Requerimientos Nutricionales de

Ana Lilian Zavala Rico A00889426 Betzaira del Carmen Aceves Muoz A01062852 Brenda Guadalupe Vzquez Garca A01202878 Francisco Javier Ramrez Carbajal A00889696

Introduccin
Investigacin sobre utilizacin de azufre.

Crecen en medios complejos:

Caldo infusin de carne Glucosa+peptona Casena (con hgado o levadura)

Produccin de toxina -> muchas propuestas de medios

simples.

Objetivo
Obtener los requerimientos nutricionales de varias
cepas de Clostridium perfringens

Examinar la fuente de energa y los compuestos

inorgnicos

Se reportan slo 3 cepas de Clostridium perfringens

Mtodos
Cepas se isolaron de aguas residuales Las muestras se pasteurizaron antes de incubarlas

Se inocularon los tubos a 37C por 20h.

Colonias se identificarion mediante microscopa, fermentacin de azcares y fermentacin en leche desnatada.

Inoculo: Anaerobios en agua de peptona Pases diarios Incubacin por 15 horas Centrifugados, lavados y resuspendidos

En experimentos con micronutrientes se usaron tubos anaerobicos.

Se midi crecimiento por densidad ptica.

Nmero de medio

Composicin del medio

Nmero de medio
Medio definido Medio parcialmente definido Medio mnimo Medio basal Medio libre de fosfato Medio libre de sulfuro

Dietil-barbiturato de sodio

Glucosa Adenina Biotina Pantotenato de calcio Piridoxina Factores de crecimiento cido Ascrbico cido Mercaptoactico cidos Casamino libres de vitaminas

Tabla 1. Tipos y composiciones de medios para crecimiento de Clostridium perfringens

Compuestos inorgnicos
Fosfato; indispensable

Sulfato; no indispensable
Magnesio; INDISPENSABLE (50-100 mg MgCl2) Fierro; indispensable (0.6 mg ion ferroso) Magnesio, sodio, zinc, calcio sin incremento

A. Incremento de la concentracin de sodio con potasio constante en diferentes concentraciones de potasio

Normalida d de sodio

B. Incremento de la concentracin de potasio Normalida

d de K

Sin crecimiento; (+), +, ++ incremento en el grado de crecimiento

Tabla 2. Dependencia de crecimiento de Clostridium perfringens en concentraciones de sodio y potasio

Obtenido y modificado de Fuchs, A.-R. et al.

Requerimientos de Nitrgeno
Cubierto por casena hidrolizada (adems del
triptfano ya agregado)

Casena mezcla de aminocidos Ion amonio; indispensable (crecimiento: 500 mg

NH4Cl)

Requerimiento de Aminocidos
Cada cepa tiene sus requerimientos especficos.

No pueden crecer sinarginina, cido asprtico,

cistina (cido mercaptoactico), cido glutmico, histidina, leucina, fenilalanina, treonina, triptfano, tirosina y valina.

Metionina A

C B C

Isoleucina y alanina A

Efecto de la Concentracin de Aminocidos

Figura 1 El efecto del incremento en la concentracin de aminocidos en el crecimiento de Clostridium perfringens.

Requerimiento de Aminocidos
Se not interrelacin entre los aminocidos.

Glicina, licina y serina hidroxiprolina y prolina.

No se observ una inhibicin clara, con excepcin de
la cepa C.

Para la cepa BP6K la isoleucina, metionina y serina

son esenciales pero no la alanina y el cido asprtico. La piridoxamina o piridoxal aparentemente elimina la necesidad de lisina, alanina, cido asprtico y glicina.

Requerimiento de Carbono
Substrato Inulina Almidn soluble Sacarosa Maltosa Lactosa Glucosa Galactosa Fructosa Crecimiento (%) 12.6 72.4 88.5 72.4 66 100 104 71

Xilosa Arabinosa
Manitol

20.6 5.3
0.6

Tabla 3. Crecimiento de Clostridium perfringens en medios de cultivo definidos con diferentes fuentes de carbono como sustrato

Resultados
Resultados

Fig. 1 Efecto del pH en el crecimiento de Clostridium perfringens

Fig. 2 Efecto del temperatura en el crecimiento de Clostridium perfringens

Requerimientos Nutricionales para el Crecimiento y esporulacin de Clostridium perfringens (1975)

S. I. Muhammed, S. M. Morrison, W. L. Boyd

2 cepas
Aminocidos Triptfano, arginina, cido glutmico,
histidina, leucina, treonina, fenilalanina, tirosine, valina , cistina, cido ascrbico, pantotenato de Ca, piridoxina, biotina, adenina, glucosa, sales y cido tiogliclico.

No esenciales Alanina, cido asprtico y metionina No glucosa=No crecimiento Metioninaesporulacin

Medio Mnimo para Clostridium perfringens (1985)

S B Goldner, M Solberg y L S Post

2 cepas: C. perfringens ATCC 3624 y NCTC 10240

Aminocidos Triptfano, arginina, cido glutmico,
histidina, isolecucina, leucina, metionina, lisina, treonina, fenilalanina, tirosina, valina.

MineralesFe, K, Mg, Mn, Na, Zn. NucleotidosAdenina

VitaminasBiotina, cido nicotnico, cido pantotenico

y piridoxamina.

Conclusin
Los diferentes estudios mostraron una similitud en los
requerimientos nutricionales para el cultivo de Clostridium perfringens.

Las variaciones probablemente se deben a la

diferencia entre cepas y la estructuracin de los estudios.

Referencias
Anna-Riitta Fuchs & G. J. Bonde (1957). The Nutritional
Requirements of Clostridium perfringens. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology. Revisado el 28 de agosto de 2013 en: http://mic.sgmjournals.org/content/16/2/317.short

S B Goldner, M Solberg and L S Post (1985). chemostat.

Development of a minimal medium for Clostridium perfringens by using an anaerobic chemostat. Applied and Environmental Microbiology. Revisado el 28 de agosto de 2013 en: http://aem.asm.org/content/50/2/202.full.pdf

S. I. Muhammed, S. M. Morrison, W. L. Boyd (1975). Nutritional

Requirements for Growth and Sporulation of Clostridium perfringens. Journal of Applied Microbiology. Revisado el 28 de agosto de 2013 en: http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.13652672.1975.tb00529.x/abstract

Referencias de Imgenes
More Wanted:
http://web.mst.edu/~microbio/bio221_2007/c_perfingen s_3.htm

RIP: http://e-ciencia.com/blog/wpcontent/uploads/2011/12/cell-death.jpg