Práctica No. 1. Bioseguridad.

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Proceso por seguir

Bioseguridad

Ingreso al laboratorio identificando cada una de las señales e indicaciones de bioseguridad

Disponerse a ponerse la bata, gafas, gorro, tapabocas y guantes

Desinfectar el área de trabajo

Realizar la practica teniendo presentes las indicaciones del docente encargado

Tapabocas: actúa como una barrera
protectora para evitar salpicaduras,
aerosoles, gotas grandes o rociaduras
entre la boca y la nariz
Guantes: su función es proteger las
manos de la exposición a contaminantes
actuando de barrera física
Bata: está diseñada para proteger la
ropa y la piel de las sustancias químicas
con las que se trabaja en el laboratorio
Gafas: su uso es obligatorio siempre y
cuando se esté en un laboratorio donde
los ojos puedan ser dañados, es decir,
cuando hay presencia de sustancias
químicas.
Gorro: además de proteger el cuerpo al
evitar el contacto con las bacterias que
se despendan del cabello, también
impiden la contaminación de las
superficies e instrumentos que se
manipulan durante la realización de las
practicas.

Antes llamado "reactividad", ahora se

llama "inestabilidad", esto es importante
pues algunas personas lo pueden
confundir con radiactividad.

4. Fácilmente capaz de detonar o

descomponerse explosivamente en
condiciones de temperatura y presión
normales (e.g., nitroglicerina, RDX)
3. Capaz de detonar o descomponerse
explosivamente pero requiere una
fuente de ignición, debe ser calentado
bajo confinamiento antes de la ignición,
reacciona explosivamente con agua o
detonará si recibe una descarga eléctrica
(e.g., flúor, trinitrotolueno).
2. Experimenta cambio químico violento
en condiciones de temperatura y
presión elevadas, reacciona
violentamente con agua o puede formar
mezclas explosivas con agua (e.g.,
fósforo, compuestos del potasio,
compuestos del sodio).
1. Normalmente estable, pero puede
llegar a ser inestable en condiciones de
temperatura elevada(e.g., acetileno
(etinol).
0. Normalmente estable, incluso bajo
exposición al fuego y no es reactivo con
agua (e.g., helio).
Demarca las zonas sobre las cuales
podemos pararnos al momento de
desarrollar nuestras practicas

permite trabajar con materiales tóxicos,

peligrosos para la salud y la vida, y que
se caracterizan por extraer cualquier gas
emitido por sustancias volátiles.

Permite almacenar cada uno de los

elementos teniendo en cuenta sus
características

Es el contenedor en el cual debemos

arrojar los residuos que pueden tener
algún riesgo biológico para quienes lo
manipulen
 Son elementales al momento de
presentarse alguna emergencia, el
extintor nos permitirá controlar las
alteraciones de las llamas y el botiquín
nos ayudará para prestarle los primeros
auxilios a la persona que lo requiera por
una razón determinada

Conclusiones:

 Es completamente necesario cumplir con cada una de las normas de bioseguridad

establecidas para así prevenir o disminuir los riesgos que se pueden presentar durante el
desarrollo de las prácticas de laboratorio.
 La bioseguridad es esencial en el desarrollo de las practicas de laboratorio ya gracias a esta
conservamos la integridad personal, grupal y del medio ambiente

Referencias bibliográficas

 Abad, Xavier (Junio de 2010). «Bioseguridad y biocontención: reflexiones». SEM@FORO -

Boletín Informativo de la Sociedad Española de Microbiología. Consultado el 15 de junio de
2020.

Práctica No. 3. Extracción y cuantificación espectrofotométrica de ADN

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Proceso
Extracción y cuantificación espectrofotométrica de ADN

Formar la solución de lisis mezclando 50ml de agua destilada, 1ml de jabón liquido y 2g de NaCl
en un vaso precipitado

Pese NaCl

Adicione agua destilada

Disuelva completamente

Adicione el jabón

Mezcle suavemente sin formar burbujas

Corte la fresa en trozos y la pongo en el mortero

 Macerar y agregar la solución lisis poco a poco sin formar burbujas

Agregar 50ml de solución lisis

Filtrar

Agregar 5ml de filtrado a un tubo de ensayo

Adicionar 1.5ml de zumo de piña

Mezclar suavemente

Adicione 2ml de alcohol isopropílico a -20°

Observe la formación Verifique el

No
de hebras de ADN proceso

Si

Sacar las hebras de ADN

Agregue 3ml de agua destilada

Leer el espectrómetro a una absorbancia de 260nm

Preguntas

 ¿Cuál es la función de los componentes de la solución de Lisis?

