Universidad Juárez del estado de Durango

Faculta de Ciencias Químicas

Medición de estrés oxidativo en bovinos

Alumna: Irma Margarita Favela Avila

Docente: Erick Sierra Campos

Materia: Bioquímica I

Grupo: 4 - “B” Fecha: 20 de Octubre del 2020

¿Cómo el estrés oxidativo afecta el estado de los bovinos?
El estrés oxidativo es el desbalance entre la generación de Especies Reactivas de
Oxígeno (ERO) y las defensas antioxidantes.
No obstante, cuando se presenta una respuesta inflamatoria crónica por parte del
sistema inmune, el estrés puede contribuir a una variedad de trastornos en la
producción y salud del ganado. Si las ERO no son contrarrestadas por
antioxidantes, las células pueden funcionar mal o morir.
Cuando los radicales libres superan los niveles de antioxidantes, surge el estrés,
cuyo aumento puede generar mayor producción de precursores de radicales de
oxígeno reactivo, incremento de especies reactivas de oxígeno, y reducción de
sistema antioxidantes.
Al final de la gestación en bovinos, existe un incremento en la producción de ERO
y de los niveles de enzimas antioxidantes. Ese equilibrio puede romperse, de
forma que la producción de radicales libres, no puede ser contrarrestada.

Además, la gestación causa un descenso en los niveles de a-tocoferol, lo que

afecta a la vitamina E y a la capacidad del animal para defenderse de la
lipoperoxidación. También hay una merma en los niveles de vitamina C y A así
como de otros elementos (Fe, Cu, Zn) que participan en la defensa antioxidante.
Las consecuencias de la existencia de un estrés oxidativo en este momento son
variadas. Podemos encontrarnos con estados cetonémicos y sufrimiento fetal,
llegando en casos extremos al aborto.
Si consideramos el parto en sí mismo, nos encontramos con un alto riesgo de
estrés oxidativo donde el animal, luego se verá sometido al esfuerzo de  iniciar la
lactación y adaptarse a una nueva dieta, rica en energía.
El momento peripartal se erige como uno de los más críticos de la vida productiva
de la hembra; por ello consideramos necesario asegurarnos de que ésta presente
un adecuado sistema antioxidante, que minimice el estado de estrés oxidativo
propio de esta fase, de lo contrario, es posible la aparición de trastornos que
comprometen la salud y productividad del animal.
Varios investigadores (Miller y col., 1993; Brzezinska-Slebodzinska y col., 1994;
Weiss y col., 1997; Campbell y Miller, 1998) han relacionado esta circunstancia
con la aparición de mastitis, hipocalcemias o retenciones placentarias, por citar
algunos de los casos más señalados.
Numerosos estudios mencionan al estrés oxidativo y destacan la importancia de
los suplementos vitamínico-minerales, para prevenir ciertas patologías
metabólicas, o la incidencia de las mastitis.
Resumen
Actualmente, la mastitis bovina continúa siendo una de las enfermedades más
costosas de la ganadería lechera. Nuestro país no está exento de esta grave
enfermedad que no solo afecta la calidad de la leche sino que es la causa de
pérdidas económicas por disminución de la producción, descarte y el riesgo de
antibióticos en la leche, esto último la convierte en un potencial riesgo para el
consumidor. La presente investigación se enfoca en correlacionar los métodos
más utilizados (CCS, CMT y CE) en la detección de la mastitis subclínica con el
propósito de relacionar linealmente estos métodos y poder predecir el CCS
mediante la CMT y la CE; realizar una tabla comparativa con sus respectivos
rangos de estos métodos y realizar otras observaciones importantes en relación a
los métodos estudiados y posibles factores que pudiesen afectar a los mismos.
Introducción
Los métodos CCS, CMT y CE son herramientas útiles al momento de detectar la
mastitis subclínica, especialmente el CCS que es utilizado para monitorear la
calidad de la leche y evaluar el estado de la glándula mamaria. Esta prueba
generalmente se realiza mediante contadores electrónicos, basados en el principio
de citometría de imagen y otros de flujo. La prueba CMT está basada en la ruptura
de la membrana y la liberación de las moléculas de ADN de las células por un
agente detergente y, como consecuencia, la formación de gel el cual es calificado
cualitativamente. La CE, por su parte, tiene relación con el aumento de iones de
cloro (Cl) y sodio (Na), los cuales son medidos mediante aparatos manuales y
automatizados en los sistemas de ordeño. Para el Laboratorio de Calidad de
Leche (LCL), en virtud de la factibilidad del nexo con los productores, es necesario
disponer del CMT y CE, como métodos de campo, para la predicción del contaje
de células somáticas.
Materiales y métodos
a) Fase de campo
- 124 muestras de leche de vacas de sus cuatro - Cinta adhesiva
pezones - Tablero
- Toma muestras de acero inoxidable - Hojas de registro.
- Frascos estériles con bronopol - Mandil
- Frascos estériles sin bronopol - Guantes
- Cooler de plástico con hielos - Mascarilla
- Alcohol al 70% - Paleta para CMT - Cofia
- Reactivo para CMT - Botas de caucho

