DETRMINACION DE CREATINA

INTRODUCCIN:

En la presente practica realizaremos la determinacin de urea y creatinina, que son utilizadas

rutinariamente para valorar el funcionamiento de los riones, es decir, para valorar como marcha
la excrecin de los residuos txicos producidos en el organismo como consecuencia del
metabolismo celular de todas las clulas del organismo.

La creatinina es una molcula de deshecho que se genera a partir del

metabolismo muscular. Aunque es una sustancia de deshecho, la creatinina es
una prueba diagnstica esencial, ya que se ha observado que su concentracin en
sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal.

OBJETIVOS:

Practicar el adecuado manejo de la tcnica de laboratorio para la correcta determinacin

de creatinina en una muestra biolgica.

Determinar los valores referenciales de laboratorio de la creatinina y compararlos con el

valor obtenido de nuestra muestra problema que analizaremos.

Sealar las principales patologas que se presentan, cuando se tienen valores superiores
o inferiores a los valores de normalidad de creatinina en una muestra biolgica

MARCO TEORICO:

La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la

creatina por prdida de una molcula de agua. A su vez, la creatina se produce por
hidrlisis del fosfato de creatina, por accin de la creatin-fosfo-kinasa (CPK), apareciendo
como metabolitos de dicha reaccin el fosfato energtico y la creatina. El radical fosfato
puede aportar energa directamente por dicha reaccin o a travs de su acoplamiento a
una molcula de ADP para formar ATP y posterior hidrlisis por accin de ATPasa.

La eliminacin de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente a

travs de la filtracin glomerular, siendo un importante ndice del funcionalismo renal. A
diferencia de la urea, la eliminacin de creatinina por la orina no viene afectada por la
diuresis, al mismo tiempo que para una misma persona es muy constante su eliminacin
diaria con casi independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor
condicionante ms directo de su excrecin total por da. En resumen, podemos decir que
la eliminacin de creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor constante,
dependiente principalmente de la masa muscular del individuo, y que por otro lado el
clculo del aclaramiento de la creatinina ser un parmetro directo del funcionalismo
renal.
La creatinina es una molcula de desecho que se genera a partir del metabolismo
muscular. La creatinina proviene de la creatina, una molcula muy importante para la
produccin de energa muscular. Aproximadamente el 2% de la creatina del cuerpo se
convierte en creatinina cada da. La creatinina se transporta desde los msculos por
medio de la sangre hacia el rin. Los riones filtran la mayora de la creatinina y la
eliminan en la orina.

Aunque es una sustancia de desecho, la creatinina es una prueba diagnstica esencial,

ya que se ha observado que su concentracin en sangre indica con bastante fiabilidad el
estado de la funcin renal. Si los riones no funcionan bien, no eliminan bien la creatinina
y por lo tanto sta se acumula en la sangre. Por esto la creatinina puede avisar de una
posible disfuncin o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten sntomas. Por
eso la creatinina suele figurar en los anlisis de sangre que serealizancomnmente. Los
valores normales de creatinina en la sangre son aproximadamente 0,6 a 1,2 miligramos
(mg) por decilitro (dL) en los varones adultos y 0,5 a 1,1 miligramos por decilitro en las
mujeres adultas. Los adultos con mucha masa muscular pueden tener ms creatinina en
la sangre que la poblacin normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener
menos creatinina en la sangre de lo normal. Algunos frmacos pueden producir una
elevacin anormal de las concentraciones de creatinina en sangre. Una concentracin
muy elevada de creatinina en la sangre puede indicar la necesidad de someterse a dilisis
para eliminar las sustancias de desecho de la sangre. VALORES NORMALES EN LA
SANGRE Los valores normales en los hombres adultos son entre 0,7 y 1,3 mg por
decilitro. En las mujeres adultas entre 0,5 y 1,2 mg por decilitro En los nios pequeos se
aceptan valores de 0,2 y 1 mg/dl. Los valores ms altos de 4 mg/dl se deben a un fallo
renal importante. USO EN DIAGNSTICO Medir la creatinina del suero es una prueba
simple y es el indicador ms comn de la funcin renal. Una subida en los niveles de
creatinina de la sangre solamente es observada cuando hay un marcado dao en los
nefrones(RC). Por lo tanto esta prueba no es conveniente para detectar estados
tempranos de enfermedades del rion Una mejor valoracin de la funcin del rin es
dada por la prueba de aclaramiento de creatinina.

