UNIVERSIDAD CUAUHTÉMOC

LICENCIATURA EN MÉDICO CIRUJANO

“2.C”
BIOLOGÍA MOLECULAR I

REPORTE DE LABORATORIO #4
“EXTRACCION Y CUANTIFICACION DE ADN A
PARTIR DE UNA MUESTRA ANIMAL”

DOCENTE:
López Portales Oscar Humberto

ALUMNO:
Alejandri Camargo Santiago
Rios Mejía Adalid Josué
Vera Ramirez Evane
Introducción
Para este punto de nuestro camino recorrido en esta carrera y llevando estas
prácticas, sabemos que todo ser vivo está formado por secuencias de ADN (ácido
desoxirribonucleico) es el material que contiene la información hereditaria en los
humanos y casi todos los demás organismos. Casi todas las células del cuerpo de
una persona tienen el mismo ADN. La mayor parte del ADN se encuentra en el
núcleo celular (o ADN nuclear), pero también se puede encontrar una pequeña
cantidad de ADN en las mitocondrias (ADN mitocondrial o ADNmt). La información
en el ADN se almacena como un código compuesto por cuatro bases químicas,
adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina (T). El ADN humano consta de unos 3
mil millones de bases, y más del 99 por ciento de esas bases son iguales en todas
las personas. El orden o secuencia de estas bases determina la información
disponible para construir y mantener un organismo, similar a la forma en que las
letras del alfabeto aparecen en un cierto orden para formar palabras y oraciones.
Hay solventes que en su mayoría son orgánicos como lo es el etanol que en una
muestra nos va a ayudar a separar el adn de todos los demás componentes. Con la
ayuda de un espectrofotómetro nos ayuda a describir la absorbancia de UV que
tiene la muestra de ADN que se recabó.

Objetivo
Realizar una correcta extracción del ADN a partir de una pieza de material biológico
(hígado), conocer cuál es el propósito de poner la muestra en el espectrofotómetro y
determinar una correcta interpretación del resultado obtenido.
Resultados
Los datos obtenidos en esta práctica están diversificados en diferentes secciones,
algo a lo que se le puso especial atención fue a los resultados que arroja el
espectrofotómetro en el cual se evaluó la concentración de DNA, este resultado se
mide con la siguiente fórmula
DNA (μg/mL)= 50xA260xD
Donde:
50= Solución de DNA de doble hebra con una concentración de 50 μg/mL debe
tener una A260 igual 1.0
A= Absorbancia de la muestra a 260 nm
D= Factor de dilución
DNA (μg/mL)= (50)(0.080)(100)
=400
El DNA total obtenido se obtuvo a partir de la siguiente fórmula:
DNA (μg)= (400 μL/mL)(1000 μL)
=400 000
La relación entre muestras A260/A280 se obtuvo de la siguiente manera:
0.080/0.056= 1.4
Lo cual nos muestra que la muestra contiene un mayor número de proteínas que de
DNA por lo que se dedujo que la muestra está contaminada parcialmente.

Figuro 1.1 Figura 1.2

Los integrantes del otro equipo (Evane Vera y Santiago Alejandri) obtuvieron los
siguientes resultados según la siguiente fórmula:
DNA (μg/mL) = 50 x A260 x D
(50)( 0.042)( 100) = 210 μg

Cálculo del total de ADN obtenido

DNA ng=n Concentración de DNA x vol. total de la muestra en mL
DNA (μg)= (210 μL/mL)(1000 μL)= 210,000 mL

Cálculo de la relación A260/A280=

0.042/0.031= 1.35

Figura 2.1 Figura 2.2

Discusión de resultados
Apartado de: EXTRACCIÓN DEL ADN
En esta primera parte de la práctica lo que podemos comparar entre ambos
resultados más que nada sería la forma en la que se realizó su extracción y el
procedimiento en general, así como la exactitud de las cantidades que se utilizaron
en el procedimiento.
Apartado de: PRECIPITACIÓN DEL ADN
Para la segunda parte de esta práctica, la principal variable o factor que podría
alterar el resultado sería la forma de vertir el etanol puro sobre la muestra, sin
embargo ambos equipos lo colocamos de manera correcta asistiendonos con un
agitador, al dejarse reposar la principal diferencia que pudo diferenciar una muestra
de otra es la capa de ADN que se formó en el recipiente, como se puede apreciar en
la figura Figura 3.1 y Figura 3.2 respectivamente.
 Figura 3.1 Figura 3.2
EQUIPO BETA EQUIPO ALFA