Se utiliza para romper las células y liberar sus componentes. Los componentes de la
solución de lisis incluyen un amortiguador de pH como Tris-HCL o HEPES, un
detergente que disuelve las membranas celulares para que puedan escapar sus
contenidos y agentes quelantes e inhibidores

 ¿Para qué se usa el zumo de piña, cuál es el compuesto clave y su función

durante el proceso de extracción de ADN?
El zumo de piña contiene bromelaína, una enzima capaz de hidrolizar las proteínas y
por tanto capaz de separar el ADN de las histonas. Este proceso ayuda a que el DNA se
desempaquete y es más fácil su extracción.

 Explique las diferencias de solubilidad del ADN en medio salino y alcohólico.

Ambos tienen diferentes factores alterados que hacen cambiar su ADN. Por ejemplo,
una precipitación salina afecta en algunos productos y proteína mientras que en
alcohólico afecta al sodio por medio de una carga negativa de los grupos de los
fosfatos

 ¿Qué significa la relación A260/A280 en la cuantificación de muestras de ADN?

Es una relación de absorbancia de la cantidad de ADN medida a 260 nm sobre la
cantidad de proteína media a 280 nm. Esta relación se utiliza para evaluar la pureza en
un extracto de ADN

 ¿Qué procedimientos se pueden utilizar para purificar el ADN

Existen diferentes procedimientos para purificar el ADN. En general, los protocolos de
extracción de ADN siguen aproximadamente el mismo esquema básico que consta de
los siguientes pasos:
 Lisis celular
 Eliminación de proteínas
 Eliminación de otros ácidos nucleicos (ácido ribonucleico (ARN), etc.)
 Concentración de ADN por precipitación con etanol
Los procedimientos más utilizados para la purificación de ADN son la precipitación con
etanol o isopropanol enfriado con hielo

 Consulte dos métodos de extracción de ADN

 Extracción orgánica: implica la adición e incubación en múltiples soluciones
químicas diferentes; incluyendo un paso de lisis, una extracción con
cloroformo de fenol, una precipitación con etanol y pasos de lavado
 Extracción Chelex: consiste en agregar la resina Chelex a la muestra, hervir
la solución, luego agitarla en un vórtex y centrifugarla. Los materiales
celulares se unen a las perlas de Chelex, mientras que el ADN está
disponible en el sobrenadante. no produce tanta cantidad y el ADN
producido es monocatenario, lo que significa que solo puede
usarse para análisis basados en “reacción en cadena de la
polimeras” y no para el “polimorfismo de longitud de fragmentos
de restricción”
Datos obtenidos

Adicción zumo de piña

Al realizar esta adición podemos
evidenciar el cambio de color que se va
presentando en la solución de filtrado de
la fresa

Formación de hebras de ADN

Luego de adicionar alcohol isopropílico a la
solución que tenemos con el zumo de piña
podemos evidenciar la formación de
hebras de ADN las cuales se ubican en la
parte superior del tubo de ensayo
logrando identificarse con facilidad

Análisis y resultados obtenidos

Al realizar el filtrado correspondiente a la maceración de la fresa y la adición de la solución
de lisis no se logra visualizar el objetivo de la práctica, lo que hace que las hebras de ADN
se evidencien es la adición del zumo de piña y el alcohol isopropílico, debido a que el
zumo de piña nos ayuda a separar el ADN de las histonas y el alcohol cumple la función de
precipitarlo causando de esta manera que sea fácil su identificación.
Podemos observar 5 fases, las inferiores son en una tonalidad anaranjada, la tercera se ve
de color negro, pero no es uniforme, la cuarta es de color transparente en el cual se
observan las hebras de ADN y la fase superior es una alo en forma de anillo uniforme de
color naranja.
Conclusiones

 La cantidad de ADN en una muestra se puede determinar midiendo en absorbancia

de 260nm
 El espectrómetro es aquel que nos ayuda a determinar las concentraciones de ADN
presentes en una mezcla
 La solución de lisis genera un rompimiento de células abiertas que nos permite
generar la extracción de ADN
Referencias bibliográficas
 Extracción de ácidos nucleicos | Biología molecular. Fundamentos y aplicaciones
clínicas” disponible en https://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?
bookId=1473&sectionId=102743658
 “Extracción de ADN con material cotidiano: diseño, implementación y evaluación
de una actividad práctica interdisciplinar” disponible en
https://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-
893X2019000100042
 “EXTRACCIÓN DE ADN”
https://www.researchgate.net/publication/349640863_EXTRACCION_DE_ADN