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Una visión general de la producción de ácido cítrico

AR Angumeenal*, D. Venkappayya
Universidad SASTRA, Thanjavur 613 401, Tamilnadu, India

información del artículo abstracto

Historial del artículo: Este artículo revisa el estado actual de la investigación sobre la conversión de sustratos de bajo costo en ácido cítrico por
Recibido el 14 de enero de 2012 fermentación. La fermentación es un poderoso incentivo para los países semiindustrializados. Existe una gran demanda de
Aceptado el 22 de mayo de 2012
ácido cítrico debido a sus amplias aplicaciones industriales y su menor toxicidad. El ácido cítrico se puede producir utilizando
sustratos menos costosos que también son renovables. La biomasa vegetal es una de las materias primas deseables para la
Palabras clave:
fermentación debido a su disponibilidad en abundancia. Usando fuentes naturales como sustratos podemos minimizar los
Aspergillus niger
problemas ambientales. Siempre especies deAspergiloycándidasiguen siendo la elección de los candidatos para la biosíntesis
cándida
de ácido cítrico. Se presenta una idea general concisa de las diversas fuentes naturales que se pueden utilizar para la
Fermentación
producción de ácido cítrico junto con las condiciones de fermentación necesarias.
Ácido cítrico
Sustratos - 2012 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados.

1. Introducción frutas y piña. El ácido cítrico puro es incoloro, fácilmente soluble en


agua con un peso molecular de 210,14 g/mol. Es un producto químico
La biotecnología es un campo interdisciplinario orientado en gran medida biodegradable, ecológico, económico, seguro y versátil para secuestrar,
hacia las aplicaciones industriales de microorganismos para la conversión de amortiguar, humedecer, limpiar y dispersar. El ácido se utiliza
desechos en productos útiles. La cantidad de sustancias excretadas por los principalmente en la preparación de citratos medicinales, dulces,
microorganismos es infinita. Se clasifican en compuestos simples (p. ej., alcoholes refrescos y sales efervescentes. Se emplean pequeñas cantidades en
inferiores, ácidos, etc.) y compuestos complejos (p. ej., productos naturales y plateado y grabado y en teñido e impresión de calicó.
celulósicos) o como productos preliminares y compuestos derivados del
metabolismo secundario. Se utilizan varios procedimientos de fermentación para
la producción a gran escala de productos químicos orgánicos y combustibles de
3. Fermentación
alta energía a partir de fuentes renovables. Además, se descubrió que la
explotación de microorganismos en beneficio de la humanidad era prometedora y
La conversión microbiológica de compuestos orgánicos en material celular y
productiva. La tecnología de cultivos mixtos aplicada a los procesos, que depende
otros productos útiles es la fermentación. A pesar de ser una tecnología antigua,
de los microorganismos para su correcto funcionamiento, está en su infancia.
los avances en la ciencia han mantenido este proceso a la vanguardia.
Todavía queda mucho por explorar en términos de transformaciones secuenciales
El proceso de fermentación es ventajoso ya que se basa en fuentes
de sustratos sobre los que actúa una población de cultivo mixto de
renovables, facilita el uso de residuos con fines productivos y se forman
microorganismos. El impulso ambiental para alejarse de las técnicas químicas
subproductos útiles. Implica condiciones favorables al medio ambiente muy
tradicionales hacia la producción de base biológica ha puesto de manifiesto
suaves y también consume menos energía. También se enfrenta a algunos
Aspergilli y Candidafábricas de células muy atractivas. Así que una revisión
inconvenientes, algunos de los cuales son:
actualizada de la producción de ácido cítrico por AspergiloycándidaSe considera
muy relevante incluir aspectos de economía de las materias primas disponibles
(i) Uso de grandes cantidades de agua
como sustratos y su utilidad.
(ii) Debido a la alta DBO, los desechos requieren tratamiento antes de su eliminación.
(iii) La infección por microbios extraños puede reducir el rendimiento y
2. Química del ácido cítrico la tecnología es sofisticada.

La fermentación es un proceso complejo porque varias reacciones se integran


Ácido cítrico, un ácido tricarboxílico (C6H8O7$ H2O) es un metabolito
en una sola biorreacción para la cual las condiciones de operación deben
común de plantas y animales y está presente en jugo de cítricos
adaptarse y controlarse con precisión. A menudo se producen variaciones en los
resultados incluso en condiciones de funcionamiento aparentemente similares.
* Autor correspondiente. Teléfono:þ91 4362 264101; fax:þþ91 (0) 4362 2641201. Dirección Todos los productores comerciales de ácido cítrico prefieren confiar en su propia
de correo electrónico:angumeenal@biotech.sastra.edu (AR Angumeenal). experiencia en lugar de los llamados hechos probados.

