MGA 0571. Limites microbianos.

Conjunto de pruebas cuyo objetivo es evaluar la calidad sanitaria de productos farmacéuticos (materias primas, productos intermedios y terminados), mediante el recuento de microorganismos mesofilicos aerobios, hongos filamentosos y levaduras; asi como, la investigación de microorganismos objetables en dichos productos. Recomendaciones generales y y y Las muestras deben de trabajarse bajo condiciones asepticas El tiempo transcurrido desde la preparación de la primera dilución hasta su incorporación con el medio de cultivo no debe de exceder de 1h. Las muestras de prueba deben, incubarse de 30°C a 35°C durante 24 h a 48 h, a menos que se especifiquen otras condiciones.

Soluciones amortiguadoras y medios de cultivos. 1.- solución amortiguadora de fosfatos pH 7.2 Solución concentrada. Fosfato monobásico de potasio Agua purificada 34.0g 500mL

En un matraz volumétrico de 1000mL, disolver el fosfato en el agua y ajustar el pH a 7.2 +/-0.1 con una solución de hidróxido de sodio 1.0N (aproximadamente 175mL) llevar a volumen, mezclar, envasar y esterilizar. Almacenar en refrigeración. 2. Solución salina 0.85 por ciento Cloruro de sodio 8.5g Agua purificada 1000mL Medios de cultivo; Aquí lleva los medios no lo pongo porque es extenso Microorganismos control. Staphylococus aureus ATCC 6538P Psudomonas aeruginosa ATCC 25619 Escherichia coli ATCC 10536 Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium NCTC 6017 o CIP 8039

A partir de cultivos de 18 a 24 horas de incubación en caldo soya tripticaseina. La muestra de producto para cada determinación no debe de ser menor de 10g o 10mL.0mL de la suspensión que contiene 1000UFC/mL en la primera dilución del producto. para otro tipo de muestras utilizar el método del Numero mas Probable (NMP). Recuento de microorganismos mesofilicos aerobios. preparar diluciones decimales en el diluyente apropiado por lo menos hasta 10ª la menos 6.Preparación de los microorganismos control. suspensión o emulsión sin alterar el numero y calse de microorganismos presentes en el producto. Liquidos no miscibles en agua: pesar o medir exactamente 10g o 10mL de la muestra. Los métodos de preparación de la muestra se describen a continuación. En muestras solubles la técnica de elección es el método de vaciado en placa. Método en tubo (NMP). con movimientos rotatorios con movimientos rotatorios suaves.2. mezclar la alícuota de la muestra con el medio de cultivo. De acuerdo a las características físicas de la muestra elegir el método adecuado para obtener un solución. este debe considerar: tamaño de lote. evitar derrama de liquido. añadir a cada caja de 15mL a 20mL de medio agar soya tripticaseina-lecitina de soya-polisorbato80 antes de su uso fundir y mantener en baño de agua maría a una temperatura de 45-48°C. Muestreo La tome de muestras debe de seguir un plan de muestreo bien definido. Efectuar las diluciones decimales necesarias para que 1. Inocular 1.0mL de cada dilución del producto en cajas de petri estériles. riesgo a la salud y su nivel de contaminación esperado. Inocular por triplicado 1. Colocar 12 tubos conteniendo 9mL del medio agar soya tripticaseinalecitina de soya-polisorbato80.0mL contenga entre 30 UFC/mL y 300UFC/mL. Permitir que el medio de cultivo solidifique e incubar las placas en posición invertida entre 30 y 35°C durante 48 a 72 h. continuar con el procedimiento para cada uno de los microorganismos control. en cuatro hileras de tres tubos cada una. transferirlo a 90mL del diluyente seleccionado adicionado con polisorbato 20. Inocular 1. Método en placa.0mL de las . dilución que puede prepararse con solución diluida de fosfatos 7. preparada como se indica en la sección de investigación de microorganismos objetables. constituyes la primera dilución del producto (10ª la menos 1). de cada uno de los microroganismos control. Procedimiento Preparación de la muestra. características del producto.

segunda y tercera hilera de tubos.01) 3 2 1 0 3 2 1 0 3 2 1 0 3 3 3 3 0 0 0 0 3 2 1 0 95 60 40 23 Investigación de microroganismos objetables: En función de la via de administración proceder a la investigación de los microroganismos señalados a continuación: Productos dérmicos.1) 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 (0. 10-2 y 10-3 en la primera. e incubar entre 20 y 25°C de 5-7 dias. Marcar la cuarta hilera como testigo. Tabla 0571.01) 3 3 3 3 2 2 2 2 1 1 1 1 (00. excepto que se utiliza el medio agar dextrosa sabourand o agar papa dextrosa en lugar de los medio 2 y 4.2 numero mas probable de microorganismos. rectales y vaginales: Staphylococus aureus y Psudomonas aeruginosa . Proceder como se indica en el recuento de microorganismos mesofilicos. Numero de tubos positivos mg o mL de muestra por tubo Numero mas probable de microorganismos por G o mL (NMP/G o NMP/mL) >1 100 1 100 500 200 290 210 150 90 160 120 70 40 (0.diluciones 10-1. Agitar los tubos e incubar entre 30 y 35°C durante 48h. Recuento de hongos filamentosos y levaduras. Identificar cada hilera de tubos con la dilución inoculada.

Productos orales: Escherichia coli y Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium. .