La separacin de creatinina puede ser calculada con precisin usando la concentracin

de la creatinina del suero y alguna o todas las variables siguientes: sexo, edad, peso, y
raza segn lo sugerido por la National Diabetes Association con una recoleccin de orina
de menos de 24 horas. Algunos laboratorios calcularn el ClCr si est escrito en la forma
de solicitud de la patologa; y, la edad, el sexo, y el peso necesarios son incluidas en la
informacin del paciente. 5.6 INSUFICIENCIA RENAL La insuficiencia renal (o fallo renal)
es la condicin en la cual los riones dejan de funcionar correctamente. Fisiolgicamente,
la insuficiencia renal se describe como una disminucin en la filtracion de la sangre tasa
de filtracin glomerular (TFG). La insuficiencia renal se puede dividir ampliamente en dos
categoras, insuficiencia renal aguda e insuficiencia renal crnica.

Causas de la insuficiencia renal La diabetes es la causa ms frecuente de insuficiencia

renal, y constituye ms del 40 por ciento de los casos nuevos. Incluso cuando los
medicamentos y la dieta pueden controlar la diabetes, la enfermedad puede conducir a
nefropata e insuficiencia renal.

Una causa tpica de insuficiencia renal en los nios es el Sndrome urmico hemoltico
(SUH), una enfermedad causada por la bacteria Escherichia coli O157:H7 que puede
ocasionar la muerte o dejar daos renales, neurolgicos o hipertensin arterial.

Aunque cualquier persona y a cualquier edad puede desarrollar insuficiencia renal

crnica, existen ciertos factores de riesgo identificados que favorecen la aparicin de
alteraciones renales: * Diabetes * Hipertensin * Enfermedades del corazn *
Antecedentes familiares de enfermedad renal * Edad * Raza Las personas con
insuficiencia renal tienen que someterse a dilisis pero no en todas las ocasiones, la cual
reemplaza algunas de las funciones de filtracin de los riones, o a un transplante para
recibir el rin de un donante sano. Debido a que hay pocos sntomas en los inicios de la
enfermedad, el diagnstico depende de las pruebas de laboratorio. Para ello es necesario
reconocer ciertas anormalidades o marcadores renales como la presencia de protenas
en la orina y disminucin de la funcin renal por ms de tres meses.

Determinacin de Creatinina:

La reaccin qumica aplicable para fotometra es la descrita por Jaffe, basada en el color
anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato alcalino. Hay varias
substancias en el suero y orina que actan como cromgenos inespecficos, lo que es un
problema principalmente para el clculo del aclaramiento. Por este motivo tiene una gran
importancia la adecuacin de todas

las variables de la reaccin, muy especialmente el pH, con el fin de obtener la mxima
sensibilidad para la creatinina y la mnima interferencia de cromgenos. Adaptando la
reaccin a una medida cintica, se logra una gran especificidad debido a que la
creatinina reacciona con el picrato alcalino con ms rapidez que los cromgenos
(metilguanidina, picramato,), por lo que la medida del incremento de color en un breve
perodo de tiempo inicial de la reaccin valorarn principalmente creatinina, con poca
influencia de los cromgenos inespecficos, por esto es recomendable, de ser posible, la
determinacin cintica.

MATERIALES

Pipeta automtica, de ul

Pipeta de 1ml

Muestra (sangre)

Espectrofotmetro

Tubos de ensayo

Cubetas de 1cc
 Tubo tapa lila

REACTIVOS

Reactivo Tapa Blanca: solucin de cido pcrico

Reactivo Tapa Azul: solucin de hidrxido

Standard: solucin de creatinina 2 mg/dl.

