Alfonso Navarro

CUESTIONES

1. ¿Qué finalidad tiene la adición del fenol?

El fenol es un compuesto orgánico hidrofóbico. Es inmiscible con el agua y al ser orgánico solubiliza
otras biomoléculas hidrófobas (como lípidos de membrana). Desnaturaliza las proteínas, no inhibe
completamente la actividad RNasa.

Proteínas, lípidos, carbohidratos y desechos celulares se eliminan de la fase acuosa por extracción
con fenol, haciendo que precipiten y separando a los ácidos nucleicos (solubles en agua) para su
posterior estudio. Favorece la separación de la muestra en dos fases fase acuosa y la fase fenólica.

2. ¿Por qué precipita el material genético al añadir el etanol absoluto?

El alcohol deshidrata el material genético. El ADN es soluble en agua, pero insoluble en alcohol, por
lo que cuando el alcohol está presente el material genético se “aglutina” (forma partículas
macroscópicas y se hace visible) y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua, pudiéndose
recuperar posteriormente mediante centrifugación.

Además, el alcohol del sobrenadante se llevará las sales contenidas en el tampón de lisis.

3. ¿Cómo se mide cuantitativamente la concentración de DNA en disolución con la ayuda del

espectrofotómetro?

Para poder cuantificar la cantidad de material genético que se obtiene a partir de la extracción de
ácidos nucleicos de un cultivo celular se debe realizar una lectura a longitudes de onda de 260 nm,
ya que los ácidos nucleicos se absorben a esta onda.

Con esta lectura a 260 nm se podrá calcular la concentración de ácidos nucleicos presentes en la
muestra relacionando la absorbancia obtenida a esta longitud de onda con la concentración de
referencia (La concentración de DNA a A260 = 1.0 en una cuveta de 1 cm equivale a 50 mg de DNA
por ml de agua, es decir para dsDNA: 1 unidad de absorbancia a 260 nm →50 g/ml)

4. Incluid una fotografía de las bandas de DNA observadas durante la visualización con el
transiluminador ultravioleta y anotad las conclusiones a las que llegáis. Especificad en la foto
la posición en la que cargasteis vuestra muestra en el gel.
-En la primera calle podemos observar la muestra, donde aparecen bandas de diferentes
tamaños (pb) que serán utilizados como referencia. Respecto al resto de calles podemos
observar calles como la 3 y la 5 donde hay una alta concentración de ADN , aunque no de la
mayor calidad, y con restos de ARN ya que este método no discrima entre ADN y ARN, y
otras calles como la 2 o la 4 donde a pesar de que la concentración de ADN no es muy
elevada, la calidad de este si lo es.

5. ¿Por qué vemos fluorescencia en el DNA cuando lo observamos con el transiluminador?

Al prepara el gel se le añade Red Safe, es una alternativa segura al común agente intercalante
generalmenteusado en electroforesis en gel de agarosa. Este reactivo en presencia de material
genético se une a el tiñiendole. Al excitarse con la luz ultravioleta este emite fluorescencia a 537 nm.
con esa longitud de onda corresponde con el espectro de luz verde, por lo que las bandas de ADN
podrán visualizarse mediante bandas de color verde.