orina.
5. Calcule la Depuración mL/min = 𝑪𝒐𝒏𝒄 𝑪𝒓𝒆𝒂𝒕 𝑶𝒓𝒊𝒏𝒂 × 𝑽𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝑶𝒓𝒊𝒏𝒂
𝑪𝒐𝒏𝒄 𝑪𝒓𝒆𝒂𝒕 𝑺𝒖𝒆𝒓𝒐 𝟏𝟒𝟒𝟎 𝐦𝐢𝐧

Cant Dep = (U x V)/P: El concepto de depuración consiste en transferir una cantidad de

producto de un lugar a otro; en la evaluación de la función renal es la transferencia de una
cantidad sustancia presente en el plasma hacia la orina. La depuración renal se expresa
como el volumen de plasma por unidad de tiempo al cual toda las sustancia en particular
es removida o depurada del plasma. (IR: 90-120 ml/min)