0023-6438/$miconsulte el material preliminar - 2012 Elsevier Ltd. Todos los derechos


reservados. hacer:10.1016/j.lwt.2012.05.016
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3.1. Tipos de fermentación materiales y rendimiento alto rendimiento (Vandenberghe, Soccol, Pandey y
Lebeault, 1999). La producción de ácido cítrico también depende de una
El desarrollo de los procesos de fermentación del ácido cítrico se cepa adecuada, junto con la aireación, fuente de carbono, nitrógeno y
puede dividir en tres fases. En la primera fase, la producción de ácido fosfato, pH y oligoelementos. La morfología del microorganismo productor
cítrico se limitaba a especies depenicilioyAspergilo utilizando también juega un papel en el control y aumento de la formación de ácido
condiciones de cultivo estacionarias o de superficie. El inicio de la cítrico (BelenMax, Salgado, Rodríguez & Domínguez, 2010).
segunda fase consistió en el desarrollo de procesos de fermentación Se requiere un flujo metabólico de carbohidratos sin perturbaciones a través
sumergida para la producción de ácido cítrico utilizandoAspergilo. La de la glucólisis para obtener una alta acumulación de ácido cítrico por
tercera etapa, de origen reciente, implica el desarrollo de técnicas de A. Níger.El pH intracelular inicial en las esporas debe ser lo más alto posible
cultivo en estado sólido, cultivo continuo y fermentación multietapas si se desea una alta tasa de flujo metabólico a través de la hidrólisis para
para la producción de ácido cítrico. altos rendimientos de ácido cítrico. Pero el pH del cultivo puede cambiar
dependiendo de las actividades metabólicas microbianas. La naturaleza del
3.2. Bioquímica del ácido cítrico sustrato y la técnica de producción tienen influencia en el pH. Un pH de 2,0
era óptimo para que los mohos produjeran ácido cítrico (Srivatsava y De,
Los productos del metabolismo de los carbohidratos forman los componentes 1980), mientras que un pH en el rango de 5mi6 es favorecido con melaza.
básicos de muchos microorganismos aerobios y anaerobios. El principal Cuando se trabaja con levaduras, se requieren valores iniciales de pH
intermediario del metabolismo de los carbohidratos es el ácido cítrico. En ciertos superiores a 5. Se reporta que por debajo de pH 5, la producción de ácido
microorganismos comoAspergillus niger,bajo condiciones ambientales específicas, cítrico disminuye y se favorece la acumulación de otros productos como
el ácido cítrico se produce como un producto de desbordamiento debido a la eritritol, arabitol y manitol. El transporte de citrato a través de la membrana
operación defectuosa del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). El TCA es un ciclo celular también se ve afectado (Anastasisdis y Rehm, 2005;Karasu, Yalcin,
intermedio que involucra los pasos terminales en la conversión de carbohidratos, Bozdemir y Ozhas, 2010).
proteínas y grasas en dióxido de carbono y agua con la liberación concomitante de La temperatura óptima para la formación de ácido cítrico diferirá
energía para el crecimiento, movimiento, luminiscencia, etc. Estudios sobre el según la cepa y la composición del medio (Shuler, Kargi, 2002). Por lo
contenido enzimático de tanto, es necesario optimizar y determinar la temperatura favorable
a. nígeren relación con la acumulación de ácido cítrico han indicado el papel adecuada antes de ampliar el proceso. Sin embargo, la temperatura
vital que juega el ciclo TCA en la fermentación. La formación biológica del óptima reportada para la levadura se encuentra entre 22 y 35-C.
ácido cítrico es puramente enzimática. El mérito de la fermentación del ácido A.nígery otros hongos requieren una temperatura óptima de 25mi30-C (
cítrico depende de la regulación de la síntesis de cada una de las enzimas Corolla y Kennedy, 2001). Un aumento de la temperatura más allá de 30-Se
(involucradas en el ciclo TCA) y su actividad está bajo diversos mecanismos ha encontrado que C aumenta la acumulación de ácido oxálico
de control como los cofactores asociados a las enzimas. Los iones metálicos independientemente de las condiciones de fermentación. Por lo tanto, el
forman parte de los cofactores y, a su vez, el control de la concentración de mantenimiento de la temperatura favorecida es muy esencial para la
elementos traza puede regular la actividad de la enzima. Bajo condiciones biosíntesis eficaz del ácido cítrico.
ambientales adecuadas diferentes especies decándidatambién puede
producir ácido cítrico. 3.4. Composición media

