CUESTIONARIO

1) PARA QUE SIRVE EL TSNT

Esta solución está compuesta por Triton X100 2%, SDS 1%, NaCl 100 mM, Tris HCl
pH 8. 10mM, EDTA pH 8 1mM, se encargará de lisar los glóbulos blancos debido a
los agentes tensoactivos como el SDS y el Tritón X100, con la lisis el material
genético presente en el núcleo celular se liberará al medio, NaCl y Tris HCL son
sales que nos servirán para regular el pH de la solución junto con EDTA.

2) FUNDAMENTO DEL USO DE TRIS-EDTA PARA ALMACENAR ACIDOS

NUCLEICOS

TRIS (Hidroximetil amino metano). Es un tampón biológico, cuya función es

mantener el pH de la solución constante (pH 7.0 pH 8.0). Se prepara a pH 8.0. El
peso molecular del TRIS es 121.14 gr. / grmol. Se van a preparar 100 ml de solución
madre de tris de concentración 1M Cálculos: 100 ml x 121.14 gr. / mol x 1 mol/1000
ml = 12.114 gr. de TRIS. Se pesan 12.114 gr. de TRIS y se agregan poco a poco a
70 ml de agua bidestilada, previamente colocados en un frasco de autoclavado
limpio. Se coloca la solución en el pHmetro y se ajusta el pH a 8.0 con HCl. Luego
se completa el volumen a 100 ml. Se autoclava la solución y se guarda a 4°C.

EDTA (Ácido etilen diamino tetra acético). Es un agente quelante de iones metálicos
como Ca++ y Mg++. Inhibe la acción de las nucleasas al no haber cofactores libres
para su actividad y así protege al ADN. Se prepara a pH 8.0. El peso molecular del
EDTA es 372.24 gr. / grmol. Se van a preparar 100 ml de solución madre de EDTA
de concentración 0.5 M Cálculos: 100 ml x 372.24 gr. / mol x 0.5 mol/1000 ml =
18.612 gr. de EDTA Se pesan 18.612 gr. de EDTA y se agregan poco a poco a 70
ml de agua bidestilada, previamente colocados en un frasco autoclavado limpio. Se
coloca la solución en el pHmetro y se ajusta el pH a 8.0 con perlas de Hidróxido de
sodio. Si se pasa el pH se agrega HCl en la cámara de extracción de gases. Luego
se completa el volumen a 100 ml. Se autoclava la solución y se guarda a 4°C.
 3) DIFERENCIAS ENTRE USAR ETANOL Y ISOPROPANOL

En este proceso, el etanol hace que el ADN se deshidrate, es decir, pierda contacto
con las moléculas de agua que lo rodean, y lo aísla de la solución acuosa para
dejarlo libre de impurezas.
En el caso del ADN este es menos soluble en isopropanol por lo que al usar este
solvente precipitara antes a una menor concentración, aunque con el inconveniente
de que las ales también precipitaran al mismo tiempo. Por el contrario, si se realiza
precipitación de ADN con etanol al ser mucho mas soluble en este medio el ADN
deberá estar en una mayor concentración para que tienda a precipitar, aunque con
la ventaja de que las sales permanecerán solubles incluso a bajas temperaturas.
Se utiliza etanol cuando: se dispone de muestras de pequeño volumen, cuando se
dispone de muestras de ADN muy concentradas, o cuando se necesita almacenar
la muestra durante un largo periodo de tiempo en frio.
Se utiliza isopropanol: cuando se dispone de mayor volumen de muestra, cuando
se dispone de muestras de ADN con baja concentración y cuando se quiere acelerar
la precipitación a temperatura ambiente.

4) DIFERENCIAS ENTRE SDS Y TRITON

Triton X100: es un detergente no iónico usando para desnaturalizar membranas de

células sin desnaturalizar la proteína. Este detergente rompe los conglomerados de
proteínas para promover la actividad enzimática.

Dodecil Sulfato De Sodio (SDS): es un detergente iónico utilizado para

desnaturalizar proteínas en hibridación, purificación de ácidos nucleicos y sistemas
de buffer de electroforesis. SDS también se utiliza para disociar complejos de
proteínas de ácido nucleico en protocolos de extracción de ADN, para alterar las
membranas celulares y para preparar soluciones de prehibridación y / o hibridación.

Para preparar una solución de SDS al 10%, disuelva 100 g de SDS en 900 ml de
agua ddi. Calentar a 68 ° C para ayudar a la disolución. Ajuste el pH a 7.2 agregando
unas gotas de HCl. Ajuste el volumen total a 1 L con agua ddi, luego dispense en
alícuotas. SDS (Dodecil sulfato de sodio) Es un detergente aniónico que actúa como
agente solubilizante de proteínas y de componentes de tejidos y membranas.
 5) PARA QUE SIRVE EL FENOL EN EL PROCESO DE EXTRACCION DE
ACIDOS NUCLEICOS.

El fenol (o alternativamente cloroformo) es un desnaturalizador activo de proteínas

que suprime la solubilidad de las proteínas en la preparación y las precipita. Puesto
que el fenol y la solución salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere
centrifugar la suspensión para separar las bases, permaneciendo el DNA (y el RNA)
en la solución dentro de la fase acuosa de arriba y la proteína presente como un
precipitado concentrado en la interfase.

6) FUNDAMENTO DEL USO DEL REACTIVO SEVAG

El cloroformo isoamílico estabiliza la molécula de ADN evitando que esta se "rompa"

y precipita el ADN y extrae las proteínas que componen el ADN

7) PARA QUE SE UTILIZA EL CLORURO DE CESIO

Purificación de ADN plasmídico: Utiliza un gradiente de cloruro de cesio y el agente

intercalante bromuro de etidio para generar diferencias de densidad entre el ADN
superenrollado plasmídico (ccc) y el ADN lineal cromosómico o plasmídico circular
abierto (oc). El superenrollado acepta menos BrEt y será más denso, apareciendo
más abajo tras la centrifugación.

8) EXPLIQUE EL FUNDAMENTO DE LA PROTEINASA K

La proteinasa K: Es una enzima que sirve para romper o degradar a las proteínas
que están unidas al ADN. Es una enzima que sirve para romper/degradar a las
proteínas que están unidas al ADN, la cual digiere proteínas y remueve
contaminantes a partir de las preparaciones de ácidos nucleicos. Es
ampliamente empleada en purificación de RNA y DNA nativos de tejidos o líneas
celulares. Probado en ausencia de RNAsas y DNAsas es especialmente
apropiado para templados de PCR.
 9) EXPLIQUE EL FUNDAMENTO DE LA LISOSIMA
La lisozima es de la clase de enzimas que destruye las paredes celulares de ciertas
bacterias Gram-positivas por ruptura del enlace β (1-4) entre el ácido N-
acetilmurámico (NAM) y N-acetilglucosamina del peptidoglicano (NAG) [Figura 2],
debilitando así la pared celular. El resultado es la penetración de agua en la célula
que se hincha y acaba por estallar, un fenómeno denominado lisis.

10) MENCIONE LAS DIFERENCIAS ENTRE HACER UNA EXTRACCION DE

ADN Y ARN.

Para la extracción de ARN se utiliza una temperatura de 4-6 °C del Ph de la solución

fenol cloroformo mientras que para el ADN se usa la temperatura de 4-8.2 °C; en el
ARN se usan inhibidores de ARNsas mientras que para ADN se usan inhibidores
de ADNsas; se usa la proteinasa K para la extracción de ADN y para ARN no.

KAREN ANDREA GARCIA RUIZ

6to A.
DIAGNOSTICO MOLECULAR