UNIVERSIDAD DEL VALLE DE

MÉXICO
LICENCIATURA EN QUÍMICO
FARMACÉUTICO BIOTECNÓLOGO
Reporte No 8. Cuantificación de hierro por espectrofotometría en el visible

Integrantes del equipo: José Eduardo Cruz Pinzón, Karla Guadalupe Villanueva
Maldonado, Cristian Palacio Méndez, David Ignacio Gutiérrez González, Dulce María
García Candelario y Danna Paola Alejandro Angulo

Asignatura: Desarrollo Analítico

Licenciatura QFBT

Fecha de entrega: 24 de octubre del 2022

Docente: Ángel Mario Alamilla Escalante

Resumen.

En esta práctica se realizará una lectura de la absorbancia de una solución de cloruro

férrico, tiocianato de amonio y agua destilada, en el espectrofotómetro por el método de
espectrofotometría UV-visible para poder conocer el valor de la absorbancia a diferentes
concentraciones de las distintas disoluciones utilizadas para poder observar la variación en
el valor de absorbancia.

Palabras clave Espectrofotómetro, absorbancia, concentración, Hierro, analito, curva

INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la

concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma.
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El espectro de absorción es una representación gráfica que indica cantidad de luz absorbida
(ε) a diferentes valores de λ. A partir de una solución diluida de un compuesto, cuya
absorbancia máxima entra dentro del rango de medida del espectrofotómetro, se verá el
valor de absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el
disolvente de la solución de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorción se
obtendrá el valor de λ al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (λmax). Dicho λ
se utilizará a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto.

El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de las moléculas para absorber

radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV visible. Las longitudes de
onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que se
absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del medio (pH,
temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica constituye un
valioso instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.

En relación a esto, es por ello que los espectrofotómetros UV-VIS son utilizados
habitualmente por una gran variedad de industrias con fines diversos. Desde la industria de
la alimentación, empresas y entidades encargadas del control de las aguas residuales,
entidades de salud pública, empresas y laboratorios dedicados al control de la calidad
ambiental, hasta la industria de los materiales, hacen uso de medidas mediante
espectrofotometría UV-VIS para el control de la calidad de sus productos o servicios.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Conocer la concentración de muestras problema que contenga el mismo analito, mediante

la elaboración de graficas como la de la absorbancia contra la longitud de onda para el
Tiocianato de Hierro (III) donde se determinara la absorbancia máxima, así como también
de la gráfica para ubicar al analito de interés.

JUSTIFICACIÓN
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La espectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS) es una potente técnica para diversas
aplicaciones de distintas industrias y segmentos de mercado.

Cuando una sustancia absorbe el máximo de luz a una determinada longitud de onda, se da
una relación única entre la sustancia y su espectro UV-VIS. Esta relación puede servir
para…

Análisis cualitativos: es decir, determinar la presencia de ciertas sustancias.

Análisis cuantitativos: es decir, determinar las cantidades de ciertas sustancias.

OBJETIVOS

 Determinar el espectro de absorción y elaborar la curva patrón de un analito

 Emplear esta información para cuantificar una muestra problema del mismo analito

HIPOTESIS

De acuerdo a lo mencionado en la ley de Lambert-Beer y del hecho de que se cumple para

soluciones diluidas podemos pensar que “La absorbancia de una solución es directamente
proporcional a su concentración”.

MÉTODO

Materiales

 Espectrofotómetro
 celdas para espectrofotómetro
 1 matraz volumétrico de 50 mL
 2 matraces volumétricos de 500 mL
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 1 pipeta graduada de 1 mL
 1 pipeta graduada de 5 mL
 2 pipetas graduadas de 10 mL
 12 tubos de ensayo con tapones de rosca
 1 gradilla para tubos de ensayo
 4 vasos de precipitados de 100 mL
 1 espátula
 2 vidrios de reloj
 1 propipeta
 1 agitador de vidrio
 Balanza analítica

Metodología

Preparación de Disoluciones

 Se prepararon las disoluciones de ácido clorhídrico (HCl) 0.05 M (en campana de

extracción), cloruro férrico (FeCl3) 0.0001 M y tiocianato de amonio (NH4SCN)
0.5 M. (Antes de proceder a su preparación se verifico la forma de
preparación/grado de pureza).