PROCEDIMIENTO

1. Preparar el reactivo de trabajo, con la mezcla de los reactivos de los frascos de tapa
blanca y azul

2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.

4. En tres cubetas de 1cc marcadas B (Blanco), S (Estndar) y D (Desconocido), colocar:

B S D

R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Estndar - 100 ul -

Muestra - - 100 ul

5. Leer la densidad ptica en espectrofotmetro a 492 nm.

6. Leer la absorbancia despus de 30 s de haber puesto la cubeta, esperar a los 90 s y

tomar anotar una nueva medida.

7. Calcular el resultado.

NORMALIDAD

Valores normales de Creatinina:

0,7 1,4 mg/dl Varones

0,6 1,1 mg/dl Mujeres

Los adultos con mucha masa muscular pueden tener ms creatinina en la sangre que la
poblacin normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener menos creatinina
en la sangre de lo normal.

CONCLUSIONES:
Se realizo la determinacin de Creatina, y se concluyo que la creatinina es la molcula
producto de deshecho del metabolismo proteico.

La determinacin de creatina se utiliza en la prctica clnica como un parmetro idneo

para valorar el funcionamiento renal.

DETERMINACIN DE UREA.

INTRODUCCIN

La urea representa la fraccin de nitrgeno no proteico ms importante en la mayora de

los lquidos biolgicos del organismo, se eliminacin en el hombre es el principal producto
final del metabolismo proteico. Se produce en el hgado y es excretada por la orina a
travs de los riones.

OBJETIVOS:

Practicar el adecuado manejo de la tcnica para la determinacin de urea en una muestra

biolgica

Determinar los valores de referencia de la urea y compararlos con el valor obtenido en

nuestra muestra problema que se analizara..

Sealar cules son las principales patologas que se presentan si tenemos valores altos o
bajos de urea en una muestra biolgica.

MARCO TEORICO

La Urea Es un compuesto qumico cristalino e incoloro, de formula CO(NH2)2, soluble en

agua y en alcohol. Se encuentra abundantemente en la orina y en la materia fecal. Es el
principal producto terminal del metabolismo de protenas en el hombre y en los dems
mamferos. La urea se presenta de forma esfrica o granular. Es una sustancia que tiene
la capacidad de absorber agua de la atmosfera y presenta un ligero olor a amoniaco. La
orina humana contiene unos 20g por litro, y un adulto elimina de 25 a 39g diariamente

La concentracin sangunea de amoniaco es superior en los infantes que en los adultos,

debido a que el desarrollo de la circulacin heptica se termina despus del nacimiento.
La hiperamonemia es una entidad que se presenta con frecuencia debido a defectos
congnitos en el ciclo de la urea. El error innato del metabolismo ms comn es la
deficiencia en ornitina transcarbamilasa. La hiperalimentacin es una causa mucho ms
frecuente de hiperamonemia en infantes. Con frecuencia, se diagnostica el sndrome de
Reye por un amoniaco sanguneo elevado en ausencia de otra causa demostrable.

Los pacientes adultos muestran elevadas concentraciones de amonaco sanguneo en

las etapas terminales de: la cirrosis heptica, la falla heptica y la necrosis del hgado
aguda y subaguda. Se presagia el comienzo de la encefalopata heptica por una
elevacin en el amonaco sanguneo. Se ha demostrado que la medicin en lquido
cefalorraqudeo (LCR) de la glutamina, correlaciona bien con el desarrollo de la
encefalopata heptica. Tambin se puede utilizar la medicin de la glutamina en el
LCR, para diferenciar la encefalopata heptica de la sptica. Sin embargo, no es comn
la medicin de la glutamina en el LCR. La excrecin de amonaco urinario se eleva con
la acidosis y se disminuye en la alcalosis, puesto que la formacin de sales de amonio
es un mecanismo importante para excretar el exceso de iones hidrgeno. Daos en los
tbulos renales distales, tal como ocurre en la falla renal, la glomerulonefritis, el
hipercorticoidismo y la enfermedad de Addison, conllevan a una excrecin de amonaco
disminuida sin presentar cambios en los niveles sanguneos de amonaco.