b) Fase de laboratorio
- Fossomatic minor - Jeringas
- Conductímetro de fluidos, ULTRAMETER TM 6P; - Papel
Serie: 606962. - Agua destilada
- Paleta para CMT - Mandil
- Reactivo para CMT - Guantes
- Cronómetro - Mascarilla
- Computador portátil - Cofia
- Cámara fotográfica

Métodos
Toma de muestras
En la toma de muestras, los animales fueron ordeñados por las mismas personas
que habitualmente lo hacen para así no estresarlos.
En la Asociación ATAC-QUEPA, al momento de la toma de la muestras se
procedió a realizar el CMT enseguida para ayudar a interpretar a los usuarios. En
las haciendas la prueba CMT se realizó en el laboratorio, por la rapidez del ordeño
no fue posible realizarlos en campo. También se aplicó el test de información
básica de los sistemas de producción.
En las muestras tomadas de las haciendas se realizó una prueba adicional en
porcentaje de concentración de NaCl en laboratorio.
 a) Procedimiento toma de muestras Asociación “ATAC-QUEPA”:
Las muestras fueron tomadas en el ordeño de la tarde de la siguiente manera:
• Limpiada y secada de pezones;
• Despunte (2 - 3 chorros);
• Toma de la muestra 1) 40 ml en frasco con bronopol; 2) 40 ml en frasco sin
bronopol y 2 ml para la prueba de CMT en campo;

• Transporte al laboratorio en un cooler manteniendo la temperatura

a 4ºC;
• Análisis de los parámetros en máximo 48 horas.
b) Procedimiento toma de muestras en las haciendas: Las
muestras fueron tomadas en el ordeño de la tarde, de la
siguiente manera:
• Pre-sellado y secado;
• Despunte (2 – 3 chorros);
• Toma de muestras, 2 frascos de 40 ml sin conservante;
• Transporte al laboratorio en un cooler manteniendo la temperatura
a 4ºC
• Se realizó el análisis en máximo 48 horas.
 Diagramas

Análisis de CCS

Se calienta la muestra a 40 - 42ºC

en baño de María,

Agita la muestra (15 veces)

Se coloca la muestra de leche

(40ml) en la pipeta

Toma las muestras y se espera que

termine el proceso en el
espectofotometro

Se toman datos y luego se limpia la

pipeta para la siguiente muestra, se
analizó por triplicado.

Una vez arrojados los resultados se

procedió a transcribir en sus respectivos
cuadros para el análisis estadístico
Análisis del Prueba de Mastitis California (CMT)

Se toma una muestra de leche de cada cuarto en una raqueta de

CMT limpia. La raqueta tiene cuatro pequeños compartimientos
marcados como A, B, C, y D para identificar los cuartos de los que
proviene cada muestra. La solución CMT debe ser reconstituida de
acuerdo a las instrucciones del producto.

Paso 1: Tome aproximadamente 1 cucharadita (2 cc) de leche de

cada cuarto. Esto corresponde a la cantidad de leche que quedaría
en los compartimientos al colocar la raqueta en posición casi
vertical.