Apartado de: CUANTIFICACIÓN DE ADN POR ESPECTROFOTOMETRÍA UV-

VIS
A este tercer y último apartado corresponde a los resultados de la cantidad de ADN
de ambas prácticas. Para referencia, vamos a utilizar la tabla 1.1 de muestra que
indica los valores indicativos de muestra de ADN:

Tabla 1.1
En la muestra Número 1 del equipo Beta se obtuvo un resultado que sería
correspondiente a un análisis contaminado, ya que dio 1.4 y este valor ya entra
dentro de un rango contaminado.
Este primer tubo obtuvo un color transparente porque la difenilamina no tiene nada
que pintar, puesto que lo que se supone que tiñe es la desoxirribosa, la cual no se
encuentra presente en la solución.
En el tubo 2 tampoco puede teñir nada, puesto que ni siquiera tiene difenilamina
(que es lo que tiñe las sustancias), aunque en este caso sí tenga el DNA.
En el tubo 3 que es el último, existen estas 2 sustancias, por lo que este tubo si que
obtuvo un color entre azul y morado, señalando la presencia de ambas sustancias.

En el equipo Alfa, el resultado obtenido por la espectrofotometría quedaría un

resultado bastante similar al anterior, ya que quedó un valor de 1.35 el cuál también
es un resultado contaminado bajo los parámetros de medición anteriores, aquí
pudimos notar que no porque la cantidad de DNA sea abundante va a ser más pura
que las demás, simplemente hay más material del cuál se puede estudiar la
sustancia.

Conclusión:
Podemos concluir, con que la importancia de esta práctica radica en que se
aprendió a extraer el ADN para su observación y conteo, así como el método
correcto para precipitarlo, en este caso en particular podemos finalizar con un
resultado bastante satisfactorio para los estándares de la práctica, obteniendo
bastante DNA para poder estudiarlo de mejor manera.

Cuestionario
¿Qué otros tejidos de origen animal pueden usarse para la obtención de DNA?
La sangre contiene muchos tipos de células. Los más abundantes son los glóbulos
rojos, pero estos no contienen adn. Sin embargo, la sangre contiene muchas células
inmunes que patrullan el cuerpo en busca de invasores extraños. Estas células
tienen ADN que se puede extraer. Las células llamadas neutrófilos, eosinófilos,
basófilos y monocitos circulan en el cuerpo a través del torrente sanguíneo. Las
células T y las células B, o linfocitos, también están en la sangre. La saliva es otro
fluido corporal que contiene ADN. El ADN no flota libremente en la saliva, sino que
se puede extraer de los glóbulos blancos que están en la saliva.
Otro ejemplo más seguro de obtener DNA que el pasado , es La Piel Humana y
Mejillas.
La piel humana está hecha de varias capas de células , una persona arroja
aproximadamente 400,000 células de piel al día, pero eso es piel muerta en la capa
superior. La piel debajo de la capa de desprendimiento es lo que contiene el DNA.
Las células de la capa inferior se desprenden de la piel cuando algo se frota contra
ella. Estos objetos pueden ser la ropa o la comida también. Además de las células
de la piel , las células que recubren el interior de la mejilla se eliminan fácilmente
con un hisopo de algodón.

¿Porqué es mejor resuspender el DNA en TE que en agua destilada y qué

sucede si quedan restos de etanol en la muestra de DNA?
Porque el pH y las condiciones estabilizan el ADN durante más tiempo, lo que es
especialmente interesante cuando desea almacenar su ADN.