Determinación del Espectro de Absorción del Complejo Tiocianato de Hierro (III)

 Se colocó en un tubo de ensayo 5 mL de la disolución de cloruro férrico, 0.3 mL de

la disolución de tiocianato de amonio, 4.7 mL de agua destilada, tapar y agitar por
inversión.
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 Se transfirió a una celda y se leyó la absorbancia en el modo barrido de 400 a 550
nm a intervalos de 5 nm. (Ajustar la absorbancia con un blanco preparado con 0.3
mL de la disolución de tiocianato de amonio y 9.7 mL de agua destilada).

Elaboración de la Curva de Calibración del Complejo Tiocianato de Hierro (III)

 Se prepararon una serie de tubos de acuerdo a lo indicado en la tabla 1 que se

muestra más adelante
 Se mezcló por inversión y se llevó inmediatamente al espectro para leer la
absorbancia a la longitud de onda de máxima absorbancia (λMax) encontrada en su
espectro de absorción. Ajustar la absorbancia con el blanco (tubo 7).

RESULTADOS

Cálculos para preparar soluciones:

HCL 0.05 M

g de HCl=Peso molecular∗Concentración∗Volumen

g de HCl=36.5 g /mol∗0.05 M∗0.5 L=0,9125 g

masa
volumen=
densidad

0,9125 g
volumen= =0.66 ml
1.38 g /ml

Ajuste a pureza del 37%

puro∗100 % HCl puro

0.9125 g HCl =2.46 g de HCL impuro
37 % HCl impuro
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2.46 g
volumen= =1.78 ml
1.38 g /ml

NH4SCN 0.5 M

g de NH 4 SCN =Peso molecular∗Concentración∗Volumen

g de NH 4 SCN =76.12 g /mol∗0.5 M∗0.05 L=1,903 g

FeCl3 0.0001 M

g de FeCl 3=Peso molecular∗Concentración∗Volumen

g de FeCl 3=162.2 g /mol∗0.0001 M ∗0.5 L=0.00811 g

Se ajustaron las soluciones de acuerdo con la siguiente tabla:

Tabla 1. Preparación de soluciones seriadas

Tubo FeCl3 0.0001 M NH4SCN 0.5 M Agua destilada
(mL) (mL)
1 0.5 0.15 4.35
2 1 0.15 3.85
3 1.5 0.15 3.35
4 2.5 0.15 2.35
5 3.5 0.15 1.35
6 4.5 0.15 0.35
7 (B) 0 0.15 4.85

Barrido con el tubo 7 de blanco

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Tabla2. Barrido espectral
L. de onda ABS
290 0.766
295 0.799
300 0.793
305 0.778
310 0.764
315 0.75
320 0.738
325 0.726
330 0.716
335 0.704
340 0.692
345 0.679
350 0.665
355 0.654
360 0.641
365 0.629
370 0.616
375 0.603
380 0.59
385 0.576
390 0.562
395 0.549
400 0.536
405 0.523
410 0.509
415 0.497
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420 0.485
425 0.473
430 0.462
435 0.45
440 0.44
445 0.429
450 0.418

Barrido espectral
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5
ABS

0.4
0.3
0.2
0.1
0
285 305 325 345 365 385 405 425 445 465
Longitud de onda

Mayor absorbancia a 295 nm

Tabla 3. Curva de Calibración

Tubo mol/L ABS
1 5.00E-08 0.799
2 1.00E-07 0.956
3 1.50E-07 1.237
4 2.50E-07 1.689
5 3.50E-07 1.968
6 4.50E-07 2.268
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ABS
2.5
f(x) = 3759368.42105263 x + 0.640308771929825
2 R² = 0.987263695389491

1.5
ABS

0.5

0
0.00E+00 5.00E-08 1.00E-07 1.50E-07 2.00E-07 2.50E-07 3.00E-07 3.50E-07 4.00E-07 4.50E-07 5.00E-07
Concentración mol/L

