INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TEHUACÁN

PRÁCTICA No. 9

“EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL”

Nombre del alumno:

LOYOLA GÁLVEZ MIRNA

EVELYN Número de control:

20360404

Carrera: ING. BIOQUÍMICA

Nombre del Profesor:

VICTOR ALFREDO CANCINO REYES

Materia: BIOLOGÍA

Fecha:
21 de Mayo del 2021
 “EXTRACCIÓN DE ADN VEGETAL”

OBJETIVO 
Extraer DNA y RNA de tejidos vegetales e identificarlos como tales.

INTRODUCCIÓN

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene que
romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.
Los jabones utilizados como lava vajillas emulsionan  los lípidos de las membranas celulares
y las rompen. La sal evita la unión de las proteínas al ADN. Para aislar el ADN hay que hacer
que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol
se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver
el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en
la solución acuosa.
El proceso de extracción del DNA genómico sigue ciertas pautas para su
correcta purificación que son muy diferentes a los empleados en la purificación de proteínas,
lo que refleja las diferencias básicas en la estructura de estos dos tipos de macromoléculas. 
El primer paso en la purificación del DNA consiste en homogeneizar las células
y distar los núcleos de los cuales se extrae el DNA. El medio de extracción ordinario contiene
un detergente, como el SDS, que sirve para lisar los núcleos y liberar el DNA, hecho que
aumenta notablemente la viscosidad de la solución. El detergente inhibe también cualquier
actividad nucleasa en la preparación.
El objetivo de los pasos de purificación es separar el DNA de materiales
contaminantes, como RNA y proteínas. La desproteinización se logra en general agitando
la mezcla con un volumen de fenol. El fenol (o alternativamente cloroformo) es
un desnaturalizador activo de proteínas que suprime la solubilidad de las proteínas en la
preparación y las precipita. Puesto que el fenol y la solución salina amortiguadora no se
mezclan, solo se requiere centrifugar la suspensión para separar las bases, permaneciendo
el DNA (y el RNA) en la solución dentro de la fase acuosa de arriba y la proteína presente
como un precipitado concentrado en la interface. La fase acuosa se retira y se somete a
ciclos repetidos de agitación con fenol y centrifugación hasta agotar toda la proteína de la
solución. Añadiendo etanol frío. El etanol frío forma una capa arriba de la solución acuosa
del DNA, el cual, se aísla de las demás moléculas conforme sale de la solución.   En la
interface el RNA sale de la solución salina.  En contraste, el RNA sale de la solución
como precipitados. Luego de este primer paso de purificación, se disuelve el DNA y se trata
con ribonucleasa mediante tratamiento con una proteasa. 
Enseguida sale la proteasa por desproteinización con fenol y se vuelve a precipitar el DNA.
La electroforesis es una de las técnicas más empleada en bioquímica y biología
molecular, usada para separar y a veces purificar macromoléculas, especialmente proteínas
y ácidos nucleicos, que difieren en tamaño, carga o conformación. 
Cuando las moléculas cargadas son sometidas a un campo eléctrico, migran hacia el polo
positivo (ánodo) como es el caso de los ácidos nucleicos o negativo (cátodo) de acuerdo a
sus cargas. 
 Los fragmentos de DNA lineal migran a través del gel de agarosa con una movilidad
inversamente proporcional al log10 de su masa molecular, situándose los más pequeños
más cerca del polo positivo, adoptando una apariencia similar a un código de barras. 
Cada barra contiene un fragmento de ADN de un tamaño determinado más o menos cada 23
pares de bases
. 

Entre los diferentes factores que afectan la movilidad de los fragmentos de ADN en el
gel de agarosa que pueden optimizarse para la separación de los fragmentos está la
concentración de agarosa.
Los estudiantes extraerán ADN de bananas licuadas con agua. Una parte de esta
mezcla de banana, luego es tratada con shampoo y sal, mezclada durante 5-10 minutos, y
luego escurrida a través de un filtro de café. A lo filtrado se le agrega alcohol frío y es éste el
momento cuando el ADN de la solución de banana se precipita y se hace visible.
El detergente disuelve los lípidos (moléculas grasas) y las proteínas de la membrana
celular, rompiendo las uniones que mantienen la integridad de la misma. De esta forma se
libera el contenido celular. Luego, el detergente forma complejos con los lípidos y las
proteínas, permitiendo que los mismos sean separados del ADN por filtración. Así se libera
el ADN. La sal permite que el ADN precipite en una solución fría de alcohol y que las
cadenas de ADN no se corten.

Nota para el docente: se recomienda que el material vegetal utilizado sea con poca
coloración para facilitar la observación de los resultados, como ser, bananas o cebollas. En
este caso se hará extracción de ADN de banana. Al final de la guía práctica se sugiere una
serie de preguntas para analizar con los alumnos los resultados de la experiencia.

Materiales:

• 1 tazas o vaso de plástico (por grupo)

• Licuadora
• Una cuchara plástica para medir y mezclar
• 2 filtros de papel de café Nº 2 (conos)
• 20 ml de agua destilada
• Shampoo de color claro
• 1 banana
• Sal de mesa, con o sin Iodo
• 1 pipeta de transferencia plástica o un gotero médico
• 1 tubo de ensayo sellado que contenga 95% de etanol o 91% de alcohol isopropílico
• 1 conservadora con hielo para enfriar los tubos con alcohol
• 1 varilla de vidrio o 1 pipeta Pasteur

PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN DEL ADN

Preparar una solución de banana procesada con sal, agua destilada y shampoo
(detergente) mediante los siguientes pasos:

1. En una licuadora, mezclar una banana por taza de agua destilada (250 ml).
2. Licuar por 15-20 segundos, hasta que la solución se mezcle.
3. En una taza, preparar una solución consistente en una cucharadita de té de shampoo y
dos pizcas de sal.
4. Agregar 20 ml (4 cucharaditas) de agua destilada.
5. Disolver la sal y el shampoo revolviendo lentamente con la cuchara de plástico evitando
formar espuma.
6. .A la solución preparada en el paso 3, agregar tres cucharaditas de té de la mezcla de
banana del paso 1.
7. Mezclar la solución con la cuchara por 5-10 minutos.
8. Mientras uno de los miembros del grupo mezcla la solución de banana, otro miembro
pondrá el filtro Nº 2 de café dentro de otra taza de plástico. Doblar el borde del filtro
alrededor de la taza para que el filtro no toque el fondo de la taza.
9. Filtrar la mezcla vertiéndose dentro del filtro y dejar que la solución drene por algunos
minutos hasta que sean 5 ml aproximadamente de filtrado para testear.
10. Tomar un tubo de ensayo con alcohol frío. Para mejores resultados el alcohol debe estar
tan frío como sea posible.
11. Llenar la pipeta plástica con la solución de banana y agregarla al alcohol. El ADN no es
soluble en alcohol. Cuando el alcohol se agrega a la mezcla, los componentes, excepto el
ADN, permanecen en la solución mientras el ADN precipita en la capa de alcohol.
12. Dejar la solución reposar por 2 a 3 minutos sin mover. Es importante no batir el tubo de
ensayo. Se puede observar el ADN blanco el cual precipita en la capa de alcohol.
13. Cuando se obtienen buenos resultados, habrá suficiente ADN para levantar con una
varilla de vidrio (el ADN se enrolla a la varilla). O usando una pipeta de Pasteur que haya
sido calentada en la punta para formar un gancho, se puede recuperar (tomar) algo de ADN.
El ADN tiene la apariencia de mucus blanco y fibroso.

ESQUEMAS
A lo largo de esta práctica, a primero empezar a presentarnos los materiales a ocupar, para
despues mezclar cada uno de estos, despues de filtrar y dejarlo reposar podemos obtener la
separación de su ADN.

OBSERVACIONES

Pudimos observar en la filtración y en diversos pasos, como es que se formal y procede la

separación del ADN.
 RESULTADOS

En la práctica de la extracción de ADN vegetal, pudimos observar estos resultados, tras

mezclar el alcohol con el filtrado de la mezcla del plátano, pudiendo ver así, una interfase
formada.

CONCLUSIÓN

A lo largo, me pude dar cuenta de que cada organismo está compuesto por el ADN, así, se
podrá con filtración y diversos métodos, se produce la separación.

CUESTIONARIO

1.    ¿PORQUE EL ADN EN SOLUCIÓN SE PRECIPITA EN PRESENCIA DE UN ALCOHOL

FRÍO?
El ADN precipitado forma unas finas hebras blancas y visibles en el límite de separación de
la fase de alcohol, mientras que el resto de las sustancias permanecen disueltas.

2.    ¿CÓMO SEPARAMOS DE NUESTRA MUESTRA EL ADN DEL RNA?

Tras ser precipitada en alcohol nuestra mezcla del plátano, podemos despues de tener
nuestra interfase en donde la separamos con una pequeña varita.

3.    ¿CUÁL ES LA FUNCIÓN DEL CLOROFORMO?

Una fase acuosa superior que contiene los ácidos nucleicos y una fase orgánica que contiene
las proteínas disueltas en el fenol y los lípidos disueltos en el cloroformo.

4.    ¿CÓMO PODRÍAS CUANTIFICAR LA CANTIDAD DE ADN DE TU MUESTRA?

En el período post mortem la presencia y estabilidad del ADN en el hueso está determinada por
diferentes factores, principalmente ambientales. Esto resulta de suma importancia puesto que la
cantidad y calidad del ADN que pueda ser extraído de un hueso determina el potencial de las
pruebas de biología molecular que se pueden aplicar al mismo.

5.    ¿CUAL ES SU FUNCIÓN Y LA IMPORTANCIA DEL ADN EN LOS ORGANISMOS?

La función principal de la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de información

para construir otros componentes de las células, como las proteínas y las moléculas de
ARN.

BIBLIOGRAFIA
http://www.educa.madrid.org/web/ies.antoniogala.mostoles/dep_bio_archivos/EXTRACCION-
DE_ADN.pdf.
http://www.forosperu.net/showthread.php?t=119144&page=3