TAREA GRUPAL: ESPECTROFOTOMETRÍA

Lee esta práctica, escucha los videos con los links que están al final y agénciate de
más información para contestar las siguientes preguntas del cuestionario.

CUANTIFICACIÓN DE HIERRO POR ESPECTROFOTOMETRÍA EN EL UV-VISIBLE

I. CAPACIDADES

1. Conoce y opera el espectrofotómetro UV – visible

2. Maneja los términos absorbancia, transmitancia y la ley de Lambert y Beer.
3. Prepara disoluciones y maneja la curva de calibración para cuantificación de
Hierro.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

Las técnicas espectroscópicas o espectrofotométricas se basan en la utilización de
energía luminosa de cierta longitud de onda para identificar y cuantificar analito de
una muestra. Es común clasificar estas técnicas atendiendo a la región del espectro
electromagnético que utilizan, y así por ejemplo se tiene la espectroscopía de rayos X
(usa longitudes de onda que van de 100 pm a 10 nm), la espectroscopía en el
ultravioleta (de 180 a 380 nm), espectroscopía en el visible (de 380 a 780 nm) y
espectroscopía de infrarrojo (de 0.78 a 50 µm) (Harris, 2001). Las radiaciones
ultravioleta y visible (UV-Visible) se usan ampliamente con fines analíticos y ambas
pueden ser medidas con los espectrofotómetros comunes.
Cuando un analito en disolución capaz de absorber luz se coloca en la celda de un
espectrofotómetro y se le hace incidir luz de cierta longitud de onda (monocromática o
de un solo color), parte de la luz incidente es absorbida por el analito y otra parte
atraviesa y llega al fototubo del equipo que la detecta y mide (Verde y col., 1999).
Estas propiedades se conocen como absorbancia y transmitancia y se definen como se
indica a continuación.
Figura 1. Fenómenos de absorbancia y transmitancia. Parte de la luz monocromática
que incide en la celda es absorbida por el analito en disolución y otra parte es
transmitida.

Si Po es la energía radiante incidente y P la energía radiante transmitida, la

transmitancia, definida como la fracción de la energía radiante que pasa a través de la
muestra (disolución conteniendo al analito), se expresa como:
T = P/Po, o bien T%= (P/Po)100
Mientras que la absorbancia, definida como la fracción de la energía radiante que es
absorbida por la muestra y que está relacionada logarítmicamente con la
transmitancia, se expresa como:
A = -log T = log (Po /P)
La ley de Lambert y Beer, indica cuantitativamente como la absorbancia depende de la
concentración de las moléculas absorbentes y de la longitud del trayecto, paso óptico
o recorrido de la luz en la celda. Cuanto mayor sea la concentración de las moléculas
absorbentes mayor será la absorbancia pues habrá más moléculas por unidad de
volumen absorbiendo, e igualmente entre mayor sea la longitud del paso óptico,
mayor será la absorbancia pues existirán más moléculas en el trayecto recorrido por la
luz (Skoog y col., 2008). La ley de Lambert y Beer dice por lo tanto, que la absorbancia
es directamente proporcional a la concentración de la especie absorbente (c) y a la
longitud del paso óptico (b) y se expresa como:
A = εbc
En donde:
ε = constante de proporcionalidad llamada absortividad molar en M -1 cm -1
b = longitud de paso óptico en cm
c = concentración de la especie absorbente en M
Nótese que A es adimensional.
La ley de Lambert y Beer sólo se cumple con radiación monocromática y en
disoluciones diluidas (10 -2-10 -6 M) debido a que en disoluciones concentradas las
moléculas de soluto interaccionan entre sí y cambian sus propiedades, entre ellas, la
absortividad (Harris, 2001). Bajo estas condiciones, un gran número de compuestos
siguen la ley de Beer, pero algunos no muestran una relación lineal entre absorbancia y
concentración. Para saber el intervalo de concentraciones en el que un compuesto
sigue una relación lineal con la absorbancia (ley de Lambert y Beer), se elabora una
curva de calibración midiendo las absorbancias de disoluciones del analito de
concentraciones conocidas.

III. MATERIALES Y REACTIVOS

Balanza analítica
Espectrofotómetro Genesys o Biomate
2 celdas de acrílico o de vidrio óptico
Papel seda
1 matraz volumétrico de 50 mL
2 matraces volumétricos de 500 mL
1 pipeta graduada de 1 mL
1 pipeta graduada de 5 mL
2 pipetas graduadas de 10 mL
4 vasos de precipitados de 100 mL
1 espátula
1 Bombilla de succión
Disolución de ácido clorhídrico (HCl) 0.05 M, 500 mL
Disolución de cloruro férrico (FeCl3) 1 X 10-4 M en HCl 0.05 M, 500 mL
Tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M, 50 mL
Disolución problema de cloruro férrico. Concentración aproximada: 5 x 10 -5 M
IV.PROCEDIMIENTO
Preparación de Disoluciones
Prepare las disoluciones de ácido clorhídrico (HCl) 0.05 M (en campana de extracción),
cloruro férrico (FeCl3) 1 X 10-4 M y tiocianato de amonio (NH4SCN) 0.5 M. Antes de
proceder a su preparación verifique con su profesor los cálculos y forma de
preparación.
Determinación del Espectro de Absorción del Complejo Tiocianato de Hierro (III)
Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de la disolución de cloruro férrico, 0.3 mL de la
disolución de tiocianato de amonio, 4.7 mL de agua destilada, tape y agite por
inversión. Transfiera a una celda y lea la absorbancia en el modo barrido de 400 a 550
nm a intervalos de 5 nm. Ajuste la absorbancia con un blanco preparado con 0.3 mL de
la disolución de tiocianato de amonio y 9.7 mL de agua destilada.
Elaboración de la Curva de Calibración del Complejo Tiocianato de Hierro (III)
Prepare la siguiente serie de tubos:

Tubo Disolución de FeCl3 1 X 10-4 M Disolución de NH4SCN 0.5 M Agua destilada

(mL) (mL) (mL)

1 1 0.3 8.7
2 2 0.3 7.7
3 3 0.3 6.7
4 5 0.3 4.7
5 7 0.3 2.7
6 9 0.3 0.7
7 0 0.3 9.7

Mezcle por inversión y lea inmediatamente la absorbancia a la longitud de onda de

máxima absorbancia (λMax) encontrada en su espectro de absorción. Ajuste la
absorbancia con el blanco (tubo 7).
Determinación de la Concentración de Fe3+ en la Disolución Problema
Coloque en un tubo de ensayo 5 mL de la disolución problema de cloruro férrico, 0.3
mL de la disolución de tiocianato de amonio, 4.7 mL de agua destilada, tape y agite por
inversión. Transfiera a una celda y lea la absorbancia a la longitud de onda de máxima
absorbancia (λMax) encontrada en su espectro de absorción. Ajuste la absorbancia con
el blanco preparado con 0.3 mL de la disolución de tiocianato de amonio y 9.7 mL de
agua destilada.
V. CÁLCULOS Y RESULTADOS
Determinación del Espectro de Absorción del Complejo Tiocianato de Fierro (III)
Con los resultados construya una gráfica de absorbancia contra longitud de onda y
determine la longitud de onda de máxima absorbancia para el complejo rojo de
tiocianato de fierro (III). Muestre a su profesor la longitud de onda seleccionada antes
de continuar con la elaboración de la curva de calibración y la cuantificación de hierro
en su muestra problema.
Elaboración de la Curva de Calibración del Complejo Tiocianato de Fierro (III)
Construya una gráfica de absorbancia contra concentración molar de Fe 3+. Compruebe
en que intervalo hay linealidad y por lo tanto, la ley de Beer se cumple. Obtenga la
ecuación de la recta y el coeficiente de correlación (R 2) para ver que tan bien se ajustan
sus datos a la línea recta.
Determinación de la concentración de Fe3+ en la Disolución Problema
Obtenga la media de sus tres determinaciones de absorbancia y la desviación estándar.
Con la ecuación de la recta obtenida en el punto anterior, encuentre la concentración
de FeCl3 de su muestra problema. Solicite a su profesor la concentración real de su
muestra problema y reporte la exactitud y la precisión de su determinación.
www.youtube.com/watch?v=G-C5a0lpoc0&ab_channel=MelquiadesBarraganCondori
www.youtube.com/watch?v=gmEzzEse5IA&ab_channel=NORLEYMORETO
VI. CUESTIONARIO

Desarrollar el siguiente cuestionario de definiciones; leer la práctica y videos

proporcionados e investigar en textos los siguientes términos y dar dos ejemplos
de cada término y haga un es quema o dibujo que ilustre su uso de cada uno.

1. Absorbancia
2. Transmitancia
3. Luz mono cromática
4. Analito
5. Ley de Lambert y Beer
6. Longitud de paso óptico
7. Curva de calibración
8. Espectro de Absorción
9. Espectrofotometría
10. Espectrofotometría UV-Visible
11. Longitud de onda en espectrofotometría de rayos X
12. Longitud de onda en espectrofotometría ultravioleta
13. Longitud de onda en espectrofotometría de infrarrojo
14. Longitud de onda en espectrofotometría en el UV-Visible
15. Absortividad
16. Espectro electromagnético
17. Coeficiente de correlación
18. Celda o cubeta de muestra
19. Barrido espectral
20. Absorbancia corregida

VII. BIBLIOGRAFÍA

 Harris Daniel C., 2001. Análisis Químico Cuantitativo. 2ª edición. Editorial

Reverté, S.A. México.
 Skoog Douglas A., West Donald M., Holler F. James, Crouch Stanley R. 2008.
Fundamentos de Química Analítica. 8ª edición.
Thomson Learning, México.
 Verde Calvo José Ramón, Escamilla Hurtado Ma. de Lourdes, Reyes Dorantes
Alberto y Malpica Sánchez Frida. Manual de Prácticas de Química Analítica II. 1ª
edición. Universidad Autónoma Metropolitana-Iztapalapa, México.