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1.- IDENTIFICACIÓN DEL NUCLEO CELULAR

1.- IDENTIFICACIÓN DEL NUCLEO CELULAR

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El componente más notorio y evidente cuando se observa la célula al microscopio es el núcleo. Es el centro de control celular y encierra la información genética que le otorga a cada célula las características morfológicas, fisiológicas y bioquímicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la célula.
El componente más notorio y evidente cuando se observa la célula al microscopio es el núcleo. Es el centro de control celular y encierra la información genética que le otorga a cada célula las características morfológicas, fisiológicas y bioquímicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la célula.

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PRÁCTICA # 1 “IDENTIFICACIÓN DEL NÚCLEO CELULAR”

OBJETIVOS   Utilizar adecuadamente el microscopio óptico Observar en diferentes células de diferentes tejidos el núcleo y sus características

INTRODUCCIÓN El componente más notorio y evidente cuando se observa la célula al microscopio es el núcleo. Es el centro de control celular y encierra la información genética que le otorga a cada célula las características morfológicas, fisiológicas y bioquímicas que le son propias. Es imprescindible para la sobrevida de la célula. Características del núcleo interfásico En los períodos no divisionales el núcleo no presenta en general cromosomas visibles y por eso se lo denomina núcleo interfásico.

Estructura: En todas las células se encuentra un núcleo con característica morfológica similar y constituida por una membrana nuclear, jugo nuclear, cromatina o cromosomas y nucléolo, hablándose en estos casos de núcleos típicos. (Nucleoide: no existe núcleo como una estructura definida, el material nuclear se halla disperso en gránulos por el citoplasma no existe carioteca que limite y encierre lo componentes nucleares)  Forma: La forma del núcleo puede ser regular o irregular  Regular: esférica, ovoide, cúbica, etc. Coincidiendo con la forma de la célula. Es decir que la forma del núcleo coincide generalmente con la de la célula.  Irregular: como en los glóbulos blancos polimorfonucleares, su morfología polilobulada y en forma de herradura es la que le da aspecto irregular al núcleo.  Tamaño: Su tamaño es variable pero en general guarda relación con la célula. Podemos referirnos a él en términos absolutos en cuyo caso daremos una medida en micrones. O hacerlo en forma relativa y referirlo a la relación núcleo citoplasma.  Posición: La posición del núcleo varía según el tipo de célula considerada y según la materia acumulada en la célula. Cada célula tiene el núcleo en una posición característica en casi todas las células animales es céntrico, en algunas como las adiposas y las de las fibras musculares estriadas esqueléticas es excéntrico, en las epiteliales se ubica en la zona basal.  Número: La mayoría de las células son mononucleadas pero las hay binucleadas (células Cartilaginosas, células Hepáticas) multinucleadas (fibra muscular estriada) Envoltura nuclear membrana nuclear o carioteca Su importancia radica en que el proceso de transcripción de ARN, a partir de ADN está físicamente separado tanto en el tiempo como en el espacio del sitio de la síntesis proteica, traducción. En las procariotas existe poca posibilidad de alterar el ARN que se ha transcripto antes de que sea traducido a proteína, en cambio en las eucariotas los ARN que se han transcripto pueden ser extensamente alterados (revisados, madurados) en el núcleo antes de su traducción a proteína en el citoplasma. Esto se denomina procesamiento de ARN. Al microscopio electrónico se presenta como una doble membrana (dos membranas de 90 A y un espacio intermedio de 140 A). Podemos observar que la cromatina tiende a adherirse a su cara interna; mientras que a su cara externa se adhieren los ribosomas. La composición química es de tipo lipoproteica. Posee múltiples poros cuyo diámetro oscila en los 80nm.

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Poro: estructura supramolecular que parece estar organizada y mantenida en su lugar mediante la lamina nuclear una red proteica que tapiza la parte interior de la membrana nuclear interna y ayuda a configurar el núcleo y a organizar a los cromosomas. El número y tamaño de los poros varía con el tipo de célula. Se cree que en los mamíferos estos ocupan el 10% con relación a la superficie total, se encuentran rodeados por estructuras circulares llamadas anillos que en conjunto forman el complejo del poro. Por dichos poros pueden pasar macromoléculas y las unidades ribosomales pero el intercambio es selectivo, su función es impedir la entrada de los ribosomas activos en el núcleo. Lógicamente la función de estos es mantener una estrecha comunicación entre ambas partes de la célula, el canal central por el que se produce esta mide 10 a 15 nm. Por ejemplo: hay proteínas como la ARN polimerasa, ADN polimerasa e histonas que se sintetizan en el citoplasma y luego deben ser transportadas al núcleo las células tienen la capacidad de ubicar las proteínas específicas en los compartimentos celulares adecuados. Existe una interesante comunicación entre la membrana nuclear y el retículo endoplásmico, (la membrana nuclear externa forma un todo continuo con la membrana del retículo) también sabemos que en la profase de la mitosis al desaparecer la membrana esta pasa a formar parte del retículo para en la telofase volverse a formar en cada célula hija a expensas de aquel. Jugo nuclear, cariolinfa, carioplasma El jugo nuclear está en amplia comunicación con el jugo citoplasmático merced a los poros de la membrana. Al igual que en el citoplasma, por la cariolinfa circulan iones diversos, moléculas pequeñas, macromoléculas, etc. Nucleolo Es la fábrica celular donde se producen los ribosomas. Para poder construir sus 10 millones de ribosomas, una célula en crecimiento debe sintetizar en cada generación celular 10 millones de copias de cada tipo de molécula de ARNr y esto solo puede lograrse gracias a que la célula tiene varias copias de los genes que codifican los ARNr (genes de ARNr). Las células humanas contienen unas 200 copias de ARNr distribuidas en pequeños grupos en cinco cromosomas diferentes. Los nucléolos se dispersan durante la mitosis y se reconstruyen en localizaciones específicas que se denominan organizadores nucleolares, estas zonas se reconocen por presentarse como una constricción secundaria del cromosoma donde se ubican bucles de ADN. El ARNr recién sintetizado es empaquetado inmediatamente con proteínas ribosómicas conformando las subunidades mayor y menor para ser luego exportadas por separado al citoplasma en tiempos también distintos. Estructura esferoide casi siempre presente en las células cuyo n° oscila entre 1 y 3. En él podemos distinguir dos zonas:

Zona granular, formada por partículas de ribosomas en distintos estadios de ensamblado mide entre 15 y 20 nm y ocupa la parte periférica del nucléolo.

Zona fibrilar, mide entre 5 y 10 nm y ocupa una región más céntrica. A diferencia de los orgánulos celulares el nucléolo carece de membranas, su tamaño varía en diferentes células y puede variar dentro de una misma célula. Cromatina

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El ADN es el principal componente genético de la célula y el que lleva la información codificada de una célula a otra y de un organismo a otro. En las células eucariotas el ADN no se encuentra suelto sino unido a proteínas específicas llamadas histonas con las que forma una compleja estructura denominada cromatina (también se encuentran otros tipos de proteínas cromosómicas no específicas y pequeñas cantidades de ARN). Las histonas son cinco proteínas diferentes básicas, de carga positiva, esta propiedad hace que se unan fuertemente al ADN que es ácido, de carga negativa. La cromatina se presenta como una fibra de 10 nm como primer grado de organización (aunque no es muy probable que podamos observarla en este estado, no en forma natural al menos). El plegado de ADN es importante en las células eucarióticas por dos motivos: en primer lugar es esencial para disponer las grandes moléculas de ADN en forma ordenada dentro del núcleo celular. En segundo lugar la manera en que se pliega una región del genoma de una célula en particular determina la actividad de los genes de esta región y es aquí donde las histonas cumplen un papel primordial. Las histonas pueden ser agrupadas en dos:

 

Histonas nucleosómicas H2A, H2B, H3, H4 que son las responsables del plegado del ADN en los nucleosomas. Histonas H1 responsables del plegado nucleosomas en la fibra cromatínica de 30 nm. de los

Si se estirara la doble hélice de ADN de cada cromosoma humano este mediría aproximadamente 5 cm. Las histonas son las responsables de empaquetar esta larga molécula de ADN dentro de un núcleo de unos pocos micrones de diámetro. Existen diversos grados de empaquetamiento y la unidad fundamental es el nucleosoma. Él confiere a la cromatina su aspecto de cuentas ensartadas, cada cuenta nucleosómica posee un conjunto de 8 moléculas de histonas, 2 copias de cada una de las cuatro histonas nucleosómicas. Estas moléculas forman un núcleo proteico alrededor del cual se enrolla el fragmento de ADN de doble hebra. Cada cuenta esta separada de la siguiente por una región de ADN espaciador que junto con la cuenta nucleosómica constituye un nucleosoma completo. El sistema de cuentas debe condensarse aún más para esto los nucleosomas se empaquetan entre sí, esta forma básica de empaquetamiento recibe el nombre de fibra cromatínica de 30 nm. De este empaquetamiento es responsable la histona 1. El empaquetamiento continúa aún más, cuando se observa la estructura de ciertos cromosomas esto aparecen organizados en una serie de dominios estructurales en forma de bucle la hipótesis que se sostiene en este sentido es que las zonas de bucles de cromatina se establecen y mantienen por acción de ciertas proteínas.

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La cromatina durante el ciclo celular presenta distintos aspectos que ilustramos mediante un esquema del ciclo de condensación – descondensación de los cromosomas. En G1 los cromosomas están dispersos; en S se produce la duplicación que se completa en G 2. En la metafase, M, y en la anafase, A, la condensación es máxima y se ven los dos centrómeros (flechas). Cromosomas Durante la división celular la cromatina se compacta haciéndose visible al microscopio y recibiendo el nombre de cromosomas. Estos pueden clasificarse según su forma que depende de la ubicación del centrómero en:

   

Telocéntrico: un solo brazo centrómero en uno de sus extremos. Metacéntrico: los brazos son iguales centrómero en el centro. Submetacéntrico: centrómero en medio de dos brazos desiguales

Acrocéntrico: brazos desiguales, poseen constricción primaria, secundaria y satélite En los cromosomas condensados es posible distinguir varios elementos:

   

Cromatida: en la metafase cada cromosoma esta formado por dos componentes simétricos cada uno de los cuales contiene una molécula de ADN. Centrómero o cinetoco es la región del cromosoma donde convergen las fibras del huso mitótico, se encuentra en una parte más delgada del cromosoma la constricción primaria. Telómero: extremo del cromosoma se cree que su función es evitar que se "peguen" o fusionen con otros fragmentos. Zona que no posee información genética. Constricción secundaria: son constantes en su posición y tamaño, resultan útiles para identificar un cromosoma en particular. Los organizadores nucleolares son ciertas construcciones secundarias en las que los genes codifican a los ARNr. En el hombre los organizadores nucleolares se hallan en los cromosomas 13, 14, 15, 21 y 22 todos ellos son acrocéntricos y tienen un pequeño cuerpo redondeado (satélite) separado del resto del cromosoma por la constricción secundaria.1 Relación núcleo / citoplasma En 1831 Brown indicaba que todos las células de los seres vivos tenían núcleo ( los eritrocitos carecen de él ). En cuanto a su tamaño es variable, aunque guardan relación con el volumen citoplasmático. Esta relación se expresa RNP = V núcleo / V célula - V núcleo, tiene que existir un equilibrio entre el volumen del citoplasma y el nuclear. Según la expresión anterior al aumentar el volumen nuclear debe hacerlo el citoplasmático y viceversa. El hecho de que en esta relación se produzca cualquier variación es un estímulo para la división celular. En general los núcleos suelen tener un diámetro de 5 a 30 micrómetros. En las células reproductoras el núcleo es de gran tamaño, como en los ovocitos y en los zigotos, puede ser el núcleo de gran tamaño en relación a la cantidad de ARN. Suelen ser esféricos u ovalados aunque en las células alargadas el núcleo también adopta esta forma, también algunas células puede ser polimórfico, el que presente forma irregular indica alta actividad metabólica. Casi todas las células son mononucleadas aunque en algunas hepáticas son trinucleadas o incluso polinucleadas (médula ósea). La posición es variable, pero constante para cada tipo de célula.2 MATERIAL     Microscopio óptico Frotis de diversos tejidos Aceite mineral Goteros

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PROCEDIMIENTO       Observar en diferentes células el núcleo destacando: Forma Relación núcleo /citoplasma Granulación Rugosidad de membrana Inclusiones nucleares

RESULTADOS  Muestra de médula ósea a 100X

Se presentan células con diversas formaciones y tipos de núcleos de forma redonda, arriñonada, irregulares, con gránulos pericromatinianos e intercromatinianos; no se observo el nucleolo. Relación núcleo-citoplasma del 80%.

Linfocitos (sangre periférica) a 100X

Se encuentran células de diversas formas, con núcleos redondos, sin inclusiones o granulaciones con una relación núcleo-citoplasma del 10%.

Células epiteliales de tumor renal a 100X

Se encuentran núcleos de forma alargada y redonda, de hecho, varios núcleos dentro de una sola célula con gránulos intercromationianos y con una relación núcleo-citoplasma de 20%.

Línea celular U937 a 40X

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Se observan núcleos de diversas formas, irregulares, redondos, casi ningún arriñonado y alargados con una relación de 90% con gránulos pericromatinianos e intercromatinianos.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS:

Para la médula ósea: Las células que se observaban morados y muy oscuros se encontraban en división celular. Algunas células se observaban segmentadas (ya que su núcleo se estaba segmentando), las células inmaduras se diferenciaban debido a que sus núcleos eran muy grandes; en general se observaron en esta muestra todo tipo de células.  En las células del cultivo de sangre periférica se observaron linfocitos con división celular, además de que las células grandes se encontraban activadas debido a que estaban a punto de dividirse, esto se podía observar por su esponjosidad, y también se observaban otros más pequeños.  En las células del tumor renal se podían observar en una misma célula varios núcleos ya que la célula se divide tan rápido que no alcanza a dividirse adecuadamente y ya que son cancerosas por eso se presenta este tipo de poliploidia.  En las células de la línea celular, es decir de las células vivas leucémicas U937, se observaron células muertas que se diferenciaban por tener el citoplasma roto, otras que se encontraban muy expandidas ya que se estaban muriendo (núcleos muy grandes) y otras células de tamaño normal pero con el núcleo muy grande. CONCLUSIÓN En esta práctica observamos gran cantidad de núcleos y las posibles configuraciones que este puede desarrollar, aprendimos a identificar algunas de sus características en diferentes tipos de células, en algunos casos se observaban los cromosomas. Esta práctica nos dará las enseñanzas básicas para trabajar con células e identificar sus componentes de manera efectiva para posteriores prácticas y reconocer todos estos compuestos que contiene un núcleo celular y como los núcleos de las diferentes células varían en cada tipo y como dentro de un mismo tipo celular el núcleo puede cambiar.

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http://www.alipso.com/monografias/nucleo_celular/(15/09/08 05:21pm) http://www.elergonomista.com/biologia/nucleo.htm (15/09/08 06:03pm)

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