Muestra problema presentó una ABS de 1.867, se interpola en la curva

2.5

f(x) = 3759368.42105263 x + 0.640308771929825

R² = 0.987263695389491
2

1.5
ABS

1 Muestra

0.5

0
0.00E+00 1.00E-07 2.00E-07 3.00E-07 4.00E-07 5.00E-07
Concentración mol/L

Sustituyendo la ecuación de la recta:

|¿|mx+ b
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1.867=4000000 x +0.6403

En este caso queremos determinar el valor de x, representando a la concentración, por lo

que la ecuación queda de la siguiente manera:

y−b
x=
m

|−b|
Concentración=
m

Sustituyendo

1.867−0.6403
Concentración= =3.06675E-07 mol/ L
4000000

ANALISIS DE RESULTADOS

DISCUSION

Cristian: Un método muy utilizado en los análisis químico-cuantitativos es la

construcción de una curva patrón o como también es llamada una curva de
calibración, esta técnica se fundamenta en la cantidad de una señal que se cuantifica
a una determinada concentración del analito, principalmente se tiene que utilizar la
señal de una absorción de luz en el visible, lo que puede interpretarse es que primero
deben realizarse una serie de disoluciones en las cuales se encuentre el analito que se
desea analizar o en su defecto un material, compuesto, ión o cualquier otro que sea
muy parecido en cuento a sus características. En posterior se deben someter al mismo
rango de radiación tanto las disoluciones para la construcción de la curva patrón como la
muestra problema a analizar. Según un estudio del Instituto Nacional de Toxicología de
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Madrid, se menciona que la radiación del Ultravioleta Visible tiene un efecto de
transiciones electrónicas entre los orbitales atómicos y moleculares, principalmente se
utiliza esta técnica en equipos de espectroscopia que basa su acción en la detección de un
grupo cromorfo.

Karla: En una práctica realizada por la Facultad de Ciencias Naturales y Exactas de la

Universidad del Valle, se llevó a cabo un procedimiento similar al realizado en esta
práctica, las vertientes que cambian es que, la concentración de la solución con Hierro
cambia de 0.0001 M a 2ppm, además, en el barrido espectral difiere mucho la longitud de
onda que reflejó mayor absorbancia, en su práctica esta se encuentra a los 508 nm con una
ABS de 0.316, mientras que nosotros obtuvimos una longitud de onda menor, siendo a 295
nm con una ABS de 0.799. Las diferencias entre estas vertientes pueden diferir por la
sustancia que se utilizó para realizar la solución o las diversas soluciones con
concentraciones diferentes para la curva de calibración, pero es lo único que varía, de
ambas formas se pudo obtener una curva de calibración con una R 2 cercana a 1 y a partir de
la ecuación de la recta se calcula la concentración de la solución problema.

Eduardo:

CONCLUSIÓN

Cristian: La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar

la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las
radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro,
en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma. El fundamento de la espectroscopía se
debe a la capacidad de las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones
dentro del espectro UV- visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una
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molécula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura
atómica y de las condiciones del medio (ph fuerza irónica etc)

Otras circunstancias fueron el equipo empleado, que, pese a que todo funcionan igual,
varían en diseño e interfaz. Por otra parte, el cloruro férrico no absorbe en la región del
visible es porque eso que se usa una sustancia aparte para que los iones de hierro reacciones
y formen el color presente en la muestra.

Karla: Se puede concluir que, mediante las técnicas de espectrofotometría se pueden medir
o encontrar las concentraciones de diferentes sustancias o muestras problema, siempre y
cuando se tangan soluciones patrón para poder interpolar los resultados, estas soluciones
patrón seriadas que nos sirven como referencia deben de ser lo más precisas posibles, para
que al momento de medir su ABS en el espectrofotómetro y se realice la curva de
calibración la R2 sea cercana a 1 y de esta forma se puedan obtener datos más verídicos,
recordando a conforme la concentración aumente, la ABS de igual manera lo hará.

Eduardo:

REFERENCIAS

1. Diaz, A. (1a. C.). Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación

colorimétrica de biomoléculas. UCO. Recuperado 24 de octubre de 2022, de
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETRI
A.pdf

2. Victor A. Castaño, Pablo A. Patiño & Laura C. Quintero. (2015). 1

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMÉTRICA DE Fe (II) EN UN

PRODUCTOFARMACÉUTICO: CURVA DE RROR. Programa de Tecnología

Química, Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad deValle.

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