3.3. cepas microbianas La fermentación de un sustrato a ácido cítrico está directamente


relacionada con la calidad y cantidad de la fuente de azúcar. La naturaleza
Desde hongos hasta levaduras, algunas bacterias también son del sustrato, que a su vez depende de la fuente de carbono, también tendrá
adecuadas para la producción de ácido cítrico. Las capacidades de una marcada influencia en la actividad metabólica de las cepas microbianas.
fermentación de las cepas seleccionadas a veces se mejoran usando Entre los sustratos sintéticos probados hasta ahora, la sacarosa fue el mejor
mutágenos (Pandey, Soccol, Rodríguez-León y Nigem, 2001: págs. 113mi126; candidato seguido de la glucosa, la fructosa y la galactosa (Vandenberghe et
Soccol, Vandenberghe, Rodrigues y Pandey, 2006;Vendenberghe et al., 1999 al., 1999). Hoy en día, para que la producción de ácido cítrico sea rentable, se
). La mutación es un proceso mediante el cual se mejoran fisiológica y utilizan como sustratos muchas fuentes vegetales y frutales ricas en
morfológicamente las características de una cepa, lo que resulta en una contenido de azúcar. Sucede que son fuentes renovables que hacen que el
mejora de la cinética del proceso. En tales condiciones, también se altera la proceso de fermentación sea más económico.
permeabilidad de la membrana del microbio. Los estudios sobre la La melaza es el efluente obtenido de la industria azucarera y es el residuo no
formación de ramificaciones en hongos filamentosos han demostrado que cristalizable que queda después del aislamiento de la sacarosa. Se informa que se
las mutaciones con varios químicos provocan alteraciones en la composición encuentra en el azúcar y, por lo tanto, es un buen sustrato para la fermentación
de la pared celular y cambios en las condiciones físicas que causan un efecto del ácido cítrico (Adam, 2002;Cevrimli, Kariptas y Ciftci, 2009;El Aasar, 2006). Sin
marcado en la frecuencia de ramificación. embargo, mientras se usan dichos sustratos, se necesitan procedimientos de
a. nígeres un moho negro común que puede actuar como un ácido cítrico tratamiento adecuados para hacerlos aptos para la fermentación.
fábrica de células productoras (Haq, Khurshid, Ashraf, Qadeer y Rajoka, 2001 Algunas de las fuentes naturales disponibles pueden contener nitrógeno
). Otras especies deAspergiloa saber,Aspergillus aculeatus, Aspergillus y fosfato, por lo que puede no ser necesaria su suplementación. Pero se
awamori, Aspergillus carbonaries, Aspergillus goingi, Aspergillus foetidus ( requiere su presencia en niveles óptimos. De lo contrario, la formación de
Papagianni, 2007) también produjeron ácido cítrico en cantidades citrato se verá afectada. El nitrógeno se puede suministrar a través de KNO3
apreciables. entre la levaduraSaccaromicopsis lipolytica (Rane y Sims, 1993; o NH4NO3y fosfato añadiendo K2HPO4o KH2correos4en cantidades
Wojtatowics, Marchin & Ericksen, 1993),Cándida tropicalis (Kapelli, Müller y limitadas.
Fiechter, 1978), Candida oleófilos, Candida guilliermondi (Angumeenal,
Kamalakannan, Prabhu y Venkappayya, 2003a,2003b),Cándida parapsilosis ( 3.5. Iones de metal
Omar y Rehm, 1980),C. citroformans (Uchio, Maeyashiki, Kikuchi y Hirose,
1975) eran buenas candidatas productoras de ácido cítrico. Las especies Los hongos y las levaduras requieren trazas de iones metálicos (de ahí
bacterianas también se utilizaron anteriormente para la fermentación del que se los denomine elementos traza) para su crecimiento. La presencia de
ácido cítrico. Sin embargo, entre todosA.nígersigue siendo la mejor opción magnesio y zinc son esenciales para el crecimiento microbiano (
para la producción de ácido cítrico debido a su facilidad de manejo, su Angumeenal, Kamlakanna, Prabhu y Venkappayya, 2002). Se espera que los
capacidad para fermentar una variedad de materias primas iones metálicos provoquen un cambio mutacional en la especie y también
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un cambio en el papel metabólico en el que está involucrado el intacto. El análisis químico de esta fibra de carpelo indica la presencia de azúcares
