UNIVERSIDAD MAYOR REAL Y PONTIFICIA DE SAN FRANCISCO XAVIER DE CHUQUISACA

FACULTAD DE CIENCIAS Y TECNOLOGÍA

CARRERA DE INGENIERIA QUIMICA

MATERIA: Laboratorio Análisis Químico Instrumental

NOMBRES: Diaz Zelaya Nelson

GRUPO: 1

FECHA DE PRESENTACIÓN: 18/11/2023

Sucre-Bolivia
2023
 PRACTICO 5
DETERMINACION DE FOSFORO EN UNA MUESTRA DE QUESO POR ESPECTROFOTOMETRIA UV-VIS
1. FUNDAMENTO

La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta-visible (UV/VIS) es una

espectroscopia de emisión de fotones y una espectrofotometría. Utiliza radiación electromagnética (luz)
de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético, es decir, una longitud de onda entre 160nm y 780nm. La radiación absorbida por las
moléculas desde esta región del espectro provoca transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de moléculas, y
además, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la
determinación cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transición y
compuestos orgánicos altamente conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica para determinar pequeñas cantidades
de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la concentración de cierto medicamento
que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.
La espectrofotometría ultravioleta-visible es un método de análisis químico cuantitativo que se basa en
la medición de la absorbancia del analito en solución, dicha absorbancia varia proporcionalmente a la
concentración.
La cuantificación de fósforo en una muestra liquida, es posible a través de una curva de calibrado,
midiendo la absorbancia de una serie de estándares de concentración conocida y de la muestra. En
base a la absorbancia de la muestra se obtiene gráficamente la concentración de fósforo en ppm de la
muestra.
Los quesos son una fuente importante de vitaminas y minerales como la vitamina A, la vitamina D, otras
del grupo, calcio, fósforo, magnesio y potasio que, en conjunto, ayudan a cuidar cada uno de los sistemas
de los que se compone el organismo. Por lo tanto, se determinará cuanto de fosforo contiene la muestra
de queso por espectrofotometría.

LEY DE BEER-LAMBERT

La ley de BOUGUER-LAMBERT-BEER también se conoce como ley de Beer-Lambert-Bouguer y fue

descubierta de formas diferentes e independientes en primer lugar por el matemático y astrónomo
francés Pierre Bouguer en 1729´Luego por el filósofo y matemático alemán, Johann Heinrich Lambert
en 1760 y por último el físico y matemático también alemán, August Beer en el año 1852. Se puede decir
que esta ley se trata de un medio o método matemático, el cual es utilizado para expresar de que modo
la materia absorbe la luz. En óptica (Rama de la física que se encarga del estudio de la luz) La ley de
Beer afirma que la totalidad de luz que emana de una muestra puede disminuir debido a tres fenómenos
de la física, que serían los siguientes: 1. El número de materiales de absorción en su trayectoria, lo cual
se denomina concentración 2. Las distancias que la luz debe atravesar a través de las muestra.
Denominamos a este fenómeno, distancia del trayecto óptico 3. Las probabilidades que hay de que el
fotón de esa amplitud particular de onda pueda absorberse por el material. Esto es la absorbencia o
también coeficiente de extinción. La relación anterior puede ser expresada de la siguiente manera:
Donde,
A = Absorbencia
ε = Coeficiente molar de extinción
d = Recorrido (en cm)
c = Concentración molar

A medida que la luz atraviesa un medio que la absorbe, la cantidad de luz absorbida en cualquier
volumen corresponde a la intensidad de luz que incide, luego se multiplica por el coeficiente de la
absorción. Frecuentemente la intensidad de un haz de luz incidente declina significativamente a medida
que pasa a través del medio absorbente. Cuando esta relación se expresa como Ley de
BOUGUERLAMBERT-BEER, tenemos que:

La transmitancia se puede expresar como la intensidad de la radiación incidente, Io. Esto puede dividir
a la luz que emerge de la muestra, I. Se refiere a la relación I/Io como transmitancia o como T. La
transmitancia se puede trazar con relación a la concentración, pero esta relación no sería Lineal. Aunque
el logaritmo negativo en base 10 de la transmitancia sí es lineal con la concentración. De esta forma, la
absorción es medida como:

A continuación podemos observar un diagrama de la absorción de un haz que atraviesa un recipiente

de tamaño l

Esta ley es también aplicada para representar la disminución de la radiación solar al pasar por la
atmósfera. En este caso hay una propagación de la radiación además de la absorción. La ley de
BOUGUER-LAMBERT-BEER para la atmósfera se suele expresar de la siguiente forma

Cada kx corresponde a un coeficiente de extinción en el cual el subíndice se encarga de identificar la

fuente de absorción:
a  hace referencia a los aerosoles densos, estos absorben y dispersan.
g  corresponde a los gases uniformemente mezclados, en especial dióxido de carbono (CO2) y
oxígeno molecular (O2) el cual solo absorbe.
NO2  corresponde al dióxido de nitrógeno, debido especialmente a la contaminación (sólo absorbe)
ω  corresponde a la absorción que se produce por el vapor de agua
O3  corresponde al ozono (sólo absorbe)
r es correspondiente a la dispersión de Rayleigh para el oxígeno molecular (O2) y nitrógeno (N2)
2. OBJETIVO
Determinar, la concentración de fosforo en una muestra de queso mediante espectrofotometría
Ultravioleta-Visible.