Paso 2: Agregue igual cantidad de solución CMT a cada

compartimiento.

Paso 3: Rote la raqueta con movimientos circulares hasta mezclar

totalmente el contenido. No lo mezcle por más de 10 segundos.

Paso 4: “Lea” rápidamente la prueba. La reacción visible

desaparece en unos 20 segundos. La reacción recibe una
calificación visual. Entre más gel se forme, mayor es la calificación.
 Lectura del CMT

N = Negativo (No Infectado). No hay espesamiento de la

mezcla.

T= Trazas (Posible Infección). Ligero espesamiento de

la mezcla.
La reacción “Trazas” parece desvanecerse con la rotación
continua de la raqueta.
Ejemplo: Si en los 4 cuartos se leen “trazas”, no hay infección. Si en uno-dos
cuartos se leen “trazas”, hay posible infección.

1= Positivo Débil (Infectado). Definido espesamiento de la

mezcla, pero sin tendencia a formar gel. Si la raqueta se
rota por más de 20 segundos, el espesamiento puede
desaparecer.

2= Positivo Evidente (Infectado). Inmediato espesamiento

de la mezcla con ligera formación de gel. Mientras la mezcla
se agita, esta se mueve hacia el centro de la copa,
exponiendo el fondo del borde externo. Cuando el
movimiento se detiene, la mezcla se nivela y cubre todo el
fondo de la copa.
3= Positivo Fuerte (Infectado). Hay formación de gel y la superficie de la mezcla
se eleva (como un huevo frito). Esta elevación central permanece aún después de
detener el movimiento de rotación de la raqueta de CMT.

La raqueta debe lavarse después de cada prueba.

Interpretación de los grados del CMT
El grado de CMT está directamente relacionado con el promedio del conteo de
células somáticas. En esta tabla se muestra como están relacionados.
Una reacción de T (trazas) o más indica que hay mastitis subclínica en el
cuarto.

Otros ejemplos de lectura de CMT:

Infección Clínica

Leche Tóxica (No se ha adicionado reactivo de

CMT a la raqueta.)

Hoja de información preparada por: Roger Mellenberger, Depto. de Ciencia

Animal, Universidad del Estado de Michigan y Carol J. Roth, Depto. de Ciencia
Lechera, Universidad de Wisconsin-Mádison Abril, 2000 Traducido por Humberto
Rivera, Depto. de Ciencia Lechera, Universidad de Wisconsin-Mádison, 2004.
Conclusión
La importancia del recuento de células somáticas en la leche en la lucha frente a
la mastitis, la más importante amenaza sanitaria para los productores.
 El recuento de células somáticas (RCS) es uno de los indicadores de la calidad
de la leche. Cuando este índice se incrementa, lo hace en respuesta a bacterias
patógenas como Staphylococcus aureus, causante de mastitis.
 Una vaca totalmente sana muestra recuentos de aproximadamente 50
mil células/ml de leche, variando este número entre 5.000 y 200 mil, aunque el
número de células puede cambiar según el estadio de lactación, y aumenta según
la vaca se hace más vieja.
La mastitis bovina, es la enfermedad que más afecta a la industria lechera en todo
el mundo, porque ocasiona disminución tanto de la fertilidad como de la
producción, así como también, menor calidad de la leche, fuertes pérdidas
económicas y, potencialmente un problema de salud pública.

Referencias
https://www.motivar.com.ar/2019/06/como-el-estres-oxidativo-afecta-el-estado-de-los-
bovinos/#:~:text=El%20estr%C3%A9s%20oxidativo%20es%20el,producci%C3%B3n%20y%20salud
%20del%20ganado.

https://www.ganaderia.com/destacado/Estres-oxidativo-e-inflamacion-de-la-ubre-durante-el-
periodo-de-transicion-y-su-efecto-sobre-la-produccion

https://milkquality.webhosting.cals.wisc.edu/wp-content/uploads/sites/212/2011/09/hoja-de-
informacion-de-la-pruebe-de-mastitis-california_spanish.pdf