Puesto que la urea se sintetiza en el hgado, en la enfermedad heptica sin dao en la

funcin renal, se presenta nitrgeno ureico srico bajo, aunque la relacin urea a
creatinina se puede conservar normal. La elevacin en el nitrgeno ureico srico no
implica necesariamente dao renal, puesto que la deshidratacin puede llevar a
concentraciones de nitrgeno ureico tan altas como 600 mg/L. En los infantes que reciben
una frmula alta en protenas pueden tener niveles de nitrgeno ureico de 250 a 300
mg/L. Naturalmente, enfermedades como la glomerulonefritis aguda, la nefritis crnica, el
rin poliqustico y la necrosis renal elevan el nitrgeno ureico.

La urea, que constituye el 80% del nitrgeno en la orina, procede de la descomposicin

de las clulas del cuerpo pero, sobre todo, de las protenas de los alimentos.

USOS Debido a su alto contenido en nitrgeno, la urea preparada comercialmente se

utiliza en la fabricacin de fertilizante agrcola; esencial en el metabolismo de la planta ya
que se relaciona directamente con la cantidad de tallos y hojas, las cuales absorben la luz
para la fotosntesis. Adems el nitrgeno est presente en las vitaminas y protenas, y se
relaciona con el contenido proteico de los cereales. En dermatologa la urea se utiliza
como humectante natural por sus excelentes propiedades hidratantes.

Ciclo de la urea El llamado ciclo de la urea, es el proceso que consiste en la formacin de

urea a partir de amonaco. El ciclo de la urea (Ciclo de Krebs-Henseleit) corresponde a la
via metablica usada para eliminar los desechos nitrogenados del organismo. Los
diversos compuestos pueden entrar por casi cualquier parte del ciclo, y el producto final
de desecho es la urea. La mayora del ciclo de la urea es citosolico, pero la ornitina
transcarboxilasa es intramitocondrial. Los principales ingresos del ciclo son los
aminocidos, los cuales degradan su parte amnica en el ciclo y su parte carboxilica en el
Ciclo de Krebs. En el ciclo principal, el nitrgeno entra por medio del amonio (NH4) y
mediante la Carbomil-P sintetasa forma Carboamil-P NH3 + CO2 + 2 ATP -----> H2N--CO-
-O-- PO4- El gasto de dos molculas de ATP desplaza el equilibrio de la reaccin a la
derecha y fuerza la sntesis del carbamilfosfato. La ornitina se convierte en citrulina
directamente por el paso del carbamilo del carbamilfosfato a la ornitina en la reaccin de
transcarbamilacin. La citrulina es, por lo tanto, una carbamilornitina, cuya sntesis se
realiza en la mitocondria de la cual sale al citosol para continuar el ciclo.

La formacin de arginina es un proceso ms complejo que requiere la presencia de

aspartato, ATP y Mg+2. El primer paso es la formacin de argino-succinato por la
condensacin (en presencia de ATP y Mg+2) de citrulina y aspartato. El argininosuccinato
se fragmenta en arginina (lista para ser atacada por arginasa) y fumarato, que entra al
ciclo de krebs y permite la regeneracin de aspartato. Finalmente, la arginasa hidroliza a
la arginina en urea y ornitina, la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e
iniciar el ciclo aceptando otro carbamilfosfato. Dada la toxicidad y la necesidad de manejar
concentraciones cambiantes de NH4+, el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de
ajuste pudiendo, de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse, cada 24 horas en
condiciones normales, de 5 a 50 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden ser
lentos, requiriendo de 3 a 4 das para instalarse, por depender de la cantidad de enzimas
presentes, o rpidos, bajo control hormonal, instalados en minutos, en este caso en
relacin con el mayor acopio de sustratos, sobre todo de acetil-glutamato, el modulador
alostrico positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato, alimentador
del ciclo.