3. EQUIPOS Y MATERIALES
 Espectrofotómetro Ultravioleta-Visible
 Cubetas porta muestras (6)
 Pipetas graduadas de 1,2 y 5 ml
 Tubos de ensayo (6)
 Gradilla para tubos de ensayo
 Mufla
 Balanza analítica
 Capsula de porcelana
 Pinza para crisol
 Desecador
 Placa calefactora con temp. Programable
 Matraz aforado de 25 y 100 ml
4. Reactivos
 Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.H2O
 Solución de HNO3 1:1
 Fosfato di acido de potasio KH2PO4
 Hidroquinona C6H6O2
 Sulfito de sodio Na2SO3
Preparación de la muestra
1. En una cápsula de porcelana limpia y seca, pesar 3 gr de queso triturado.
2. Colocar en la mufla y calcinar durante 3 horas a una temperatura de 650 °C.
3. Apagar la mufla y al cabo de ½ hora retirar la capsula y colocar en el desecador por ½ hora.
4. Disolver la ceniza en la misma capsula con 5 ml de una solución de HNO 3 1:1 en volumen a
una temperatura de 105°C hasta sequedad.
5. Agregar 5 ml de la solución HNO3 1:1 para disolver y levar a un volumen de 25 ml con agua
destilada.
6. Tomar 10 ml de la solución muestra y enrasar a un volumen de 100 ml.

Preparación de la solución madre 100 ppm de KH2PO4

 Pesar 0.4394 g de KH2PO4 seco, disolver y enrasar a un litro en un matraz aforado.

Preparación de estándares de calibración 1,2,4 y 6 ppm

 Se toman 4 tubos de ensayo de 15 ml, al primero colocar 0,1 ml de la solución madre al
segundo colocar 0,2 ml, al tercero 0,4 ml y al cuarto 0,6 ml.
 Luego a los 4 tubos colocar 1ml de Molibdato de amonio (NH4)6Mo7O24.H2O , 1ml de
Hidroquinona C6H6O2 y 1 ml de Sulfito de Sodio Na 2SO3.
 Enrasar con agua destilada hasta un volumen de 10 ml.
Solución Blanco
  En un tubo de ensayo colocar todos los reactivos en la misma proporción de los estándares,
menos la solución madre y enrasar a 10 ml con agua destilada.
Muestra
 En un tubo de ensayo colocar 1ml Molibdato de amonio, 1ml de Hidroquinona y 1ml de
Sulfito de sodio, y enrasar a 10ml con la muestra.

5. ESQUEMA EXPERIMENTAL (Ilustrar con una imagen la determinación y nombrar los comandos y su
función)
6. PROCEDIMIENTO
1. Energizar el Espectrofotómetro UV-V
2. Seleccionar la lámpara (Tungsteno o Deuterio)
3. Ajustar la longitud de onda de análisis del fósforo.
4. Colocar alas cubetas de medición de absorbancia hasta el aforo, los patrones, el blanco y la
muestra.
5. Ajustar a cero de absorbancia con la solución blanco.
6. Medir la absorbancia de la muestra.
7. Realizar la curva de calibración con los datos absorbancia y concentración de los estándares.
8. Obtener gráficamente la concentración de fósforo.
7. CALCULOS

Calibración mediante regresión lineal.

Tabla 1. Datos de obtenidos en laboratorio

Concentración “C” Absorbancia (A)
N° (ppm)

1 0 0
Blanco
2 1 0.135
3 2 0.257
4 4 0.501
5 6 0.766

𝒀 = 𝒎𝒙 + 𝒃
𝑨 = 𝒎𝑪 + 𝒃
n° X Y XY X2 Y2
1 0 0 0 0 0
2 1 0.135 0.135 1 0.018
3 2 0.257 0.514 4 0.066
4 4 0.501 2.004 16 0.251
5 6 0.766 4.596 36 0.587
∑𝒏 = 𝟓 ∑ 𝑿 = 𝟏𝟑 ∑ 𝒀 = 𝟏. 𝟔𝟓𝟗 ∑ 𝑿𝒀 = 𝟕. 𝟐𝟒𝟗 ∑ 𝑿𝟐 = 𝟓𝟕 ∑ 𝒀𝟐 = 𝟎. 𝟗𝟐𝟐