microorganismo. El mecanismo por el cual los microelementos desempeñan y minerales y, por lo tanto, se utilizó como sustrato para la producción de ácido
un papel en la nutrición fúngica es oscuro, aunque algunos de ellos forman cítrico. Se trató químicamente para extraer el azúcar reductor presente.
parte de varios sistemas enzimáticos o constituyen un componente de Fermentación por lotes utilizandoa. nígery los resultados indican que la fibra del
ciertos pigmentos. Junto con nitratos, fosfatos y sulfatosa. nígerpuede carpelo de la yaca puede servir como sustrato para la producción de ácido cítrico (
utilizar ciertos minerales como nutrientes durante la biosíntesis del ácido Angumenal y Venkappayya, 2005a,2005b, 2005c). Cuando este sustrato se analiza
cítrico. Así, en un sistema microbiano dado, varios mecanismos de captación por completo y se identifican las sustancias limitantes, se pueden tomar medidas
pueden operar simultáneamente y/o secuencialmente. Se descubrió que los para eliminarlas y convertirlo en un sustrato más eficiente para la fermentación
iones metálicos como el cadmio, el cromo, el plomo y el molibdeno son del ácido cítrico.
buenos estimulantes para la fermentación del ácido cítrico utilizandoA.níger Tubérculos pertenecientes a la familiaaráceasa saberColocassia
en un medio que contiene glucosa. Se descubrió que los intermediarios del antiquorum, Aponogetannatans y Amorphophallus campanulatus se
metabolismo microbiano en tal condición interactúan con los componentes cultivan en grandes cantidades por su porción comestible. Estos tubérculos
de la pared celular como la bicapa lipídica, la proteasa y la quitina.miglucano fueron tratados químicamente y utilizados como sustratos para la
Los metabolitos secundarios en el medio de fermentación deben analizarse producción de citrato por fermentación utilizandoa. nígerpor fermentación
para explicar la actividad celular con más detalle. Cinética de crecimiento de discontinua. Sus capacidades de fermentación se mejoraron mediante la
metales pesados adaptadaA.nígerdurante la acumulación de ácido cítrico adición de oligoelementos (cadmio, molibdeno, cromo y plomo) en
se evaluó como parte del estudio de fermentación realizado. Entre los iones cantidades óptimas (Angumeenal et al., 2003a,2003b). Durante el usoA.
metálicos agregados al medio durante la fermentación, se encuentra que el campanulatuscomo sustrato junto con el ácido cítrico, también se produjo
orden de rendimiento de crecimiento es Mo > Cr > Pb > Cd y la producción ácido succínico en grandes cantidades. De hecho, el ácido succínico
de ácido cítrico fue alta con cadmio como estimulante (Angumenal y producido fue mayor que el ácido cítrico. Esto se debe a la mayor actividad
Venkappayya, 2004). de la aconitasa en las últimas etapas de la fermentación. Por lo tanto, este
sustrato puede explorarse más a fondo para la producción de ácido
3.6. Sustratos succínico utilizando algunos promotores del crecimiento. El potencial deA.
campanulatusen la producción de ácido cítrico se mejoró mediante la
La melaza, considerada durante mucho tiempo como un producto de adición de iones metálicos.
desecho de la industria azucarera, ahora se denominamiproducto debido a
su bajo precio en comparación con otras fuentes de azúcar y la presencia de 3.7. Estudios de cocultura
minerales, compuestos orgánicos e inorgánicos. La melaza se utiliza en la
producción de alcohol, ácidos orgánicos y proteínas unicelulares. A veces, cuando dos competidores están presentes, el bioproceso se
Los componentes orgánicos e inorgánicos presentes en la melaza vuelve más exitoso. También pueden surgir problemas cuando una cepa
pueden inhibir el proceso de fermentación y, por lo tanto, deben tratarse puede comportarse de forma antagónica a la otra. Siempre se deben
con métodos adecuados para que sea adecuada para la producción de ácido realizar métodos de prueba iniciales para confirmar la coexistencia de las
cítrico. Algunos de los procedimientos comúnmente seguidos incluyen el cepas en el medio de cultivo. La presencia de cadmio, plomo, molibdeno y
