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EXTRACCION DE ADN

CUANTIFICACION DE ADN POR ESPECTROFOTOMETRIA


ELECTROFORESIS DE GEL AGAROSA

Diego Andrés Buitrago carrillo - Yepsy Katherine Jaimes Ramírez 1611202


Universidad Francisco de Paula Santander
Ingeniería Biotecnológica
Genética molecular, Grupo C
Cúcuta, Norte de Santander, Colombia
Dirigido a: Claudia Yaneth Díaz

RESUMEN
EL ADN es la molécula que contiene la información genética y configuración de los seres vivos,
esta molécula representa la identidad biológica de los individuos , por lo que la manipulación y
conocimiento de la misma es un pilar en la genética molecular, por ellos la práctica se enfoca en el
proceso de extracción de esta importante molécula. En cuanto ala La electroforesis es un método
que se usa para la separación de ciertas biomoleculas a apartir de la acción de un campo eléctrico
que interactúa con las cargas de dichas moléculas, esto y ciertas características estructurales
permiten que dichas moléculas migren hacia uno de los polos (Electrodos).Usando una muestras de
ADN obtenida en una anterior extracción y cuantificación
Palabras claves extracción.. Polos.. Densidad óptica

abstrat
DNA is the molecule that contains the genetic information and configuration of living beings, this
molecule represents the biological identity of individuals, so the manipulation and knowledge of it
is a pillar in molecular genetics, for them the practice is focuses on the extraction process of this
important molecule The electro foresis is a method used for the separation of certain biomolecules
from the action of an electric field that interacts with the charges of these molecules, this and certain
structural characteristics allow these molecules migrate towards one of the poles (Electrodes).
Using a DNA sample obtained in a previous extraction and quantification
Keywords extraction .. poles .. optical density
INTRODUCCION utilizada y la que realizaremos es la
Espectrofotometría. La espectrofotometría es el
Uno de los más importantes aportes a la biología ha
método de análisis óptico más usado hoy día, las
sido el reconocimiento del ADN como "la molécula
ventajas sobre otros métodos de laboratorio diversas;
de la vida". El estudio de sus propiedades
son rápidas, versátiles y fáciles de usar. La
fisicoquímicas y biológicas ha desarrollado, en
espectrofotometría es usada para identificar
menos de 50 años, un enfoque totalmente novedoso
compuestos por su espectro de absorción y conocer
en lo referente al origen, flujo y almacenamiento de
la concentración de un material o sustancia, esto
la información genética en todo ser vivo. Debido a
último nos permite conocer la concentración de
que en el ADN se encuentran cifradas las
compuestos, seguir el curso de reacciones químicas
instrucciones que definen las características propias
y enzimáticas así como determinar enzima y
de cada organismo, diversas tecnologías y sistemas
proteínas incluso ácidos nucleicos.
de análisis se han desarrollado para la
caracterización de esta molécula.) (Rocha P.) Como ya sabemos un espectrofotómetro es un
equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz
La extracción consiste en el aislamiento y
que pasa por medio de una longitud de onda
purificación de moléculas de ADN y se basa en las
específica. La cantidad de luz absorbida por un
características fisicoquímicas de la molécula. El
medio es proporcional a la concentración del soluto
ADN Está constituido por dos cadenas de
presente, es entonces así que la concentración de un
nucleótidos unidas entre sí formando una doble
soluto colorido en solución puede ser determinada
hélice. Los nucleótidos están integrados por un
en el laboratorio mediante la medición de su
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base
absorción de luz a una longitud de onda específica.
nitrogenada (adenina, guanina, timina o citosina).
