FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

INTRUMENTACION QUIRURGICA

MATERIA: BIOQUIMICA

CODIGO: CN201

GRUPO 01

DOCENTE: MARTIN NUÑEZ

ALUMNOS:

KEINER ANDRES PEÑALOZA PEREZ

VALERIA MENDEZ GUERRERO
IVANA JARAMILLO SALAZAR
VALERIA PAVA GRANADOS
LAURA PEREZ MORILLO

VALLEDUPAR-CESAR

2020-2
 LABORATORIO DE PROTEINAS Y AMINOACIDOS

OBJETIVO GENERAL 

 Identificar las proteínas y los aminoácidos mediante los reactivos de

Biuret, Ninhidrina, millón, ácido nítrico. 
OBJETIVOS ESPECÍFICOS 
 Aprender el funcionamiento bioquímico de los reactivos. 
 Conocer las propiedades físicas y químicas de las proteínas y
aminoácidos. 
COMPETENCIAS
 El estudiante debe estar familiarizado con los conceptos de proteínas y
aminoácidos y la identificación de estos mismos.
 El estudiante ser capaz de aplicar sus conocimientos teóricos en los
laboratorios de bioquímica prácticos.

MARCO TEORICO
Las proteínas son moléculas formadas por aminoácidos que están unidos por un
tipo de enlaces conocidos como enlaces peptídicos. El orden y la disposición de
los aminoácidos dependen del código genético de cada persona. Todas las
proteínas están compuestas por:
 Carbono
 Hidrógeno
 Oxígeno
 Nitrógeno
Y la mayoría contiene además azufre y fósforo.
Las proteínas suponen aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del
organismo, y están presentes en todas las células del cuerpo, además de
participar en prácticamente todos los procesos biológicos que se producen.
Funciones de las proteínas
De entre todas las biomoléculas, las proteínas desempeñan un papel fundamental
en el organismo. Son esenciales para el crecimiento, gracias a su contenido de
nitrógeno, que no está presente en otras moléculas como grasas o hidratos de
carbono. También lo son para las síntesis y mantenimiento de diversos tejidos o
componentes del cuerpo, como los jugos gástricos, la hemoglobina, las vitaminas,
las hormonas y las enzimas (estas últimas actúan como catalizadores biológicos
haciendo que aumente la velocidad a la que se producen las reacciones químicas
del metabolismo). Asimismo, ayudan a transportar determinados gases a través de
la sangre, como el oxígeno y el dióxido de carbono, y funcionan a modo de
amortiguadores para mantener el equilibrio ácido-base y la presión oncótica del
plasma.
Otras funciones más específicas son, por ejemplo, las de los anticuerpos, un tipo
de proteínas que actúan como defensa natural frente a posibles infecciones o
agentes externos; el colágeno, cuya función de resistencia lo hace imprescindible
en los tejidos de sostén o la miosina y la actina, dos proteínas musculares que
hacen posible el movimiento, entre muchas otras.

Aminoácidos
    
Los aminoácidos son compuestos orgánicos que se combinan para
formar proteínas. Los aminoácidos y las proteínas son los pilares fundamentales
de la vida.
Cuando las proteínas se digieren o se descomponen, los aminoácidos se acaban.
El cuerpo humano utiliza aminoácidos para producir proteínas con el fin de ayudar
al cuerpo a:

 Descomponer los alimentos

 Crecer
 Reparar tejidos corporales
 Llevar a cabo muchas otras funciones corporales

El cuerpo también puede usar los aminoácidos como una fuente de energía.

Los aminoácidos se clasifican en tres grupos:

 Aminoácidos esenciales
 Aminoácidos no esenciales
 Aminoácidos condicionales
AMINOÁCIDOS ESENCIALES

 Los aminoácidos esenciales no los puede producir el cuerpo. En

consecuencia, deben provenir de los alimentos.
 Los 9 aminoácidos esenciales son: histidina, isoleucina, leucina, lisina,
metionina, fenilalanina, treonina, triptófano y valina.

AMINOÁCIDOS NO ESENCIALES

No esencial significa que nuestros cuerpos producen un aminoácido, aun cuando

no lo obtengamos de los alimentos que consumimos. Los aminoácidos no
esenciales incluyen: alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido
glutámico, glutamina, glicina, prolina, serina y tirosina.

AMINOÁCIDOS CONDICIONALES

 Los aminoácidos condicionales por lo regular no son esenciales, excepto en

momentos de enfermedad y estrés.
 Los aminoácidos condicionales incluyen: arginina, cisteína, glutamina,
tirosina, glicina, ornitina, prolina y serina.

REACTIVOS

 BIURET: Indica la cantidad de presencia de proteínas en dos o más

sustancias de composición desconocida, es decir, detecta los enlaces
peptídicos.

 NINHIDRINA: Da lugar a una reacción coloreada de los aminoácidos, este

test es utilizado para la identificación y determinación cuantitativa.

 MILLON: Sirve para la identificación de tirosina en la solución, se basa en

que en presencia de un medio ácido las proteínas se desnaturalización
dando un precipitado blanco.

 XANTOPROTEÌCA: Se utiliza para determinar la presencia de proteínas

solubles en una solución empleando ácido nítrico concentrado

MATERIALES 
  Gradilla 
 Tubos de ensayos pirex 
 Pipetas graduadas 
 Pinzas 
 Vaso de precipitados 
 Estufa

REACTIVOS: 

 Biuret 
 Ninhidrina 
 Millón 
 Ácido nitricoHSO4 

MUESTRAS: 

 Tiroxina 1% 
 Valina1% 
 Leucina1% 
 Metionina1% 
 Prolina1% 
 Caseína2% 
 Gelatina2%

PROCEDIMIENTO 

Se realizará el mismo para todos los test que vamos a ensayar, se marcan los
tubos de ensayos con los nombres de las muestras y se prepara un tubo de
agua destilada para el blanco. 

1. TEST DE BIURET 

En los tubos de ensayos con las muestras se añade 1ml de biuret y después de
unos minutos observar
2. TEST NINHIDRINA 

Añadir 7 gotas de ninhidrina a los tubos con las muestras se calientan por 10

minutos. 

3. TEST MILLON 

Se agrega 6 gotas de millón a cada muestra se calienta. 

4. TEST XANTOPROTEICO 

Se agrega 1ml de ácido nítrico concentrado a las muestras se calienta. 

ANALISIS DE RESULTADOS
Obtuvo reacción positiva de
color morada en las muestras
de caseína y gelatina al
2%
Biuret

.
La prolina obtuvo un color
amarillo, pero la metionina y la
leucina obtuvieron un color
purpura por la presencia de
aminoácidos.
Ninhidrin
a

La tiroxina reacciono de forma

positiva obteniendo un color
rojizo.

Millón

La tiroxina reacciono de forma

positiva obteniendo un color
amarillo.

Ácido
nítrico
PARAMETRO DE EVALUACION
1) Escriba la reacción para cada prueba realizada.

proteínas Aminoácidos
Biuret Positivo (tono violeta) Negativo (tono azul)
Ninhidrina Tono amarillo Tono violeta azulado
Millon Negativo Positivo (Tono rojizo)
Ácido nítrico Negativo Positivo (tono amarillo)

2) Cuales son los principales métodos de las distintas fracciones proteica?

Albúmina
Tiene un peso molecular (PM) de 65.000 daltons (Da).
Función. Las principales son: a) fijación y transporte de sustancias, y b)
responsable del control del equilibrio de líquidos entre los compartimientos intra y
extravascular.
Patología. Se encuentra aumentada en la deshidratación y disminuida en los
siguientes procesos: hepatopatías, infección crónica, neoplasias, nefropatía,
hemorragia, inanición y desnutrición.
Albúmina bigeminada o bisalbuminemia
Puede ser debida a tres etiologías:
1. Una mutación hereditaria. El desdoblamiento es una expresión permanente de
una variación genética de la albúmina, sin ninguna consecuencia patológica
conocida en la actualidad.
2. En el curso de un tratamiento con betalactamasas a grandes dosis en una
insuficiencia renal, ya que el antibiótico se fija a la albúmina.
3. En presencia de una fístula pancreática por lisis intracavitaria de la albúmina
debido a las enzimas pancreáticas. La puesta en evidencia de una bisalbuminemia
en una ascitis o pancreatitis con ascitis debe hacer pensar en un pseudoquiste de
páncreas fistulizado. Ello constituye un argumento importante en favor de una
decisión quirúrgica.
Alfa-1 globulina
Los principales componentes son:
 Alfa-1 antitripsina. Su PM es de 45.000 Da.
Función: neutralización de enzimas proteolíticas tipo tripsina.

Patología: aumentada en reacciones inflamatorias y disminuida en el enfisema

pulmonar.
 Alfa-1 lipoproteínas. Su PM es de 200.000 Da.
Función: transporte de colesterol y vitaminas liposolubles.
Patología: aumentada en las hiperlipemias y disminuida en la enfermedad de
Tangier.
 Alfa-1 glucoproteínas. Su PM es de 44.000 Da.
Se halla en tejidos y secreciones mucosas.
 Protrombina. Su PM es de 72.000 Da.
Función: participa en la coagulación sanguínea y disminuye en las hepatopatías.
 Globulina fijadora de hormonas tiroideas. Su PM es de 36.500 Da.
Función: interviene en el transporte de hormonas tiroideas.
Aumenta en el embarazo, con el empleo de anticonceptivos y disminuye en las
glomerulonefritis y el tratamiento con metiltestosterona.

Alfa-2 globulina
Sus componentes son:
 Alfa-2 macroglobulina. Su PM es de 800.000 Da.
Función: inhibición de proteasas. Aumenta en las nefropatías, la diabetes, el
síndrome de Down y el embarazo. Disminuye en la artritis reumatoide y en el
mieloma.
 Haptoglobina. Su PM varía de 85.000 a 100.000 Da.
Función: fija la hemoglobina y conserva el hierro. Aumenta en la inflamación
aguda, las neoplasias, el infarto de miocardio y el linfoma de Hodgkin, y disminuye
en las hepatopatías y en la anemia hemolítica.
 Ceruloplasmina. Su PM es de 132.000 Da.
Función: fijación del cobre. Aumenta en el embarazo y con la ingesta de
anticonceptivos y disminuye en la enfermedad de Wilson.
 Alfa-2 lipoproteínas. Su función es de transporte de lípidos. Aumenta en las
hiperlipemias y disminuye en las enfermedades hepáticas graves.
 Eritropoyetina. Su PM es de 30.000 Da. Actúa como hormona esencial
para la eritropoyesis.
Aumenta en las anemias y disminuye en las enfermedades renales crónicas y en
las enfermedades autoinmunes.

Betaglobulina
Los componentes son:
 Transferrina. Su PM es de 80.000 Da. Es una proteína de transporte que
transfiere el hierro.
Aumenta en la anemia hipocroma y disminuye en hepatopatías, las enfermedades
renales y las neoplasias.
 Betalipoproteínas. Su PM es de 300.000 Da. Su función es el transporte de
lípidos y hormonas.
Aumenta en las nefropatías e hiperlipemias y disminuye en la inanición.
 C3 y C4. Su PM respectivo es de 185.000 y 400.000 Da. Actúan en las
reacciones inflamatorias y disminuyen en las enfermedades inmunes.
 Inactivadora de la esterasa C1. Su PM es de 104.000 Da. Inhibe la
actividad de C1 y disminuye en el edema angioneurótico.
  Hemopexina. Su PM es de 80.000 Da. Participa en el transporte del hemo.
Aumenta en las inflamaciones agudas, neoplasias y disminuye en las
hepatopatías y en la anemia hemolítica.

Gammaglobulina
Sus componentes son todas las inmunoglobulinas: IgG (PM 150.000 Da), IgA (PM
180.000 Da), IgM (PM 900.000 Da), IgD (PM 170.000 Da), e IgE (PM 190.000 Da).
Participan en el sistema inmunitario del organismo. Aumentan en los siguientes
procesos: hepatopatías, infecciones crónicas (banda heteroclonal); mieloma
múltiple, enfermedad de Waldenström, lupus eritematoso sistémico, linfoma,
leucemia, artritis reumatoide (banda monoclonal). Disminuyen en: edad avanzada,
leucemia linfocítica crónica, hipo y agammaglobulinemia y enfermedad de cadenas
ligeras.

3) cuales son los principales métodos de proteína totales?