tratamiento con ferrocianuro (Bebé y Saad, 1996), ácido sulfúrico, fosfato cromo en un medio que contiene glucosa puede producir ácido cítrico en
tricálcico, fosfato tricálcico con HCl, fosfato tricálcico con HCl seguido de buenas cantidades y se analizó la cinética de crecimiento de tal cepa
fraccionamiento con sephadex (Kundu, Panda, Majumdar, Guha y microbiana adoptada por metales pesados (.Angumenal y Venkappayya,
Bandyopadhyay, 1984). La melaza se volvió más eficiente mediante el 2004) La fermentación de cocultivo se experimentó con glucosa como
tratamiento con oxalato de amonio seguido de un tratamiento con fosfato sustrato utilizandoa. nígerycandida guillermondii en presencia de
de diamonio. Se encontró que la melaza tratada por este método sirve como oligoelementos. A modo de comparación, la fermentación de un solo cultivo
un mejor sustrato para producir ácido cítrico en comparación con otros también se realizó cona. nígeren presencia de los mismos oligoelementos
métodos comúnmente practicados (Angumenal y Venkappayya, 2005). El bajo idénticas condiciones experimentales. Los resultados obtenidos revelan
medio de melaza anterior en suplemento con iones metálicos selectivos que la fermentación de cultivos mixtos con
como estimulantes hizo que la fermentación del ácido cítrico fuera más a. nígeryC. guilliermondiipuede producir ácido cítrico en mayores
exitosa. cantidades que con un solo cultivo, a saberA. níger (Angumeenal et al.,
AgromiLos desechos industriales se utilizan con frecuencia como 2003a,2003b) Los cambios metabólicos ena. nígerno se ve afectado
sustratos en la fermentación como una fuente económica. Pulpa de mientras realiza la fermentación de cocultivo como se deduce del
manzana (Cuelgue y Woodams, 1984), vaina de algarrobo (Rucas, 1998), estudio de estimaciones de proteínas y lípidos.
residuos de zanahoria (Garg & Hang, 1995), cáscara de café (Shankaran y
Lonsane, 1994), mazorcas de maíz (Cuelgue y Woodams, 1998), orujo de uva 4. Conclusión
(Colgar &. Woodams, 1985), piel de kiwi (Colgar &. Woodams, 1987), kumara
(Lu, Brooks &. Maddox, 1997), residuos de naranja (Aravantinos- Zafiris, Tzia, Debido a la amplia aplicación del ácido cítrico, su producción por
Orea poulou y Thomopoulos, 1994), sirope de dátiles (Roukas & Kotzekidou, fermentación continúa siendo de interés para estudios extensos (
1997, Moataza, 2006), residuos de piña (Tran liSly 1998), extracto de plátano Berovic y Legisa, 2007;Cevrimli, Yasar y Kariptas 2010; Darouneh, Alavi,
(Sassi, Ruggeri, Specchia y Gianetto, 1991) residuos de patatas fritas (Sanat y Vosoughi, Arjmand, Seifkordi y Rajabi, 2009; Dhillon, Brar, Verma y
Korish, 2007), y la calabaza se probaron con éxito como sustratos para la Tyagi, 2011a,2011b;Hanapi, Alam y Karim, 2011;Papagianni, 2007).
formación de ácido cítrico. Se sabe que la calabaza, ya sea como sustrato Durante un período de años, se introdujeron muchos sustratos para la
único o mixto con melaza, produce buenas cantidades de ácido cítrico ( fermentación de ácido cítrico a escala piloto para permitir que la
Majumdar, Khalid, Munshi, Alam y Or-Rashidet, 2010). industria la ampliara y aumentara la producción para satisfacer la
demanda de ácido cítrico. A nivel de laboratorio, los científicos intentan
Se encontró que un desperdicio de jaca es un sustrato bueno y económico introducir nuevos sustratos y métodos y confirman su potencial con
para la fermentación de ácido cítrico.Artrcocarpus heterophyllus (Jack fruit) es un respecto a varios aspectos. Por supuesto, los sustratos de fuentes
árbol grande que crece en países tropicales y es una de las frutas comunes en el económicas pueden reducir el costo de producción, pero en términos
sur de la India. Los periantos fructíferos (bulbos), semillas y corteza constituyen el de limitar las sustancias en ellos y su eliminación, se necesita mucha
29, 12 y 59% del fruto maduro, respectivamente. La parte de la corteza incluye la atención para que el proceso sea más exitoso. Ahora se sabe que la
fibra del carpelo que sostiene la parte frutal. conversión de industrias
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