A.

PROCEDIMIENTOS

El estudio se realizará con 21 ratas machos, raza Holtzmann, con un peso

aproximado de 243 g, obtenidas de la Universidad Nacional Agraria La Molina,
Lima, Perú.

Estos animales serán aclimatados previamente en el ambiente de

experimentación de Laboratorios de Fisiología de UNFV, durante 7 días. Se les
mantendrá en un ambiente a una temperatura de 21ºC, con alimentación
balanceada y agua a libertad.

Con relación al preparado, primero calentamos la leche a 40 grados

centígrados (°C), separamos 3 litros en los cuales se disolverá la leche en
polvo, azúcar y grenetina. Para que no queden grumos se puede usar una
licuadora. La mezcla se incorpora nuevamente al resto de la leche.
Pasteurizamos a 82 °C durante 20 minutos. Durante este tiempo se mueve con
una cuchara o agitador, para que no se peguen los sólidos en la olla y para
favorecer el aumento de temperatura. Luego enfriamos a 50 °C, a baño María
(forma de preparación que consiste en dejar un recipiente con el alimento en
agua hirviendo un determinado tiempo). Inoculamos el cultivo para yogur con
probióticos, para esto utilizamos; para las dosis bajas 1 L de yogurt al cual le
agregamos 30mg de L acidophillus (0.03 x 1000) y paras las dosis altas 60mg
(0.06 x 1000) de cepa inactiva de L A. y que las compramos en los Laboratorios
Montana. Se mezcla por tres minutos procurando que el cultivo quede disperso
en toda la leche. El periodo de incubación de las bacterias es de dos horas y
media a tres horas. Se debe tener cuidado de que la temperatura permanezca
de 47 a 50 °C; temperatura que necesitan las bacterias para su buen
desarrollo. Se recomienda utilizar un termo. Una vez que transcurrieron las tres
horas se observa si ya se formó un gel (este debe de estar firme). Otra forma
de saber si ya está listo el yogur es cuando haya alcanzado una acidez de 70
°Dornic (parámetro para medir la acidez de la leche). Bajar la temperatura y
meter al refrigerador. El día siguiente sacarlo y mezclarlo por cinco minutos. Se
incorpora la fruta y se mezcla perfectamente (100 gramos de mermelada de
fruta por cada litro de yogur natural). Envasar (ya se puede consumir) en
recipientes de 1 litro. La conservación será a 5 °C.

Una vez terminada la fase de aclimatación de las ratas, es decir,

transcurridos los 7 días se realizará la aleatorización y se dividirán a las 21
ratas en tres grupos de 7 ratas. Luego procederemos a marcar cada rata del
número 1 al número 7, y procederemos a la medición de los pesos de cada rata
de cada uno de los tres grupos, para de esta manera obtener el peso promedio
por cada grupo y el peso promedio de los tres grupos.
Al terminar de dividir y pesar cada grupo las ratas serán sometidas a 24 horas
de ayuno, luego procederemos con la fase de experimentación.
A cada grupo se le administrará durante 30 días consecutivos, por vía
orogástrica a través de una sonda de pequeño calibre ( Nelatón No. 8) lo
siguiente:

Paso 1: Al grupo control se le administrará el NaCl, al grupo 1 "Dosis baja” se

le administrará 0.03 mg/mL de lactobacillus por un periodo de 30 dias, al grupo
2 “Dosis alta” se le administrara 0.06 mg/mL de lactobacillus por un periodo de
30 dias.

Paso 2: llegado al 30avo dia al grupo experimental 1 y grupo experimental 2 se

le administrará indometacina (50mg/kg) , en el caso del grupo experimental 1 y
2 este procedimiento se realizará media hora después de administrarle el yogur
con lactobacillus.

GRUPO CONCENTRACIÓN DOSIS

GRUPO CONTROL NaCl 0.9% 10 ml/kg
GRUPO EXPERIMENTAL 1
(LACTOBACILLUS DOSIS BAJA- 0.03 mg/mL
INDOMETACINA)
GRUPO EXPERIMENTAL 2
(LACTOBACILLUS DOSIS ALTA- 0.06 mg/mL
INDOMETACINA)

Paso 3: Cinco horas después de la administración de indometacina, las ratas

serán anestesiadas con 1ml de pentobarbital sódico (Halatal), luego se
procederá a cirugía abdominal para la localización y extracción de los
estómagos, los cuales serán abiertos por la curvatura mayor, lavados con
suero fisiológico y extendidos para lograr una completa exposición de la
mucosa para el análisis macroscópico y la toma de fotografías en fresco.

Paso 4: Procederemos a la evaluación macroscópica:

Para la evaluación macroscópica tendremos en cuenta la evaluación del grado

y presencia de lesiones de hiperemia y lesiones ulcerativas.

*Para evaluar el grado y presencia de hiperemia, esta será calificada según los
siguientes parámetros: según la magnitud del enrojecimiento presente y la
hemorragia, según la magnitud del sangrado, dependiendo de la cantidad de
vasos comprometidos.

Los parámetros antes mencionados serán medidos empleando la escala de puntaje

observacional mencionada en la siguiente tabla.

GRADO DE HIPEREMIA ESCALA DE PUNTAJE

AUSENTE OBSERVACIONAL
0
LEVE 1
MODERADO 2
SEVERO 3
*Para evaluar el grado de lesión ulcerativa, se tendrá en cuenta la magnitud de la lesión
observada en la mucosa gástrica (pérdida de continuidad o rotura de la misma), siendo
calificada según la escala de Alada y col, 2008 modificada , en:

GRADO DE LESIÓN CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS PUNTUACIÓN

ÚLCERATIVA
AUSENTE No presencia de úlceras 0
LEVE Úlceras puntiformes <1 mm o microhemorragias 1
MODERADO Dos o más ulceras hemorrágicas pequeñas 2
SEVERO Úlceras grandes >2 mm de dìámetro 3

Paso 5: Luego procederemos a la evaluación histopatológica:

Para la evaluación histopatológica según Devi y col., 1998 , los estómagos

serán extirpados y lavados suavemente con solución salina, para remover la
sangre y los detritos adheridos al tejido.

Posteriormente se les fijará en solución de formol al 10% tamponado, por 3

días, y luego se seleccionará las zonas donde de acuerdo al examen
macroscópico se evidenciaba lesión aparente. Transcurrido este tiempo, se les
procesará en un procesador de tejidos por 18 horas, en soluciones de
alcoholes para deshidratación, hidratación con xilol, y embebido en parafina.

El procesamiento de los tacos de parafina se realizará empleando un

dispensador de parafina. Los tacos obtenidos serán llevados a congelamiento a
<0°C, por un lapso de 3 horas, para luego proceder al corte de 3µ de espesor
con ayuda de un micrótomo. Luego, se retirará la parafina en una estufa, para
proceder a la coloración con hematoxilina y eosina.

Después de la deshidratación y limpieza de las láminas, serán llevadas para

observación microscópica. Y luego procederemos al diagnóstico
histopatológico de cada muestra tomada de la mucosa gástrica.