MÉTODOS PARA DETERMINAR PROTEÍNAS TOTALES

Se basan en:
a) Propiedad de las proteínas de absorber luz en el UV
absorción A=280nm
b) Capacidad de unirse a ciertos colorantes
 Biuret
 Lowry
 Ácido Bicinconínico BCA
 Bradford
c) Formación de derivados químicos
propiedad de absorber luz en el espectro UV
• La mayoría de las proteínas muestran una absorción a 280 nm, la cual se
atribuye al grupo fenólico de la tirosina y al grupo indólico del triptofano
• Tiene la ventaja de que no es necesario utilizar reactivos y la muestra no se daña
o destruye durante la determinación.
Método de absorción UV
• Se determina la cantidad de luz absorbida una solución proteica.
• Para el cálculo de la concentración de dicha solución se aplica la ley de Lambert
–Beer:
A = ε ·c ·l
Donde:
• A = absorbancia
•  = Coeficiente de extinción molar.
• l = longitud de la celda.
• C = concentración
•€ - coeficiente de extinción molecular: la cantidad de luz absorbida por unidad de
concentración Se utiliza el coeficiente de extinción de la Albúmina de Suero
Bovino (BSA) que es de 43824 M-1 cm-1
Métodos colorimétricos
• Usan reactivos determinantes de color
• Miden por colorimetría en espectro luz visible
• Usa curva de proteína patrón (albumina suero bovino)
• Métodos donde la muestra se destruye
Método de Biuret
• Se basa en la formación de un complejo coloreado entre el ion Cu+2 y los grupos
NH4 de los enlaces pépticos en medio básico (NaOH o KOH)
Consideraciones del método de Biuret
• Reacción específica
• Color violeta se lee a 540nm contra curva estándar BSA
• La intensidad del color es proporcional a la cantidad de proteína
• Baja sensibilidad alta concentración de proteína
Método de Lowry
• Combina la reacción del Biuret con la reducción del reactivo de FOLIN-
CIOCALTEAU por los grupos aromáticos de residuos de tirosina, triptófano, cistina
cisteína e histidina.
• Origina compuesto azul intenso
• Mide a 750nm
Método del ácido bicinconínico BCA
• Se basa en que las proteínas reducen los iones cúpricos del reactivo BCA a
iones cuprosos en medio básico.
• Cambio de color del verde (BCA) al morado. proteína + Cu+2 Cu+1 Cu +1 + BCA
BCA-Cu+1 OH-
Método de Bradford
• Se basa en la unión del reactivo Comassieblue G250 a las proteínas en medio
ácido
• Reconoce los aa arginina, fenilalanina, triptófano y prolina
• Origina color azul intenso A=595nm Aa que reconoce el reactivo de Bradford

Nitrógeno total o Kjeldahl

• El método Kjeldahl se basa en la transformación del nitrógeno contenido en la
muestra en sulfato de amonio mediante la digestión con ácido sulfúrico en
presencia de un catalizador. El ion amonio obtenido se transforma en medio
básico en amoníaco que se destila y valora con una solución de ácido patrón.
4) indique la estructura del complejo que se forma en la reacción de biuret.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre (II) y sosa, y el Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas
5) cuales son los principales métodos de determinación de proteína serica?
Determinación de las proteínas séricas
proteínas totales también conocidas como proteínas séricas 
 son introducidas en el organismo a través de los alimentos, donde se
dividen en aminoácidos para formar posteriormente las nuevas proteínas a
través del proceso conocido como síntesis de proteínas.
  son el resultado de sumar los distintos componentes proteicos presentes
en el organismo tales como: alfa1, alfa2, beta, gamma globulinas, enzimas,
algunas hormonas, hemoglobina, el Ldh, el fibrinógeno, colágeno y
albúmina 

 Proteínas totales en suero:

  es la medición aproximada de todas las proteínas presentes en la parte
líquida de la sangre. La prueba que determina las proteínas totales en
sangre, examina específicamente la cantidad total de dos tipos de
proteínas: globulina y albúmina 

 este examen a menudo se hace para diagnosticar problemas nutricionales,

enfermedad renal o enfermedad hepática. Si los niveles de proteínas totales
son anormales, por ejemplo, en caso de que el paciente presente proteínas
 o tales bajas, es necesario realizar exámenes adicionales con el fin de
identificar el problema específico.
Albúmina 
El valor normal es de 3.4 a 5.4 gramos por decilitro 
 es una proteína producida por el hígado
 es la proteína de más concentración en la sangre 
 transportan muchas moléculas pequeñas como la bilirrubina, la
progesterona y ciertos medicamentos.
  tiene la función de mantener la presión sanguínea ya que favorece la
presión osmótica coloidal para mantener líquidos en el torrente sanguíneo y
que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio.
  representa el 60% de las proteínas que contiene el suero, el resto son las
globulinas.
Globulina
 transportan las hormonas vitaminas y otras sustancias;
 protegen el organismo de los virus, bacterias, toxinas, proteínas ajenas,
produciendo anticuerpos contra ellos.
  regulan la coagulación de la sangre 
 unen las hormonas sexuales, ciertas medicinas, carbohidratos y otras
sustancias.