𝒏 ∗ ∑ 𝑿𝒀 − ∑ 𝑿 ∗ ∑ 𝒀 𝟓 ∗ 𝟕. 𝟐𝟒𝟗 − 𝟏𝟑 ∗ 𝟏. 𝟔𝟓𝟗
𝒎= = = 𝟎. 𝟏𝟐𝟔𝟓
𝒏 ∗ ∑ 𝑿𝟐 − (∑ 𝑿)𝟐 𝟓 ∗ 𝟓𝟕 − (𝟏𝟑)𝟐

( ∑ 𝒀 ∗ ∑ 𝑿𝟐 ) − ( ∑ 𝑿 ∗ ∑ 𝑿𝒀 ) 𝟏. 𝟔𝟓𝟗 ∗ 𝟓𝟕 − 𝟏𝟑 ∗ 𝟕. 𝟐𝟒𝟗
𝒃= = = 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟖
𝒏 ∗ ∑ 𝑿𝟐 − (∑ 𝑿)𝟐 𝟓 ∗ 𝟓𝟕 − (𝟏𝟑)𝟐
 (𝒏 ∗ ∑ 𝑿𝒀 − ∑ 𝑿 ∗ ∑ 𝒀)𝟐 (𝟓 ∗ 𝟕. 𝟐𝟒𝟗 − 𝟏𝟑 ∗ 𝟏. 𝟔𝟓𝟗)𝟐
𝑹𝟐 = = = 𝟎. 𝟗𝟗𝟗𝟖
(𝒏 ∗ ∑ 𝑿𝟐 − (∑ 𝑿)𝟐 ) ∗ (𝒏 ∗ ∑ 𝒀𝟐 − (∑ 𝒀)𝟐 ) (𝟓 ∗ 𝟓𝟕 − (𝟏𝟑)𝟐) ∗ (𝟓 ∗ 𝟎. 𝟗𝟐𝟐 − (𝟏. 𝟔𝟓𝟗)𝟐 )

curva de calibracion
y = 0.1265x+0.0028
0.9
R2 = 0.9998
0.8 0.766

0.7

0.6
absorbancia (A)

0.501
0.5

0.4

0.3 0.257
0.285
0.2
0.135

0.1

0
0 1 2 2.23 3 4 5 6 7
concentracion (C)

y = 0.1265x+0.0028
2
R = 0.9998

Absorbancia M1 = 0.285
𝒀 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟖 𝟎. 𝟐𝟖𝟓 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟐𝟖
𝑿= = = 𝟐. 𝟐𝟑
𝟎. 𝟏𝟐𝟔𝟓 𝟎. 𝟏𝟐𝟔𝟓
Concentración de la muestra = 2.23 ppm
8. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

La tendencia obtenida con los datos en la curva de calibración si es lineal, no se observan desviaciones.
Esto indica que la práctica se realizó de forma eficaz y correcta y que cada paso se siguió de la forma
indicada, la ecuación obtenida con la comparación absorbancia vs concentración fue la siguiente:

y = 0.1265x+0.0028
El valor que se obtuvo de R define la linealidad que se maneja entre los datos; R es una prueba
estadística que permite analizar la relación entre dos variables medidas en un nivel por intervalos o de
razón, donde R mide el grado de asociación lineal entre dos variables X e Y[1], en esta ocasión al
observar lo poca dispersión entre los puntos de la gráfica elaborada con los datos de la tabla se
encuentra una linealidad asociada a la recta de un valor de 99.98% resultado que especifica el buen
manejo de la práctica.
Se pudo calcular la concentración de la muestra de forma adecuada, obteniendo un valor de 2.23 ppm
9. CONCLUSIONES
- Se aplicaron de manera eficaz los principios básicos de la espectrofotometría al encontrar una
relación lineal entre la absorbancia y la concentración de las muestras obteniendo una recta igual a :
y = 0.1265x+0.0028
- Gracias a un buen manejo de los instrumentos utilizados en esta practica se determinó el espectro de
absorción de una muestra dada obteniendo un valor de 0.285 para este.
- Se aplicaron de forma consistente los métodos conocidos y obtenidos a lo largo de cada practica de
laboratorio al obtener una gráfica que representa muy poca dispersión entre los datos obtenidos.
- Se logro determinar la concentración de una muestra dada gracias a los buenos resultados hallados
en la primera etapa de la practica por medio de una curva de calibración que relaciono estos valores y
dio como resultado una concentración de 2.23 ppm
10. BIBLIOGRAFIA
 https://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_ultravioleta-visible
 Métodos de análisis. Boletín Oficial del Estado (30/8/1979).
 Federación Internacional de Lechería. Norma FIL-IDF 33A: 1971.
 Orden de 29 de noviembre de 1985 relativa a las normas de calidad para quesos y quesos fundidos
destinados al mercado interior. Boletín Oficial del Estado (6/12/1985)
.