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PRCTICA No.

4 PRUEBA USR (Unheated Serum Reagin) PARA LA DETECCIN DE TREPONEMA PALLIDIUM INTRODUCCIN La sfilis, ocasionada por la bacteria Treponema pallidum, es una infeccin grave que puede permanecer durante largo tiempo en el cuerpo de la persona enferma sin tener manifestaciones visibles. Cuando la infeccin no es tratada puede causar lesiones irreversibles en el sistema nervioso, rganos internos y huesos. Treponema pallidum Es una espiroqueta delgada con forma de sacacorchos que posee motilidad rotatoria lenta y es el agente causal de la sfilis. La transmisin ocurre por contacto con superficies mucosas (relaciones sexuales con una persona que tiene una lesin sifiltica primaria o secundaria activa) o por sangre, en el caso de la infeccin congnita sta ocurre por va transplacentaria. La enfermedad se inicia con una lesin en el punto de entrada, por lo general una lcera genital. Despus de cicatrizar esta lesin, los microorganismos invaden al cuerpo, y la enfermedad reaparece semanas ms tarde como una erupcin maculopapular generalizada denominada sfilis secundaria. Luego entra en una segunda fase denominada de remisin o latencia, sta puede ser resuelta o reaparecer aos o decenios despus y se le denomina sfilis terciaria. Caractersticas de las clasificaciones de sfilis Sfilis primaria. Consiste en una ppula que evoluciona hasta una lcera en el sitio de la infeccin, la ubicacin suele encontrarse en los genitales externos o en el cuello uterino, la lesin se indura pero se conserva indolora y evoluciona hasta una lcera con base firme y bordes elevados a la que se le denomina chancro sifiltico; el perodo de incubacin entre el contacto y la aparicin de la lesin es de unas tres semanas y se cura de manera espontnea despus de cuatro a seis semanas. Sfilis secundaria. Se desarrolla de dos a ocho semanas despus de la aparicin del chancro, se caracteriza por una erupcin maculopapular mucocutnea simtrica, con aumento de tamao y no doloroso de los ganglios linfticos inguinales, acompaada de un sndrome seudogripal con dolor de garganta, cefalea, fiebre, mialgias, anorexia, linfadenopatas, exantema mucocutneo generalizado y malestar general. Las lesiones cutneas se distribuyen entre el tronco y las extremidades, a menudo abarcan las palmas, plantas y cara; cerca de la tercera parte de los pacientes desarrollan erosiones verrugosas indoloras en las mucosas (condilomatosis lata), las cuales se localizan en sitios tibios y hmedos como los genitales y el perineo. Las lesiones son abundantes en espiroquetas y muy contagiosas, estas lesiones tambin se resuelven de manera espontnea despus de semanas. Sfilis latente. Etapa en la que no hay manifestaciones clnicas pero persiste la infeccin, en los primeros aos de latencia puede verse interrumpida por recadas de sfilis secundaria que en lo sucesivo son menos graves; en la sfilis latente tarda en menos de cuatro aos se interrumpen las recadas y los pacientes se vuelven resistentes a la infeccin; prosigue el riesgo de transmisin por la sangre y las madres pueden transmitir la bacteria a los neonatos durante todo el periodo lactante. Sfilis tarda. Las manifestaciones pueden aparecer slo cinco aos despus de la infeccin, pero se produce de manera caracterstica de los quince a los veinte aos post-infeccin. La neurosfilis se debe a la lesin producida por una combinacin de meningovasculitis y cambios parenquimatosos degenerativos por todo el sistema nervioso. Dentro de los padecimientos graves se puede presentar cuadros de meningitis crnica con fiebre, cefalea, datos neurolgicos locales y aumento de clulas y protenas en el lquido cefalorraqudeo. Puede presentarse degeneracin de la corteza cerebral lo que origina cambios mentales que pueden variar entre la disminucin de la memoria, alucinaciones y hasta psicosis. Prevencin La mejor manera de prevenir la sfilis es tener sexo con una sola pareja estable. La persona que padece sfilis no debe tener relaciones sexuales, ni siquiera con condn, hasta que est curada. El preservativo no es una garanta. Adems:

Es importante hablar con la pareja sobre las enfermedades de transmisin sexual. Toda mujer embarazada debe hacerse un examen mdico para determinar si est infectada y recibir el tratamiento necesario para proteger a su beb. INSERTO INTRODUCCIN Las pruebas serolgicas para el diagnstico de la sfilis se dividen en treponmicas, las que utilizan preparadas de Treponema Pallidium o antgenos recombinantes y pruebas no treponmicas (de escrutinio) que utilizan un antgeno homlogo como la cardiolipina; una de estas pruebas es la de USR (Unheated Serum Reagin) el reactivo es ms estable y no se requiere inactivar el complemento cada vez, en comparacin a la prueba VDRL. Los anticuerpos especficos aglutinan las partculas microscpicas de cardiolipina, lecitina y colesterol. El antgeno es producido bajo condiciones normales. Presentaciones 300 pruebas con y sin controles 200 pruebas con controles Otro material requerido: Microscopio Mquina rotatoria 2 tubos con heparina Centrfuga

Micropipeta 10-100L Mosaico Pipeta de 1ml o jeringa estril

Almacenamiento y estabilidad Conservar el reactivo y sueros control entre 275K a 281K. Los sueros control una vez hidratados conservarlos entre 275K a 281K. El reactivo mantendr sus propiedades durante el tiempo indicado en la etiqueta. Los sueros control hidratados conservan sus propiedades durante 3 meses almacenados entre 275K a 281K. Prueba cualitativa Si se requiere hidratar los sueros control adicionar 0.5ml de agua destilada dejar reposar un agitar manualmente. Usar sueros o plasmas problema en buen estado (no turbio, no hemolisado, no lipmico).

Perforar la retapa del frasco gotero con la aguja sin bisel. Atemperar los reactivos. 1.- Colocar 50l de suero o plasma en un crculo de placa horadada y distribuirlo. 2.- Adaptar la aguja al inserto. Agitar para homogenizar el reactivo y con el frasco y aguja en posicin colocar una gota del reactivo sobre el suero problema. 3.- Mezclar a 180rpm en la mquina rotatoria por 4 min. 4.- Determinar si hay floculacin del cristal al microscopio ptico con el objetivo seco dbil. Precauciones Los sueros control no deben usarse como estndares de calibracin. La prueba es inespecfica y debe complementarse con una prueba treponmica y/o antecedentes clnicos. El antgeno no debe congelarse Cerrar el recipiente del antgeno para evitar su evaporacin. Verificar ocasionalmente el reactivo con los controles positivo y negativo. Manjese los sueros control y problema como si fueran capaces de transmitir HBsAg, HIV, HCV y otras enfermedades.

Limitaciones La prueba no es treponmica, su utilidad es de escrutinio para confirmar el diagnstico, utilizar una prueba treponmica. RESULTADOS Se realiz la prueba para T. Pallidium por medio de la tcnica de USR (Unheated Serum Reagin) para 2 sujetos, sin embargo los resultados no se lograron observar por la falta de mquina rotatoria la cual sirve para homogenizar el reactivo de manera adecuada, adems de que no se realiz adecuadamente la perforacin de la tapa del gotero con los sueros control, por lo cual no se logr observar la reaccin en el microscopio. CONCLUSIONES La U.S.R. (Unheated Serum Reagin) es una prueba no treponmica (de escrutinio) que utilizan un antgeno homlogo como la cardiolipina la cual es un reactivo es ms estable y no se requiere inactivar el complemento cada vez, en comparacin a la prueba VDRL, por lo que esta tcnica corresponde a una modificacin de la tcnica V.D.R.L. donde la suspensin de antgeno viene lista para usar y se realiza en una lmina de vidrio con crculos de 14 mm de dimetro, que se agita durante 4 minutos a 180 rpm en una mquina rotatoria y se lee al microscopio con aumento 100x para observar si es que hay positividad agregados por floculacin de los cristales formados. Se denomina reagina a una protena similar a un anticuerpo, que se une a un antgeno, como pueden ser la cardiolipina y la lecitina (en este casoi cardiolipina) en las pruebas no-treponmicas, y se denomina anticuerpos reagnicos a anticuerpos no-treponmicos, producidos por un individuo infectado con T pallidum, contra sus propios tejidos o contra clulas de mamferos. Los anticuerpos especficos aglutinan las partculas microscpicas de cardiolipina, lecitina y colesterol. La USR (Unheated serum reagin) tiene la ventaja que es poco costosa, tampoco requiere de inactivacin de suero por calor y, al igual que otras pruebas no treponmicas, tiene buena sensibilidad y especificidad REFERENCIAS http://www.ops.org.gt/epc/manualepi/Sifilis.pdf http://www.facmed.unam.mx/deptos/salud/periodico/ets/trepo.html http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm