“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

Tema: Espectrofotometría

Curso: Equipos e Instrumentos del laboratorio Clínico y Anatomía

Patológica

Aula: 2NLA21-08

Integrantes:
Nolberto Barrios Veneros
Karina Gastelo Ynoñan
Cristhian Pillaca Manayay
Kiara Quiroz Ruiz
Miguel Ángel Romero

Profesor: ALVAREZ ALVAREZ FELIX JAVIER

2023
 DEDICATORIA

Agradecemos a Dios
por habernos otorgado una familia
maravillosa, quienes han creido en nosotros
siempre, dándonos ejemplos de superación,
humildad y sacrificio; enseñándonos a valorar
todo lo que tenemos a todos ellos dedicamos
esté presente trabajo, porque han fomentado
en nuestras vidas, el deseo de superación y
de triunfo en nuestras vidas.
 INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría es una técnica analítica que se utiliza para medir la

cantidad de luz absorbida o transmitida por una muestra en función de la
longitud de onda. Esta técnica se basa en el principio de que cada compuesto
químico absorbe o transmite la luz en diferentes longitudes de onda, lo que
permite identificar y cuantificar los componentes de una muestra.

Existen varios tipos de espectrofotómetros, incluyendo los de absorción UV-Vis

(ultravioleta-visible), infrarrojo cercano y medio (NIR y MIR), Raman, entre otros.
Cada uno de ellos utiliza una fuente de luz específica y un detector para medir la
cantidad de luz absorbida o transmitida por la muestra en diferentes longitudes
de onda.

La espectrofotometría es una técnica ampliamente utilizada en la bioquímica

para cuantificar la cantidad de sustancias en una muestra, así como para
determinar la absorción o emisión de luz por compuestos específicos en una
muestra.

En la bioquímica, la espectrofotometría se utiliza comúnmente para cuantificar la

concentración de proteínas, ácidos nucleicos, enzimas y otros compuestos en
una muestra. Por ejemplo, para medir la concentración de proteínas en una
muestra, se utiliza un espectrofotómetro para medir la absorbancia de luz a una
longitud de onda específica, generalmente 280 nm, que se correlaciona con la
concentración de proteína. Además, la espectrofotometría se utiliza para
caracterizar y analizar las propiedades ópticas de diferentes compuestos,
incluyendo los cromóforos y las coenzimas.

Por ejemplo, la espectroscopía UV-Vis se utiliza para medir la absorbancia de

la luz en diferentes longitudes de onda para determinar la estructura y
concentración de compuestos como los ácidos nucleicos y los pigmentos
fotosintéticos.

En resumen, la espectrofotometría es una técnica importante en la bioquímica

que se utiliza para cuantificar la cantidad de diferentes compuestos en una
muestra, así como para caracterizar sus propiedades ópticas y estructurales.
 MARCO TEORICO

El espectrofotómetro fue creado por Arnold Orville Beckman (1900-2004) nació

en Cullom (Illinois, Estados Unidos). Se recibió de licenciado en Ingeniería
Química de la Universidad de Illinois en 1923 y se doctoró en química en el
California Institute of Technology en 1928. A principios de la década de 1950, su
compañía Beckman Instruments Inc. surgió como un importante proveedor de
una amplia gama de instrumentos médicos y de investigación, y un importante
fabricante de computadoras electrónicas para la automatización industrial.
Durante esa época, casi todos los laboratorios de bioquímica y clínicos del
mundo tenían un medidor de pH. Beckman, un espectrofotómetro Beckman DU,
una ultracentrífuga analítica; en 1941 revolucionó el mundo de la biociencia. La
química ha avanzado a pasos agigantados todos los días aparecen nuevas
técnicas y avanzados instrumentos científicos que facilitan la tarea de los
investigadores, sin embargo, son poco los instrumentos que logran volverse
masivos y accesibles a toda la comunidad como fue el caso del
Espectrofotómetro. Entre las décadas de 1950 y 1970 los espectrofotómetros
fueron fundamentales en los laboratorios clínicos y siendo una potente
herramienta para los investigadores. En la actualidad, son un aparato cotidiano
en los Laboratorios químicos mientras que en los Laboratorios hospitalarios se
utilizan analizadores automatizados que emplean los principios básicos
heredados de este instrumento. La contribución del espectrofotómetro a la
química ha sido tan grande que Bruce Merrifield, ganador del premio Nobel de
Química en 1984, lo consideró como “probablemente el instrumento más
importante jamás desarrollado para el avance de la biociencia. El
espectrofotómetro es un instrumento que permite proyectar un haz de luz a
través de una muestra y medir la
absorbancia (la cantidad de luz
absorbida por la muestra) o la
transmitancia (la cantidad de luz que
pasa a través de la muestra, es
decir, el recíproco matemático de la absorbancia). La cantidad de luz absorbida
o transmitida a una determinada longitud de onda es proporcional a la
concentración del material. Si el material no absorbe luz por sí mismo, se puede
mezclar con otros reactivos para obtener, mediante una reacción química
específica, una solución que si absorba luz. Los espectrofotómetros actuales
pueden medir sobre prácticamente cualquier material (líquidos, plásticos, papel,
metal, telas, etc.), de allí su versatilidad y uso en diferentes disciplinas. Las
principales aplicaciones de los espectrómetros son determinación de la cantidad
en una solución de un compuesto en específico (p.e concentración de hierro en
la sangre, de cobre en un tejido, etc.), identificación de unidades estructurales
específicas, (ya que estas tienen distintos tipos de absorbancia), Un
espectrofotómetro en general consta de los siguientes componentes: una fuente
de luz, un dispositivo de enfoque, un filtro de luz, una celda o cubeta de
absorción, un fotodetector y un dispositivo de visualización. La fuente de luz
debe proporcionar longitudes de onda de luz correctas e intensidad constante.
Típicamente, se utiliza una bombilla de filamento de tungsteno, que proporciona
luz en la longitud de onda de 380 a 800 nanómetros (nm), cubriendo la región
visible, y lámparas de hidrógeno o deuterio para la región UV, ya que producen
longitudes de onda entre los 190 y los 380 nm17. Mediante una lente (el
dispositivo de enfoque), la luz es concentrada en un solo haz. El funcionamiento
del

espectrofotómetro consiste en hacer pasar este rayo de luz a través de un

monocromador, un dispositivo óptico de múltiples piezas, que selecciona sólo
una porción estrecha del espectro de luz. Luego, la luz seleccionada pasa a
través de la cubeta de absorción, que contiene la muestra que se está
analizando. Las cubetas son redondas o rectangulares y están construidas de
vidrio, cuarzo, sílice fundida o plástico. Es importante que el material de la
cubeta no absorba luz en las longitudes de onda en las que se está midiendo.
 MATERIALES

Propipeta

Pipeta Graduada

Papel para fin

Vaso precipitado
 Tubos de ensayo

destilada

Gradilla

Nitrato de Cobalto 5%

Cubetas
 Espectrofotómetro

Métodos: Se preparan 6 tubos de ensayo para:

1. Diluciones seriadas: Las diluciones seriadas se utilizarón con el fin de reducir

progresivamente, paso a paso, la concentración en este caso CoNO3, para ello se
diluyo 1ml de nitrato de cobalto (al 5%) en 3 ml de agua destilada, como se
aprecia en la imagen y el orden de los tubos (derecha a izquierda) el tubo con
mayor concentración seria:
Del tubo #1 se extrae la medida de cantidad de 1ml para pasarlo al siguiente tubo

Del tubo #2 se extrae la misma cantidad y así se debe seguir el proceso hasta el 6°

tubo.
 Luego se llevaron las muestras para evaluarlas en el espectrofotómetro y realizar

la

2. Medición de absorbancia para ello se debe llevar a cabo el siguiente proceso.

3. La 1° primera Cubeta se llena con agua destilada en una cantidad de 2ml y al
100% de transmitancia,
4. La 2°segunda Cubeta con el tubo de mayor Concentración
5. La 3° Cubeta se hizo el mismo procedimiento hasta terminar de llenar las demás
cubetas, una vez puesto cerramos la tapa y calibramos la longitud de onda a 540
nanómetros que es, así mismo el tubo 1 el cual lo ponemos en “BLANCO” es
decir en cero, con el manillar jalamos y obtenemos la absorbancia de las demás
muestras.

Ubicación de las cubetas

Cubeta N°1= 00 Cubeta N°2; 0.199
 Cubeta N°3; 0.061 Cubeta N° 4; 0.017

RESULTADOS
Determinación de los espectros de absorción
Nombre de la sustancia: Nitrato de Cobalto al 5%

Se registró en la siguiente tabla el valor de la absorbancia de la muestra, para

cada grupo que realizó la lectura.

Cuadro 1. Niveles de absorbancia por grupo

GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3 GRUPO 4 GRUPO 5

BLANCO 00 00 00 00 00

TUBO 1 0.153 0.209 0.109 0.199 0.240

TUBO 2 0.008 0.890 0.050 0.061 0.168

TUBO 3 0.076 0.067 0.021 0.017 0.104

Cuadro 2. Resultados porcentuales obtenidos del grupo N° 4

TUBOS %

TUBO 1: 0.199 0.199*5%= 0.00995%

 TUBO 2: 0.061 0.061*5%= 0.00305%

TUBO 3: 0.017 0.017*5%= 0.00085%

Gráfico Lineal
Cuadro 3. Resultados de los niveles de absorbancia de cada tubo del Grupo 4

ABSORBANCIA

0.21
0.199
0.16

0.11

0.06 0.061

0.01 0.017
TUBO 3 TUBO 2 TUBO 1

En la gráfica se observa claramente un comportamiento lineal que

confirma que la absorbancia de una solución es directamente proporcional
a su concentración es decir que entre mayor concentración tenga la
muestra mayor será su absorbancia tal como se aprecia en la gráfica.

Factores

Al realizar la lectura en el espectrofotómetro se debe tener en cuenta que

la cubeta no presente ningún rayón o alguna impureza, ya que esto podría
afectar de manera directa los resultados.
La cubeta se debe llenar con la sustancia hasta el aforo indicado debido a
que, llegado el caso de agregar una poca cantidad de esta, el haz de luz
solo mediría una parte de la sustancia y otra parte vacía, haciendo un mal
uso del espectrofotómetro, así mismo se debe evitar llenar de más y así
ocasionar un derrame de sustancia dentro de este.
 CONCLUSIONES

El espectrofotómetro es una herramienta muy importante en el laboratorio,

con ella determinamos la absorbancia de una sustancia en una cubeta a
través de un haz de luz.

Las técnicas colorimétricas se basan en la medida de la absorción. de la

colorimetría y la espectrofotometría su aplicación en la química clínica,
mediante la obtención y análisis de los valores de las distintas variables
que se presentan en dicho método.

Se demostró el estudio y el tipo de cambio de concentración que se da en

cada sustancia química, que da como resultados números de
concentración, al final de la clase obtuvimos cifras con las 6 muestras en
los tubos que estudiamos y de ello se logró que cada alumno pudiera
obtener cambios de concentración y se logró analizar el cambio que se
dará en el proceso.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1. https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/87008/
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2. https://www.google.com/search?
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3. https://www.google.com/search?q=Diagrama+de+un+espectrofot
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%C3%A1sico.&rlz=1C1ALOY_esPE980PE980&oq=Diagrama+de+un+espectrofot
%C3%B3metro+b
%C3%A1sico.&aqs=chrome..69i57j33i160l3j33i22i29i30.958j0j15&sourceid=chro
me&ie=UTF-8#imgrc=xIcMtxomiCNbNM&imgdii=6D0Eg3iPlHEBQM