Las muestras en estos equipos se utilizan en estado
Múltiples factores parecen incidir en la calidad
líquido y se colocan en el compartimiento de las
molecular (calidad y cantidad de ADN extraíble
muestras de celdas transparentes de diferentes
sometible a análisis moleculares) de las muestras
tamaños y materiales. La espectrofotometría
parafinadas, como el fijador (naturaleza,
UV/Visible nos permite confirmar que contamos con
concentración, temperatura, pH), tiempo de fijación,
cantidad suficiente de ácidos nucleícos (DNA/RNA)
tamaño del tejido fijado y edad del bloque (Chan
de calidad adecuada antes de llevar a cabo ensayos
P.)]
de PCR cuantitativa en tiempo real (QRTPCR),
.La calidad y cantidad del material genético extraído análisis de SNPS (Polimorfismos de nucleótido
destacan como los Factores limitantes para realizar único) o la secuenciación automática de muestras de
pruebas Moleculares a partir de este material. Ante DNA de plásmidos, cósmidos, productos de PCR.
esto, la eficiencia de los procedimientos de La principal ventaja de trabajar con el
extracción se ha convertido en un punto crítico para espectrofotómetro NanoDrop ND1000 es que la
el éxito de la aplicación de las pruebas de medida se lleva a cabo a partir de 1 ó 1,5 µl de
extracción.(Arce G.) muestra sin ayuda de ningún tipo de cubeta ya que la
muestra se pipetea directamente sobre la superficie
Este ADN extraído puede utilizarse en pruebas de medida. El rango de medida para muestras de
forenses, clonación de genes, identificar desordenes DNA es de 2-3700 ng/µl y para RNA de 2-3000
genéticas o mutaciones, pruebas de paternidad, ng/µl
detectar agentes patogénicos, identificar
características, etc.
La electroforesis es un método analítico –
semipreparativo, en el que se separan biomoléculas,
Una vez obtenido tanto el ADN como el ARN se en dependencia entre otros factores de su carga y
procede a evaluar su cantidad como su calidad, para bajo la acción de un campo eléctrico, La popularidad
esto utilizamos una serie de técnicas, pero la más de este creció rápidamente y se logró un aumento de
la resolución (Gracia H. 2015).La electroforesis en PROCEDIMIENTO
gel de agarosa es de las más utilizadas para analizar
y caracterizar ácidos nucleicos de distintas
procedencias. (López M. et.2014)
PROCEDIMIENTO EXTRACCIÓN
Existen muchos tipos de electroforesis, que se
engloban en dos categorías fundamentales:
Electroforesis de frente móvil y Electroforesis de
zona. Actualmente, sólo se utiliza la electroforesis
de zona, en la cual la muestra se desplaza sobre un
soporte sólido, Como papel de filtro, celulosa o gel
(Agarosa, acrilamida...) y los componentes de la De la muestra vegetal
Llevar a vortex 5 Guardar a 0°C por 10
macerar con buffer
muestra migran en forma de Pequeñas bandas, de extracción vegetal
segundos minutos
también llamadas zonas. La electroforesis en gel es
Una técnica muy utilizada para separar moléculas o
fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos. Los
materiales más comunes para separar moléculas de
El sobrenadante
ácidos nucleicos son polímeros como la Agregar isopropanol Centrifugar a 13.000
pasarlo a otro
1:1 y mezclar rpm por 10 minutos
microtubo
poliacrilamida o la agarosa. (Padilla Carmen 2012)

El gel de agarosa es la manera más efectiva de


separar fragmentos de ácido desoxirribo-nucleico,
sus siglas (DNA, deoxyribonucleic acid).El tamaño Guardar a 0°C por 5 Centrifugar a 13000 Descartar el
de los poros de la matriz del gel depende de la minutos rpm por 5 minutos sobrenadante

concentración de agarosa utilizada y la


concentración de agarosa es inversamente
proporcional al tamaño del poro obtenido; esto es, a
mayor concentración, menor tamaño de los poros, y
Descartar el Centrifugar a 13000 Agregar 500µl de
viceversa, si los poros son pequeños la migración del sobrenadante rpm por 5 minutos etanol al 70%
ácido nucleico es más lenta. (Lopez de la mora D.
2016 )

En biología molecular, la mayoría de los estudios


Dejar secar a
básicos y aplicados requieren el uso de la temperatura Agregar 50µl de TE
electroforesis; sin embargo, este procedimiento ambiente

presenta variaciones de acuerdo al tipo de estudio


que se piensa ejecutar. (Llanos L. 2016)
Se añade buffer TBE Se deja en la
Se pesa 0.28 g de
1x en un matraz (40 plancha de
agarosa
ml) calentamiento

Se agita
Añadir buffer de Se deja que se
rigurosamente Se
electroforesis hasta solidifique por 30
sirve en la bandeja y
cubrir min
Se colocan los peine

Colocar el gel sobre


Se añade la muestra
un transiluminador
preparada en los
y encender la
pocillos
lámpara de luz UV

RESULTADOS

Pi 1 Pi 2
DISCUCIONES
572,8 ng/µl 948,3 ng/µl

260nm 11.45 18.96


572,8
280nm 7.280 10.43 = 𝟎, 𝟔𝟎𝟒ng/µl
948,3

A260/28 1.57 1.82


0 1.57+1.82
PROMEDIO: = 1,695
2
A280/23 0.65 0.88
0 A280/230(PROM) = 1,695
ERROR = |Xi-PROMEDIO|
|X(1)-PROMEDIO| = |1,58-1,695|= 0.125
|X(2)-PROMEDIO| = |1.82-1,695|= 0,125

∑ 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 =0.125+0.125= 0,25


0,25
ERROR PROMEDIO= = ± 0, 125
2
∑ 𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 = ± 0, 125 casos podemos considerar que las muestras
obtenidas no son muestras puras pero estando
A280/230(PROM) =1,695 ± 0, 125 muy cerca del rango considerado puro.
El error correspondiente para el promedio de
los datos obtenidos fue ± 0, 125 que equivale
RELACION MANUAL a un 12,5% siendo un error bastante
11.45
considerable y que no favorece los datos ya
PI1= 7.280 = 𝟏. 𝟓𝟕 evaluados

18.96
CUESTIONARIO
PI2= 10.43 = 1.81
1.Que función cumple el buffer de carga y otros
colorantes se utilizan como buffers de carga?
RTA/: Es un buffer contiene sucrosa o glicerol,
lo cual da peso a la muestrapara que el ADN se
Las semillas de avichuela utilizadas en la
precipite al fondo de los pozos de siembra y
extracion presento una nuena consistencia en el
loscolorantes. Su función es ayudar a conducir
proceso de maceracion
corriente y controlar el pH
Después del primer procedimiento de
centrifugación de los viales al retirar los COLORANTES QUE UTILIZAN COMO
sobrenadantes con el micro pipetas, no se BUFFERS DE CARGA
presentaron levantamientos del precipitado.
Preparación de Buffer de Xylene Cyanol 6x
Los grupos fosfatos del ADN son los que les (Migración nominal 4 kbp)
confieren su carga negativa y por tanto son
atraídos hacia el polo positivo de la cámara • 25 mg de Xylene Cyanol
de electroforesis. La relación del peso • 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4
molecular y el tamaño de la molécula con el grs de Sucrosa
tamaño de los posos del gel agarosa
establecen una relación de velocidad donde a • Aforar a 10 mL con dH20
mayor peso y tamaño de la molécula menor
distancia recorrida por el tiempo. El agente Preparación de Buffer de Azul de Bromofenol
intercalante cumple la función de poder 6x (Migración nominal 300 bp)
observar el movimiento de estas moléculas • 25 mg de Azul de Bromofenol
(Bandas) de esta relación)
Para el ADN doble hebra en soluciones de • 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4
alta pureza se espera A260/A280 ≥1.8, y para grs de Sucrosa
ARN, A260/A280 ≥2.0 según Berenice P. et
al. 2016. Los resultados Para la prueba • Aforar a 10 mL con dH20
realizada con las Muestras de ADN por
Preparación de Buffer de Naranja G 6x
nanodrop dieron una relación A260/A280=
(Migración nominal 50 bp)
1,57 para la primera muestra y A260/A280=
1.82 para la segunda. Si promediamos estos • Mezcle 18 mL de Glicerol grado ACS con 40
dos valores con su respectiva error seria mL de agua destilada.
1,695 ± 0, 125. Para un rango de OD 16-1,8
Se considera una muestra pura, en estos • Agregue 60 mg de Naranje G y afore a 50 mL.
• Homogeneice la mezcla con vortex. convencional y la electroforesis capilar. La
primera se lleva a cabo sobre papel o sobre un
Preparación de Buffer Mixto 6x (Azul de
gel, en los que se aplica la muestra
Bromofenol y Xylene Cyanol)
directamente. La disolución tampón, que será el
• 25 mg de Azul de Bromofenol medio conductivo, cubre la capa de papel o de
gel. Seguidamente se aplica el potencial de
• 25 mg de Xylene Cyanol corriente continua a través de la placa. Cuando
• 3 mL de Glicerol o 1.5 grs de Ficoll-400 o 4 se considera que se han completado las
grs de Sucrosa separaciones se interrumpe el paso de la
corriente y, si es necesario, las muestras se tiñen
• Aforar a 10 mL con dH20 para visualizarlas. 1.1 Electroforesis de frente
2¿ Que otras macromoléculas se pueden separar móvil o libre 1.2. Electroforesis de zona:
por electroforesis en gel? • Electroforesis en papel
RTA/: La electroforesis en gel es una técnica • Electroforesis en gel
utilizada para separar fragmentos de ADN (u
otras macromoléculas, como ARN y proteínas) Existe una gran variedad de tipos de
por su tamaño y carga. La electroforesis electroforesis en gel, que se pueden agrupar en
consiste en aplicar una corriente a través de un dos categorías: a) Electroforesis en gel en una
gel que contiene las moléculas de interés. Con dimensión (continuo o discontinuo)
base en su tamaño y carga, las moléculas se ○ Electroforesis en geles de poliacrilamida
desplazarán por el gel en diferentes direcciones (PAGE)
o a distintas velocidades, con lo que se separan
unas de otras. ○ PAGE en condiciones desnaturalizante

Todas las moléculas de ADN tienen la misma ○ PAGE en condiciones no desnaturalizantes


cantidad de carga por masa. Debido a esto, la
○ SDS
electroforesis en gel separa los fragmentos de
ADN únicamente por su tamaño. La – PAGE
electroforesis nos permite ver cuántos
○Isoelectroenfoque
fragmentos diferentes de ADN están presentes
en una muestra y cuán grandes son unos con ○ Electroforesis en campos pulsantes b)
respecto a otros. También podemos determinar Electroforesis en gel en dos dimensiones
el tamaño absoluto de un fragmento de ADN (bidimensional)
examinándolo junto a una "escala" estándar de
fragmentos de tamaño conocido. 4.Que tipo de marcadores moleculares existen y
son de interés?
3.Consulte los tipos de electroforesis que
existen y sus aplicaciones? RTA/: Marcadores moleculares del tipo
pretranscripción-traducción
RTA/:
Los marcadores moleculares de tipo ADN, son
1. Tipos de electroforesis Existen aquellos capaces de detectar el polimorfismo
principalmente dos métodos electroforéticos genético directamente a nivel de DNA. En este
ampliamente utilizados: la electroforesis grupo se encuentran los RFLP (Fragmentos
Polimórficos de Restricción), RAPD (DNA su uso en la identificación de variedades, la
Polimórfico Amplificado al Azar), AFLP protección de los derechos del mejorador y las
(Polimorfismo de Longitud de Fragmentos determinaciones de parentesco. La segunda área
Amplificados), entre otros y ocupan un peldaño de aplicación, está basada en el uso de éstos
superior en la escala evolutiva de los como marcadores genéticos para identificar y
marcadores genéticos, por las nuevas mapear particularmente aquellos genes
perspectivas que brindan para identificar y involucrados directamente en la determinación
mapear genes útiles, que pueden ser de caracteres cuantitativos, y el monitoreo de
posteriormente incorporados y expresados en el estos loci durante los programas de introgresión
genoma vegetal (Ferreira y Grattapaglia, 1996). y selección (Iglesias y Rojas, 1992).

RFLP (Restriction Fragment Lenght RAPD (Ramdom amplified polymorphic DNA)


Polimorphic)
En 1990 dos grupos de investigadores
Se entiende por RFLP el polimorfismo de los desarrollaron prácticamente al unísono una
fragmentos de restricción, obtenidos por el corte tecnología basada en la tecnología de la
con una endonucleasa en la cadena doble del reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En
ADN, acoplado en el caso de ADN genómico esencia la idea consistió en utilizar un cebador
eucariótico, por hibridación con sondas de corto y de secuencia arbitraria, que elimina la
secuencias homólogas de copia única (Botstein necesidad de conocimiento previo de la
y col., 1980; Beckmann y Soller, 1986). secuencia. Estos dos grupos denominaron de
forma diferente esta técnica: AP-PCR
(Arbitrarily Primed Polymerase Chain Reaction
El empleo de los RFLP permite detectar o reacción de la polimerasa con cebadores
variaciones producidas por procesos como las arbitrarios) y RAPD (Ramdom Amplified
deleciones, inserciones, o alteraciones en la Polymorphic DNA o ADN polimórfico
secuencia diana de las endonucleasas de amplificado al azar) desarrollada por Williams y
restricción (siendo esta su base genética), tanto colaboradores (1990).
en poblaciones de la misma especie como entre
diferentes especies, lo cual resulta ventajoso
atendiendo a que muy pocas variaciones son Posteriormente Caetano-Anolles y
expresadas en el fenotipo, mientras que muchas colaboradores (1991) pusieron a punto otra
otras resultan silentes (Iglesias y Rojas, 1992). variante que denominaron DAF (DNA Finger
Printing o amplificación de huellas de DNA).
Actualmente se ha propuesto designar todas
De acuerdo con Beckmann y Soller (1986), se estas tecnologías como MAAP (Multiple
pueden distinguir dos campos principales de Arbitrary Amplicon Profiling).
aplicación de los RFLP en el mejoramiento de
La naturaleza molecular del polimorfismo
las plantas. El primero está basado en la
RAPD no es enteramente conocida. Ferreira y
utilización de los mismos como marcador
Grattapaglia (1996), basados en evidencias
genético para determinar las relaciones
experimentales, señalan que diferencias de
genéticas, incluyendo aspectos esenciales como
apenas un par de bases (mutaciones puntuales)
son suficientes para causar una “no para la amplificación de los distintos segmentos
complementariedad” del cebador con el sitio de (Caetano-Anolles y col., 1991).
iniciación y así impedir la amplificación de un
segmento. Otras fuentes de polimorfismo
pueden incluir deleciones o inserciones en los Estos marcadores han encontrado un amplio uso
sitios de iniciación, que los coloque a una en muchas aplicaciones de la biología
distancia superior a lo permisible y así impedir molecular, especialmente en plantas,
la amplificación de un segmento (Tingey y Del destacándose por la alta identificación de
Tufo, 1993). genotipos y evaluación del germoplasma que
permiten (Paterson y col., 1991).
El polimorfismo genético detectado con este
marcador es binario lo que hace que la 5.¿El voltaje sugerido para la electroforesis en
naturaleza de la técnica RAPD sea dominante, gel agarosa es de 1 a 5v/cm explique a que se
los individuos heterocigóticos no pueden ser refiere esta relación?
diferenciadas directamente de los
homocigóticos, esta característica constituye RTA/: El voltaje recomendado es 1-5 votl/cm
una de sus principales limitaciones (distancia entre el ánodo y el cátodo, no
determinando un bajo contenido de información longitud del gel) en electroforesis . Cuando el
genética por locus (Williams y col., 1990). Sin voltaje es demasiado bajo la movilidad de las
embargo, las evidencias existentes, indican que bandas se reduce, y las bandas se ensanchan
los loci de los marcadores RAPD están debido a la difusión. Cuando el voltaje es
distribuidos al azar a lo largo del genoma, lo demasiado alto disminuye la resolución, debido
que permite detectar una gran cantidad de principalmente al sobrecalentamiento del gel.
polimorfismo, incluso en regiones de DNA La concentración apropiada en cada caso
repetitivo (Rojas y col.,1994 ). depende del tipo de agarosa y del tamaño de los
fragmentos que se quieren separar. Como regla
general hay que tener en cuenta que, a mayor
AFLP (Amplified Fragment Length concentración menor es el tamaño de los
Polymorphism) fragmentos que se separan
La técnica del polimorfismo de longitud de 6.¿Que ptros intercalentes se utilizan para
fragmentos amplificados, se considera una remplazar el bromuro de etidio y que ventajas y
técnica intermedia entre RFLP y RAPD, pues desventajas tienen?
involucra una digestión del DNA con enzimas
de restricción y la amplificación de los RTA/:
fragmentos generados mediante un PCR TRIS: Es el nombre común de tris(hidroximetil)
específico. Los productos amplificados son aminometano. Se trata de un compuesto muy
usualmente separados sobre un gel de utilizado en el laboratorio para preparar
secuenciación y pueden ser revelados después disoluciones tampón; el grupo ácido-base que
por radiografía o fluorescencia. El polimorfismo ejerce el tamponamiento es el amino. Se
creado será el resultado de cambios en los sitios comercializa en sus formas básica ("Tris base")
de corte de las endonucleasas y de la variación y ácida ("Tris hidrocloruro"), aunque la primera
en número y longitud del amplicon seleccionado es la de uso más común.
EDTA: Acrónimo de EthyleneDiamine 7¿ Investigue que otros métodos se utilizan en
TetraAcetic acid, ácido etilendiamino la actualidad para realizar en la actualidad para
tetraacético (a veces AEDT en español). En sus realizar las cuantificaciones de cidos nucleicos?
formas desprotonadas (2− y 4−), es un conocido
RTA/: De todos los métodos históricos de
agente quelante de cationes divalentes, en
secuenciación de ácidos nucleicos diseñados por
especial Ca2+ y Mg2+.
Sanger, el método por terminadores dideoxi es
Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por el más exitoso (Sanger, 1988). Este método usa
la mayoría de nucleasas, su secuestro por el nucleótidos modificados con la ausencia del
EDTA evita la degradación del DNA durante la extremo 3'OH, grupo esencial para la
preparación y la electroforesis.En la polimerización por la ADN Polimerasa (figura
electroforesis, es el agente tamponante que 2A). De esta forma, cuando se incorpora un
mantiene el pH. Se incluye tanto en el gel como dideoxinucleótido, queda un trozo trunco de
en el tampón de cubeta. ADN que puede ser separado
electroforéticamente (Sanger et al., 1977). Si
SDS: El dodecilsulfato sódico (Sodium Dodecyl
cada uno de los cuatro monómeros de ADN (los
Sulphate, SDS, laurilsulfato sódico) es un
nucleótidos adenina, guanina, citosina y timina)
detergente aniónico que se une a las proteínas,
se marca con una molécula fluorescente
desnaturalizándolas en una conformación
diferente, se puede determinar rápidamente el
extendida recubierta de moléculas de SDS.
orden de los nucleótidos. La secuenciación con
Como consecuencia, el tamaño de la molécula
el método dideoxi se provee usualmente en
de proteína es directamente proporcional a su
centrales de secuenciación a muy bajo costo. La
longitud en aminoácidos y su carga queda
secuenciación dideoxi acoplada a métodos de
enmascarada por la mayor carga del SDS que la
reconstrucción computacional (Shotgun) ha sido
recubre, que es también proporcional a la
fundamental en la secuenciación de los genomas
longitud. Por lo tanto, la movilidad
modelo de humano, animales y plantas
electroforética de la proteína depende
(Galperin y Koonin, 2010).
exclusivamente de su masa molecular.
8.¿Que es y para que sirve el nanodrop el
En la electroforesis SDS-PAGE se usa (en el
fluorimetro y el fluorometro?
tampón de ruptura o de carga) para
desnaturalizar las proteínas de la muestra antes RTA/: NANODROP
de aplicar ésta y como componente del gel para
Este equipo permite realizar medidas de
mantenerlas desplegadas durante la
espectrofotometría en un amplio rango de
electroforesis.
longitudes de onda (220-750 nm) con gran
GLISEROL: El glicerol (glicerina) se utiliza
exactitud y reproducibilidad, sin necesidadde
como agente denso en la composición del
emplear cubetas. Tan sólo requiere un volumen
tampón de carga. La muestra + tampón de carga
de muestra de 1-2 μl y gracias a supequeño
se deopsita al fondo del pocillo y no difunde por
tamaño y fácil manejo permite medir un gran
el tampón que llena la cubeta y cubre el gel. De
número de muestras en pocotiempo.Su
ese modo no se pierde y se mantiene
funcionamiento se basa en el empleo de un
concentrada.
sistema de retención de muestra que aprovecha
la tensión superficial para formar un puente de
líquido entre el pedestalinferior y un pedestal
superior. En los espectrofotómetros NanoDrop centrifugo 3 veces dando un aproximado de 20
el pedestal superior es el extremo de una fibra minutos en total.
óptica conectada a una fuente de emisión de La muestra de ADN presenta una relación de
Xenon. densidad óptica mayor pero muy cerca a a la
FLUORIMETRO indicada de (1,6-1,8) para ser considerada pura,
por lo tanto la muestra de ADN obtenidas están
Un fluorímetro es un dispositivo de laboratorio muy cerca de ser puras. La cuantificación de
utilizado para medir los parámetros de la ADN realizada muestra que ambas muestras
fluorescencia: su intensidad y la distribución de obtenidas en la anterior extracción son
longitudes de onda del espectro de emisión relativamente viable para su posterior análisis
después de la excitación por un cierto espectro en otras pruebas, auque pudiendo tener mejores
de luz.1 Estos parámetros se utilizan para resultado con muestras mas puras. Pudiendo
identificar la presencia y la cantidad de ciertas mejorar en la preparación de la muestra
moléculas específicas en un medio. Los
fluorímetros modernos son capaces de detectar
concentraciones de moléculas fluorescentes tan El software utilizado usa datos precisos al
bajas como 1 parte por billón. momento de arrojar os datos de la absorbancia y
El análisis mediante la fluorescencia puede ser de la relación de ambas frecuencias de luz, al
varios órdenes de magnitud más sensible que momento de hacer el cálculo dela relación
otras técnicas. Sus campos de aplicación manualmente se presenta una pequeña y
incluyen química, bioquímica, medicina y despreciable diferencias debido a que el
vigilancia del medio ambiente. Por ejemplo, se software maneja cifras decimales más precisas.
utiliza para medir la fluorescencia de la clorofila
y así investigar la fisiología vegetal
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Departamento de Bioquímica y Biología
Molecular, Campus Universitario de
Rabanales, Ochoa, 14071-Córdoba ,
Recuperado de :
https://www.uco.es/dptos/bioquimicabiol
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