LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

ALIMENTARIA
PRACTICA N° 9

RECUENTO ESTÁNDAR EN PLACA DE ALIMENTOS

DOCENTE: 

Lillyan Loayza

INTEGRANTES: 
1. Sofia Valeria Ubillús Arana
2. Maria Fernanda Ruiz Orellana
3. Lucía Yabiku
4. Jimena Vidal
5. Luis David Gartner

SECCIÓN:

 3A

2020
INTRODUCCIÓN:
El recuento estándar en placa de alimentos es un procedimiento estrechamente utilizado
cuando se debe  establecer el tamaño de la población bacteriana de una muestra. Es un
método de recuento de células viables. Se cuentan las células de una muestra que son
capaces de formar colonias cuando se inoculan un medio de cultivo sólido adecuado. El
recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno  una colonia visible
punto pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a su
composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un
microorganismo o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del
real. También es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan
crecer en las condiciones elegidas punto en este caso el recuento también será inferior al
real lo que sí se sabe es que cada colonia observada se formó a partir de ,por lo menos,
un microorganismo. Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es
considerada una unidad formadora de colonia a los efectos de los cálculos punto se
admite ,por lo tanto, que en los métodos de recuento de microorganismos vivos son
inevitables los errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeñas, es
posible cometer grandes errores. 

OBJETIVOS:
 Preparar las muestras de alimentos para el recuento.
 Utilizar el recuento estándar en placa como método de análisis para evaluar la
calidad microbiológica de un alimento
MATERIALES
 Muestra de comida
 Agua peptonada
 Balanza
 Mechero 
 Pinzas y espátula
 Triturador homogeneizador
 Bolsas muestra
 Tubos de ensayo
 Pipeta y puntas
 Agitador orbital
 Agua destilada 
 Contador de colonias

PROCEDIMIENTO

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA: Para este procedimiento necesitamos un mechero

bunsen, balanza, pinzas, espátulas, bolsas muestra y triturador homogeneizador; es
necesario trabajar en condiciones asépticas y con material estéril. 

1. En primer lugar, tenemos que pesar la muestra en condiciones asépticas. 

2. Tomamos la fracción del alimento para pesar, la cual representa la totalidad de la
muestra.
 3. Adicionamos el diluyente (agua peptonada), este no debe producir
modificaciones cualitativas ni cuantitativas en la biota de los alimentos. La
cantidad depende de la dilución de la suspensión madre. 
4. Finalmente, se debe triturar y homogeneizar la muestra (10 g). Esto debe durar
sólo unos minutos para evitar la destrucción de microorganismos. Comúnmente
se utiliza triturador de paleta para este proceso.  (Homogeneizado 1/100).

PREPARACIÓN DE DILUCIONES SUCESIVAS: En este procedimiento es necesario

tener tubos de ensayo, agua destilada, pipeta y las puntas, un agitador orbital y mechero
bunsen.

1. A partir de la dilución 1/10, se debe tener una alícuota de 1mL para obtener una
dilución 1/100 y así sucesivamente hasta la última dilución (10 o 10 ), esto
−7 −8

depende de la técnica y de la muestra. 

2. Se agita para homogeneizar la muestra.

CULTIVO: Hay dos formas para promover el crecimiento microbiano

1. Vertido en placa: Aquí, a partir de las placas estériles vacías, se inocula 1 mL de cada
una de las soluciones previamente hechas. Luego se vierte unos 10 mL de agar licuado
(45 a 50 °C), y se agita deslizándose por la mesa formando un ocho. Finalmente se
incuba a 37°C por 24 a 48 horas.
2. Cultivo en césped: Se prepara con el agar solidificado ya presente en la placa petri,
luego se inocula 1 mL de la solución y con la espátula se esparce sobre el agar.
Finalmente de lleva a incubar a 37°C por 24 a 48 horas.

RECUENTO: Después de retirar las placas de la incubadora se hace el conteo en un

contador de colonias.

1. Colocar una placa en la superficie del contador.

2. Establecer el recuento a cero y apretar el botón que dice “reset”.
3. Marcar las colonias con un plumón indeleble.
4. Retirar la placa del contador después de anotar los resultados.
5. Apagarlo estando en la posición cero.
6. Hallar el promedio de los valores de la primera y segunda placa y multiplicarla
por el factor de dilución para así obtener el Recuento estándar en placa.

RESULTADOS Y DISCUSIONES

En primer lugar, se procedió a la preparación de la muestra de alimentos, la cual se

realizó en condiciones estériles para evitar contaminación cruzada y que se cole algún
otro microorganismo que no busquemos analizar. 

Seguido de esto y con la muestra madre preparada, se procedió a las diluciones

sucesivas. Las cuales deben contener 1 mL de madre 9 mL de diluyente, continuando
sucesivamente por cada tubo.

Con nuestras diluciones ya listas, se realizó el cultivo mediante el vertido en placa

añadiendo el agar licuado a una temperatura entre 45 - 50°C. Esto se deja solidificar y
se incuba a una temperatura y tiempo adecuado, 37°C x 24 - 48 horas, para poder
proceder al recuento en placa.
Finalmente, se realizó el recuento estándar en placa por medio de un contador de
colonias, el cual cuenta con una superficie de contaje y una lupa, lo que nos sirvió para
poder marcar correctamente con el rotulador, evitando errores. De este modo, pudimos
sacar la media aritmética correctamente, expresandola en unidades formadoras de
colonias (UFC). Esta última parte no debe durar más de 2 horas para evitar que crezcan
más microorganismos. 

La técnica se basa en contar las “unidades formadoras de colonias” o UFC presentes en

un gramo o mililitro de muestra. Se considera que cada colonia que desarrolla en el
medio de cultivo de elección después de un cierto tiempo de incubación a la temperatura
adecuada, proviene de un microorganismo o de un agregado de ellos, de la muestra bajo
estudio; ese microorganismo o microorganismos son capaces de formar la colonia, es
decir una UFC. Para que las colonias puedan contarse de manera confiable, se hacen las
diluciones decimales necesarias de la muestra, antes de ponerla en el medio de cultivo;
la técnica para realizar este procedimiento se describe en “Preparación y dilución de
muestras de alimentos para su análsis microbiológico”.

CONCLUSIONES
Se utilizó el recuento estándar en placa como método de análisis para evaluar la calidad
microbiológica de un alimento. 

RECOMENDACIONES:
 No triturar por mucho tiempo la muestra con el diluyente (agua peptonada),
puesto a que los microorganismos presentes pueden destruirse.
 Trabajar por duplicado para evitar que una placa no salga como lo esperado y así
asegurarse de llegar a los resultados esperados sin ninguna complicación.
 Tener cuidado al tratar el agar licuado puesto a que se encuentra a altas
temperaturas.