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REUNION DE LABORATORIO N° 10

IV UNIDAD

PROTEINAS Y ACIDOS NUCLEICOS: INTEGRACION DEL METABOLISMO

REUNION DE LABORATORIO N°10 PRACTICA N° 18
DIGESTION DE LAS PROTEINAS: ACCION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS PANCREATICAS SOBRE LA CASEINA
I. INTRODUCCION: La digestión de las proteínas, o degradación hasta aminoácidos en el tubo digestivo, es un proceso complicado que se realiza con el concurso de diversas enzimas proteolíticas Entre estas enzimas proteoliticas tenemos: a) de origen gástrico: pepsina y renina; b) de origen pancreático: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa; c) de origen intestinal: aminopeptidasas, dipeptidasas. Son endopeptidasas: pepsina, tripsina, quimotripsina, elastasas. Son exopeptidasas: carboxipeptidasa y aminopeptidasa. La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es específica de los enlaces peptidicos sobre el lado carboxílico de residuos de aminoácidos básicos: lisina y arginina solamente. La quimotripsina es específica para los enlaces peptidicos de los aminoácidos sin carga como los aromáticos: tirosina, triptofano y fenilalanina. La elastasa tiene una especificidad amplia, ataca a los residuos pequeños, como la glicina, alanina y serina. La carboxipeptidasa hidroliza el enlace peptídico carboxiterminal en las cadenas polipeptidicas. La falta de enzimas proteolíticas produce creatorrea (presencia de fibras musculares identificables en las heces, que provienen de la carne de los alimentos), y azorrea (gran cantidad de productos nitrogenados en las heces). En el lactante con ausencia congénita de tripsinogeno y por consiguiente por falta de activación de quimotripsinógeno y procarboxipeptidasa, existe hipoproteinemia, con retardo marcado del crecimiento. La presente práctica tiene como finalidad demostrar la acción hidrolítica de las enzimas digestivas contenidas en el páncreas sobre la caseína o proteína de la leche, determinado los productos (aminoácidos) con ninhidrina

* En este nuevo sistema.Solución acuosa de ninhidrina al 0. RESULTADOS Sistema I: I 1 1 1 --II 1 1 --1 III --1 1 1 III.Acido tricloroacético al 10%.Caseína al 1% en buffer fosfato 0.1 M pH 8. * Después del tiempo de incubado tomar 0. * Mezclar y llevar a un baño de agua hirviendo (franca ebullición). REACTIVOS A UTILIZAR: . .1 M pH 8. .25% saturada con butanol.II. .5 ml. de cada uno de los tubos y trasladarlo a otro sistema numerado (I. IV. * Observa los cambios de color de cada tubo. II.Solución de extracto pancreático. . * Luego a los tubos de incubación del primer sistema. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento Armar el siguiente sistema: COMPONENTES (ml) Caseína al 1% Buffer fosfato 0. agregar 1 ml de solución de ninhidrina.Buffer fosfato 0. . agregue gota a gota 1 ml de ácido tricloroacético al 10% agitando continuamente.0 Solución de extracto pancreático Agua destilada Pasos: * Mezclar y colocar al baño de agua a 37 ºC por 30 minutos. durante 3 a 5 minutos. * Observe las variaciones que se produce en cada tubo. III).1 M pH 8.

Ausencia de sustrato. haciendo que se tiña de un color rojo pardo medio. así que la proteína no se degrada. TUBO III. TUBO II: En este tubo sólo hay sustrato. debido a esto el tubo I se va a teñir más oscuro.   TUBO I: La ninhidrina evidencia la formación de aminoácidos. Trabajando en el primer sistema: 1ml de ácido Tricloroacetico Resultados: El ácido tricloroacético precipita la proteína que no ha sido degrada. es por esto observamos lo siguiente: . la ninhidrina lo reconoce con menor intensidad. La tinción es casi transparente. por la presencia de enzima y sustrato. No hay reacción alguna.

no quedaron residuos de péptidos por lo que la solución al entra en contacto con el ácido tricloroacético no revela precipitado.Lipasa pancreática. ¿Cómo se explica los cambios de color. . La proteólisis se dio por completo. Por lo tanto en un sistema donde se produce la digestión de proteínas correctamente se demostraría la degradación de la proteína debido a que la ninhidrina le daría un color violeta intenso al encontrar la presencia de aminoácidos. TUBO III: Ausencia de sustrato. . 2. Indica que hay aminoácidos libres hay aminoacidos libres. V.Amilasa pancreática. Da una coloración que varía de azul a violeta intenso. CUESTIONARIO 1. Actúa sobre los oligopéptidos y su producto son dipéptidos. después de la reacción con ninhidrina en un sistema donde se produce la digestión de proteínas? La ninhidrina es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de aminoácidos. La coloración producida por la ninhidrina es independiente de la coloración original del aminoácido.Quimiotripsina.   TUBO I: Presencia de sustrato y enzima. después de agregar acido tricloroacetico? El ácido Tricloroacético es un precipitador de proteínas es por esta razón que en un sistema de digestión de proteínas correctamente realizado no se . Rompe el almidón en maltosas. Señale las enzimas digestivas pancreaticas y los sustratos sobre los cuales actúa .Tripsina. TUBO II: Aquí observamos la precipitación de proteína no degradada ya que no hubo enzima que actuara sobre el sustrato. . Degrada los polipéptidos en oligopéptidos. 3. Actúa sobre los lípidos y su producto son cadenas de ácidos grasos y glicerol. Qué efecto tiene el ácido tricloroacetico sobre las proteínas? ¿Qué variaciones se obtienen en un sistema de digestión de proteínas. El ácido tricloroacético no tiene proteínas que precipitar.

observaría variación debido a que las proteínas se habrían degradado a aminoácidos. . En cambio en caso de que no se haya realizado un correcta digestión de proteínas el ácido tricloroacético precipitara a la proteína que no ha sido degradada.