MGA 0571. Limites microbianos.

Conjunto de pruebas cuyo objetivo es evaluar la calidad sanitaria de productos farmacéuticos (materias primas, productos intermedios y terminados), mediante el recuento de microorganismos mesofilicos aerobios, hongos filamentosos y levaduras; asi como, la investigación de microorganismos objetables en dichos productos. Recomendaciones generales y y y Las muestras deben de trabajarse bajo condiciones asepticas El tiempo transcurrido desde la preparación de la primera dilución hasta su incorporación con el medio de cultivo no debe de exceder de 1h. Las muestras de prueba deben, incubarse de 30°C a 35°C durante 24 h a 48 h, a menos que se especifiquen otras condiciones.

Soluciones amortiguadoras y medios de cultivos. 1.- solución amortiguadora de fosfatos pH 7.2 Solución concentrada. Fosfato monobásico de potasio Agua purificada 34.0g 500mL

En un matraz volumétrico de 1000mL, disolver el fosfato en el agua y ajustar el pH a 7.2 +/-0.1 con una solución de hidróxido de sodio 1.0N (aproximadamente 175mL) llevar a volumen, mezclar, envasar y esterilizar. Almacenar en refrigeración. 2. Solución salina 0.85 por ciento Cloruro de sodio 8.5g Agua purificada 1000mL Medios de cultivo; Aquí lleva los medios no lo pongo porque es extenso Microorganismos control. Staphylococus aureus ATCC 6538P Psudomonas aeruginosa ATCC 25619 Escherichia coli ATCC 10536 Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium NCTC 6017 o CIP 8039

Método en placa. Colocar 12 tubos conteniendo 9mL del medio agar soya tripticaseinalecitina de soya-polisorbato80. De acuerdo a las características físicas de la muestra elegir el método adecuado para obtener un solución. La muestra de producto para cada determinación no debe de ser menor de 10g o 10mL. añadir a cada caja de 15mL a 20mL de medio agar soya tripticaseina-lecitina de soya-polisorbato80 antes de su uso fundir y mantener en baño de agua maría a una temperatura de 45-48°C. Procedimiento Preparación de la muestra. En muestras solubles la técnica de elección es el método de vaciado en placa.0mL de las . Inocular por triplicado 1. Liquidos no miscibles en agua: pesar o medir exactamente 10g o 10mL de la muestra. A partir de cultivos de 18 a 24 horas de incubación en caldo soya tripticaseina. con movimientos rotatorios con movimientos rotatorios suaves. Los métodos de preparación de la muestra se describen a continuación. Inocular 1.2. preparar diluciones decimales en el diluyente apropiado por lo menos hasta 10ª la menos 6. Permitir que el medio de cultivo solidifique e incubar las placas en posición invertida entre 30 y 35°C durante 48 a 72 h.0mL de la suspensión que contiene 1000UFC/mL en la primera dilución del producto. este debe considerar: tamaño de lote. de cada uno de los microroganismos control.0mL contenga entre 30 UFC/mL y 300UFC/mL. mezclar la alícuota de la muestra con el medio de cultivo. en cuatro hileras de tres tubos cada una. riesgo a la salud y su nivel de contaminación esperado. transferirlo a 90mL del diluyente seleccionado adicionado con polisorbato 20. Efectuar las diluciones decimales necesarias para que 1. evitar derrama de liquido. Inocular 1. para otro tipo de muestras utilizar el método del Numero mas Probable (NMP). dilución que puede prepararse con solución diluida de fosfatos 7. Método en tubo (NMP).Preparación de los microorganismos control. Recuento de microorganismos mesofilicos aerobios.0mL de cada dilución del producto en cajas de petri estériles. características del producto. continuar con el procedimiento para cada uno de los microorganismos control. suspensión o emulsión sin alterar el numero y calse de microorganismos presentes en el producto. preparada como se indica en la sección de investigación de microorganismos objetables. constituyes la primera dilución del producto (10ª la menos 1). Muestreo La tome de muestras debe de seguir un plan de muestreo bien definido.

e incubar entre 20 y 25°C de 5-7 dias.1) 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 (0. Agitar los tubos e incubar entre 30 y 35°C durante 48h. rectales y vaginales: Staphylococus aureus y Psudomonas aeruginosa .01) 3 2 1 0 3 2 1 0 3 2 1 0 3 3 3 3 0 0 0 0 3 2 1 0 95 60 40 23 Investigación de microroganismos objetables: En función de la via de administración proceder a la investigación de los microroganismos señalados a continuación: Productos dérmicos. Recuento de hongos filamentosos y levaduras. segunda y tercera hilera de tubos.2 numero mas probable de microorganismos. excepto que se utiliza el medio agar dextrosa sabourand o agar papa dextrosa en lugar de los medio 2 y 4. Proceder como se indica en el recuento de microorganismos mesofilicos. Identificar cada hilera de tubos con la dilución inoculada. Numero de tubos positivos mg o mL de muestra por tubo Numero mas probable de microorganismos por G o mL (NMP/G o NMP/mL) >1 100 1 100 500 200 290 210 150 90 160 120 70 40 (0.diluciones 10-1.01) 3 3 3 3 2 2 2 2 1 1 1 1 (00. Marcar la cuarta hilera como testigo. Tabla 0571. 10-2 y 10-3 en la primera.

.Productos orales: Escherichia coli y Salmonella typhi ATCC 6539 o Salmonella typhimurium.