 Existen diferentes tipos de globulina y los cuales los valores normales son:
 Globulina alfa 1 es de 0.2 a 0.4 gramos por 100 mililitros 
 Globulina alfa 2 es de 0.4 a 0.7 gramos por 100 mililitros 
 Globulina b es de 0.7 a 0.9 gramos por 100 mililitros 
 Globulina g es de 0.9 a 1.5 gramos por 100 mililitros 
¿Para que se realiza este análisis?
 Es para evaluar la posible presencia de enfermedades del riñón o del hígado,
o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes proteínas 
El valor normal de referencia de proteínas totales es: 6.7 a 8.7 gramos por
decilitro

6) De acuerdo a la prueba realizada en esta práctica proponga una

clasificación de los aminoácidos
Opino que una buena clasificación para este laboratorio seria por color, debido a
que los colores que se reflejan son violeta, azul, amarillo y rojo.
7) Que es cromatografía de intercambio iónico, de exclusión molecular, de
adsorción, de partición, de afinidad.

La cromatografía de intercambio iónico es un método que permite la separación

de moléculas
basada en sus propiedades de carga eléctrica. Se compone de dos fases: la fase
estacionaria o
intercambiador iónico, y la fase móvil. La fase estacionaria insoluble lleva en la
superficie cargas electrostáticas fijas, que retienen contra iones móviles que
pueden intercambiarse por iones de la fase móvil, la cual suele ser una disolución
acuosa con cantidades moderadas de metanol u otro disolvente orgánico miscible
con agua que contiene especies iónicas generalmente en forma de buffer. Los
iones de ésta compiten con los analitos por los sitios activos de la fase
estacionaria.

La cromatografía de exclusión molecular es el nombre general para los

procesos de separación de biomoléculas de acuerdo a su tamaño cuando una
solución fluye a través de una cama empacada con un medio poroso. Para la
separación, se utilizan las propiedades de tamiz molecular de una variedad de
materiales porosos. El proceso de separación depende del tamaño y el volumen
hidrodinámico (volumen que ocupa una molécula en solución), el cual define la
capacidad de la molécula de

penetrar o no en los poros de la fase estacionaria. De tal forma que, las moléculas
de alto peso molecular son excluidas de los poros debido a un efecto estérico y
pasan rápidamente a través de la matriz. En el caso de biomoléculas pequeñas,
estas tienen diferente accesibilidad en las cavidades de la matriz porosa.

En la cromatografía de adsorción o cromatografía líquido-sólido, la fase

estacionaria es un sólido, habitualmente sílice, aunque en algunas ocasiones se
emplea alúmina finamente dividida. Las características de absorción en ambas
columnas son similares y en ambas los tiempos de retención se alargan a medida
que la polaridad del analito aumenta. El analito queda retenido en la fase
estacionaria mediante fenómenos de adsorción.

Cromatografía de partición, la fase estacionaria es un líquido soportado en un

sólido inerte. Otra vez, la fase móvil puede ser un líquido (cromatografía de
partición líquido-líquido) o un gas (cromatografía de partición gas-líquido, GLC). La
cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de partición en la cual la fase
estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel. La
cromatografía de gases (GC) y de alta resolución (HPLC) son técnicas de partición
ampliamente empleadas.

La cromatografía de afinidad se fundamenta en la especificidad de algunas

macromoléculas biológicas. Éstas se unen específicamente a la fase estacionaria
y para separar dicha macromolécula, bastará con variar el pH una vez que la
columna este limpia y sólo se encuentre de interés.

CONCLUSION
La práctica cumplió con el objetivo ya que mediante las pruebas realizadas en
laboratorio se logró identificar la presencia de aminoácidos e indicamos la
presencia de proteínas en diferentes muestras mediante pruebas cualitativas, del
mismo modo identificamos algunos de los aminoácidos presentes en ellas por
medio de las reacciones que ocurrieron en cada caso de acuerdo al grupo que
caracteriza al aminoácido de las proteínas que están constituidas por ellos.

BIBLIOGRAFÍA

 https://cuidateplus.marca.com/alimentacion/diccionario/proteinas.html
 https://youtu.be/V6TV6aeJQQA
 https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002222.htm
 https://www.scribd.com/doc/261205712/Reactivo-de-Millon
 https://www.aprendecontabella.com/courses/biologia-
general/lectures/15511013
 https://www.lifeder.com/biuret/