Dado que las moléculas de etanol pueden formar interacciones llamadas enlaces de
hidrógenos con moléculas de agua, por lo que al quedar restos etanol hacen que
disminuyan la cantidad de moléculas de agua disponibles para poder hidratar al
DNA.
¿De qué depende la elección del método de extracción de DNA?
Depende de algunos factores que se toman en cuenta , por ejemplo.
La cantidad de muestra de la que se dispone para extraer el DNA.
El tipo de muestra que vamos a obtener del DNA.
La pureza con la que se quiere obtener el DNA
El tiempo que nos va a demorar el método y la eficacia en dicho tiempo para la
extracción del DNA.
Un ejemplo de algunos métodos diferentes y ajenos a esta práctica puede ser el
Método del CTAB , siendo un procedimiento básico para extraer DNA pero solo en
vegetales , donde un detergente aniónico puede romper la pared celular y asi se
produce la lisis de las células.
Método salting-out Este método utiliza la precipitación inducida por sal ,
prácticamente a partir de un lisado celular se separan moléculas moléculas de
proteínas y otras moléculas que pueden contaminar el DNA , mediante una adición
de altas concentraciones de sal que hacen que disminuya la solubilidad de
moléculas orgánicas en la fase acuosa.
Investigar qué longitudes de onda específicas son utilizadas para medir otro
tipo de contaminantes del DNA
Existen longitudes de ondas que son específicas para cada tipo de contaminante del
DNA , varía la longitud de onda con el tipo de contaminante.
Por ejemplo a 230 nm absorben contaminantes como sales caotrópicas , fenoles o
carbohidratos.
260 nm y 280 nm para liberarlo de contaminantes por compuestos aromáticos como
fenoles y proteínas.
Investigar otro método para la cuantificación de DNA
Una forma de cuantificar el DNA es a través del método cuando se tintes
fluorescentes que fluorescen cuando se unen al DNA. Sería Cuantificación a través
de tintes de fluorescencia. Este tipo de métodos son más sensibles que la
absorbancia UV, especialmente cuando se esperan bajas concentraciones en las
muestras, y a menudo se utilizan para cuantificar el ADN para la secuenciación de
próxima generación.
Método de difenilamina
Otro método basado en la absorbancia para cuantificar el DNA se utiliza este
método. La difenilamina reacciona con azúcares desoxirribosos en condiciones
ácidas y forma un complejo azul que se puede cuantificar a 595 nm.
Este método a pesar de todo consume mucho tiempo y tiene baja sensibilidad , por
eso mismo no se usa mucho

Bibliografías:
¿Cuantificación de ADN? Aquí hay Cinco Métodos de Cuantificación de ADN a
Considerar. (2021, 18 diciembre). JMX Trans. Recuperado 12 de octubre de 2022,
de https://jmxtrans.org/es/cuantificaci%C3%B3n-de-adn-aqu%C3%AD-hay-cinco-m
%C3%A9todos-de-cuantificaci%C3%B3n-de-adn-a-considerar/

Cual es la funcion del etanol en la extracción de ADN? – Breve con Sejo. (2020, 28
febrero). Recuperado 12 de octubre de 2022, de https://breveconsejo.com.mx/cual-
es-la-funcion-del-etanol-en-la-extraccion-de-adn/
Los tipos de tejidos de los que se puede extraer el ADN para hacer huellas
dactilares de ADN. (2019, 19 septiembre). Ciencia de Hoy. Recuperado 12 de
octubre de 2022, de https://cienciadehoy.com/los-tipos-de-tejidos-de-los-que-se-
puede-extraer-el-adn-para-hacer-huellas-dactilares-de-adn/

“Programa de control de calidad de ácidos nucleicos. Banco Nacional de ADN

Carlos III (Universidad de Salamanca). www.bancoadn.org”

260/280 and 260/230 Ratios. NanoDrop. Technical Support Bulletin. (Available at:
https://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/
Coreresearchlabs/nanodrop.pdf). - Collaborative Design for Automated DNA Storage
That Allows for Rapid, Accurate, Large-Scale Studies. Scott Mahan, Kristin G. Ardlie,
Kevin F. Krenitsky, Gary Walsh and Graham Clough. ASSAY and Drug Development
Technologies Volume 2, Number 6, 2004.

60/280 and 260/230 Ratios. NanoDrop. Technical Support Bulletin. (Available at:
https://www.nhm.ac.uk/content/dam/nhmwww/our-science/dpts-facilities-staff/
Coreresearchlabs/nanodrop.pdf). - DNA/ RNA extraction & Qualification. Quality
Control Platform of the CIT Program (Carte d´Identité de Tumeurs). (Available at:
https://cit.ligue-cancer.net/CIT_Public/images/stories/CIT/pdf/WebSite%20CIT-
%20QC%20PF%20SaintLouis%207%20avril%2009.pdf).

Extraccion de ADN. (s. f.). sliderhade. Recuperado 12 de octubre de 2022, de

https://es.slideshare.net/naya110/extraccion-de-adn-39981381?
next_slideshow=39981381

The Significance of the 260/230 Ratio in Determining Nucleic Acid Purity. Hillary
Luebbehusen, 2010. The Significance of the 260/230 Ratio in Determining Nucleic
Acid Purity. (Available at: http://www.bcm.edu/mcfweb/?PMID=3100.

APLICACIÓN CLINICAL KEY