Toxicidad del amoniaco El amoniaco generado por las bacterias entricas se absorbe en
la sangre de la vena porta, por tanto sta contiene niveles ms altos de amoniaco que la
sangre sistmica. Ya que un hgado sano metaboliza rpidamente el amoniaco de la
sangre portal, la sangre perifrica se encuentra virtualmente libre de amoniaco; esto
resulta esencial, puesto que an cantidades mnimas de amoniaco son txicas para el
sistema nervioso central. En caso de que la sangre portal no pase por el hgado, el
amoniaco en sangre sistmica puede elevarse a niveles txicos. Esto puede ser
consecuencia de una disminucin pronunciada en la funcin heptica, o al desarrollo de
comunicaciones colaterales entre venas porta y sistmicas, como sucede en la cirrosis.
Los sntomas de la intoxicacin por amoniaco incluyen temblor, lenguaje poco entendible,
visin borrosa y, en casos graves, coma y muerte. Estos sntomas se asemejan a los del
coma heptico, que se presenta cuando los niveles de amoniaco en sangre y en cerebro
se elevan en forma significativa.

DETERMINACIN UREA EN LA SANGRE Mide la cantidad (concentracin) de urea o

nitrgeno ureico presente en la sangre. El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos
de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en
personas con dieta pobre en protenas. Toda esta urea debe eliminarse por orina; de lo
contrario se acumular en lquidos corporales. Su concentracin normal promedio en el
plasma es de 0.26 mg/dl, pero se han observado en estados anormales raros valores de
hasta 8 mg/dl; y pacientes con insuficiencia renal muchas veces tienen valores tan altos
como 2 mg/dl. Los dos factores principales que establecen el ritmo de excrecin de urea
son: 1) la concentracin de urea en el plasma, y 2) la intensidad de filtracin glomerular
DETERMINACION DE UREA

La ureasa cataliza la hidrlisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado

se valora mediante una reaccin enzimtica (GLDH), pasando NADH a NAD+.
La disminucin de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la
concentracin de urea.
Ureasa
+
Urea + H2O +2H 2 NH3 + CO2

GLDH
2NH3 + -cetoglutarato + 2NADH H2O + NAD+ + 2L-glutamato

MATERIALES
Pipeta automtica, de ul
Pipeta de 1ml
Muestra (sangre)
Espectrofotmetro
Tubos de ensayo
Cubetas
Reactivo de trabajo
Standar
Tubo tapa lila

PROCEDIMIENTO
1. Preparar el diluyente para enzimas en un litro de agua destilada.
2. Centrifugar la muestra de sangre a 3000 rpm por 5 minutos.
3. En 3 tubos marcados B (Blanco), S (Estndar), D (Desconocido), colocar:

B S D
R. Trabajo 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
Estndar - 5 ul -
Muestra - - 5 ul
Incubar 10 minutos a temperatura ambiente

4. Leer la densidad ptica en espectrofotmetro a 580 nm.

5. Calcular el resultado.

Normalidad
20 a 50 mg%
CONCLUSIONES

Se realizo la determinacin de Urea, y se concluyo que la urea es la excrecin o

eliminacin de los desechos nitrogenados luego del metabolismo celular de las protenas.

La determinacin de urea se utiliza en la practica clnica para valorar el funcionamiento

renal, y esta muy ligada a la produccin y metabolismo del amoniaco a nivel del hgado.

Bibliografia:

http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-urea-informe-de.html

http://trabajosmedicos.blogspot.pe/2012/08/determinacion-de-creatinina-informe-de.html

https://es.slideshare.net/guillermoreynaldomejiagutierrez/labo-de-urea

https://es.slideshare.net/karenstefysuarez/proyecto-de-urea-en-la-sangre

.http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf