EXTRACCÓN DE ACIDOS NUCLEICOS DE VEGETALES.

SÁNCHEZ AYA Lina Fernanda1 OCHOA GUEVARA Karla Fransheska 2,

Laboratorio de Bioquímica, Departamento de Biología, Facultad de ciencias básicas,
Universidad de Pamplona.

En este informe se analizara el procedimiento general de extracción de ácidos nucleicos llevado a

cabo de la mano con el docente, el cual consiste en la lisis celular (por medio de una mezcla de
detergente /sal), inactivación de las nucleasas intracelulares y en separación de los ácidos nucleicos
de los demás componentes celulares. Finalizando con la precipitación de los ácidos nucleicos por
medio de la acción del alcohol (etanol).La lisis celular depende en gran medida del tipo de muestra
a tratar.
Palabras clave: extracción, lisis celular, inactivación, separación, precipitación, ETANOL.
ABSTRACT.
In this report we will analyze the general procedure of extraction of nucleic acids carried out by hand
with the teacher, which consists of cell lysis (by means of a mixture of detergent / salt), inactivation
of intracellular nucleases and in separation of the nucleic acids of the other cellular components.
Finishing with the precipitation of nucleic acids through the action of alcohol (ethanol). Cell lysis
depends largely on the type of sample to be treated.
Key words: extraction, cell lysis, inactivation, separation, precipitation, ETHANOL.

INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son macromoléculas constituidas por la unión mediante enlaces químicos de
unidades menores llamadas nucleótidos. Los ácidos nucleicos son compuestos de elevado peso
molecular que están presentes en el núcleo de las células (también en determinados orgánulos como
mitocondrias y cloroplastos). Son las moléculas encargadas de almacenar, transmitir y expresar la
información genética. Existen dos tipos ADN (ácido desoxirribonucleico) y ARN (ácido
ribonucleico).(1)
Los nucleótidos del DNA forman una hélice constituida por dos hebras antiparalelas que se mantienen
unidas mediante puentes de hidrógeno. Para empaquetarse, el DNA se une a nucleoproteínas,
denominadas histonas; y cuando se quieren separar estos componentes, se aplica tratamiento con
ácidos o con concentraciones altas de sales. (2)
Los nucleótidos del RNA se encuentran formados por el azúcar ribosa, unida mediante enlace
glucosídico a una de cuatro bases nitrogenadas (adenina, guanina, uracilo o citocina), formando
moléculas de una sola cadena. (2)
 Estructura de los nucleótidos de los ácidos nucleicos

De acuerdo con el tipo de célula en estudio, para aislar los ácidos nucleicos es necesario romper la
membrana y la pared celular mediante métodos físicos, químicos o enzimáticos, para liberar las
moléculas de DNA al medio extracelular. A partir de esto, la purificación de los ácidos nucleicos se
realiza mediante la extracción de las proteínas y los lípidos con solventes orgánicos, y su
recuperación, en un paso posterior, al precipitarlos con alcohol (isopropanol o etanol). (3)

METODOLOGÍA
La preparación de la solución lisis se llevo a cabo usando la relación entre muestra/solución de lisis:
1 cebolla/100 ml de solución de lisis; 1 tomate/100 ml de solución de lisis; 1 banano/200 ml de
solución de lisis; 3-4 fresas maduras/50 ml de solución de lisis; rama de cilantro/50 ml de solución
de lisis. Por lo que para vegetales y frutas que necesitaban 50 ml de solución lisis, se disolvió 5ml de
jabón líquido con 45ml de agua destilada , luego se agregó 5g de NaCl (sal) y se mezcló todo con
ayuda de una varilla de vidrio. . Por lo que para vegetales y frutas que necesitaban 50 ml de solución
lisis, se disolvió 5ml de jabón líquido con 45ml de agua destilada , luego se agregó 5g de NaCl (sal)
y se mezcló todo con ayuda de una varilla de vidrio. Para vegetales y frutas que necesitaban 100 ml
de solución lisis, se disolvió 10ml de jabón líquido con 90ml de agua destilada , luego se agregó 10g
de NaCl (sal) y se mezcló. Y por último, para vegetales y frutas que necesitaban 200 ml de solución
lisis, se disolvió 20ml de jabón líquido con 45ml de agua destilada , luego se agregó 20g de NaCl
(sal).
Luego de esto con la ayuda de un mortero, se maceraron cada uno de los vegetales y frutas con la
cantidad específica de solución lisis hasta homogenizar, seguidamente con la ayuda de una gasa se
filtró en un vaso de precipitado hasta retirar todos los restos macroscópicos y sólidos. Ya obtenido el
filtrado de cada vegetal y fruta se midieron 10ml de este en una probeta y 10 ml en una caja de Petri
a cada extracto distinto obtenido, seguidamente, en una relación 1 filtrado/ 1 etanol, se añadió 10 ml
de etanol frío al 99% tanto a la probeta como a la caja petri y se dejó reposar un tiempo hasta que
fuera visibles las hembras de los ácidos nucleicos.
RESULTADOS.

Imagen 1. Extracción ADN Y ARN de Tomate.

Imagen 2. Extracción ADN Y ARN de Fresa.

Imagen 3. Extracción de ADN Y ARN de Cilantro.

Imagen 4. Extracción de ADN Y ARN de Banano.

 Imagen 5. Extracción de ADN Y ARN de Cebolla.

ANALISIS DE RESULTADOS.
Los ingredientes caseros de la solucion lisis preparada cumplen una funcion especifica en la ayuda
de la extraccion de acidos nucleicos,ya que un principio el DNA se encuentra en el interior del núcleo
de las células eucariotas rodeado de proteínas (histonas) que lo mantienen unido y compactado, por
lo que hay que aislarlo deshaciendo la membrana plasmática y la envoltura nuclear. Pero para que
esto suceda hay que incrementar el área superficial del vegetal que ayuda a hacer la superfície de la
membrana más fácil de disolver y una mejor absorción de las solucion lisis. Como las membranas de
las células están formadas por dos capas de lípidos con proteínas transmembrana a través de estas que
la solucion lisis contega detergente liquido ayuda a romper la bicapa de fosfolípidos de las membranas
plasmáticas y la envoltura nuclear,ya que este rompe las uniones que mantienen la membrana junta.
A su vez, la estructura de los lípidos es similar a la del detergente y eso hace que se combinen,
formando una burbuja de detergente y lípidos. Luego de esto cuando se realizo la filtracion solo se
buscaba eliminar restos de vegetales inservibles para una mejor observacion de los acidos. A pesar
de que la membrana plasmatica ya se haya roto, las moléculas de DNA aun están rodeadas de
proteínas del tipo histonas, por lo que era necesario eliminarlas con enzimas proteoliticas, como la
bromelina, una enzima que contiene el zumo de piña capaz de hidrolizar las proteinas, separando las
histonas del DNA, permitiendo el desempacamiento del mismo, esta separacion tambien colabora la
sal agregada en la solucion lisis puesto que disminuye la solubilidad de las proteinas cubriendo los
terminales fosfatos negativos dandole vía libre al alcohol el cual en este proceso hace que el ADN
pierda contactocon las moleculas de agua que lo rodean y lo aisla de la solucion acuosa. Para que se
lograra observar los acidos nucleicos, se tuvo que tener en cuenta la diferencia de densidades y las
polaridades de las moleculas que se encontraban en el medio, como se sabe el DNA es una molécula
polar, pero la reacción con el etanol a muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en
el etanol formándose un precipitado justo entre la capa con etanol líquido y la capa con el extracto,
entonces si el DNA es el único componente de la solución que no es soluble en el etanol, este se hace
visible cuando las diferentes cadenas se van aglutinando entre sí al precipitar debido a la acción de
fuerzas físicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso flota sobre la capa del
extracto, ademas que la sal agregada en la solución lisis hace los acidos nucleicos insolubles por lo
que precipitan.

CONCLUSIÓN.
En todas las extracciones realizadas se evidencio una respuesta satisfactoria en la metodología
utilizada ya que en todos los experimentos el precipitado de acidos nucleicos fue visible, aunque en
algunos se podian ver mejor como en el caso del cilantro, pero cabe resaltar que no se puede hablar
de ADN puro ya que esta mezclado con ARN,debido a que la práctica solo se baso en extraccion de
los acidos nucleicos sin el uso de las RNAasas o DNAasas para su respectivo aislamiento, ademas de
esto se logró comprender como funcionaba o que papel desempeñaba cada ingrediente usado y acción
realizada para el desempacamiento de los acidos nucleicos.

BIBLIOGRAFÍA.
(1)Murray W. Nabors Introducción a la Botánica. 2005. Editorial Pearson.
(2)Bioquímica vegetal básica (4). Ácidos nucleicos (2012) Recuperado de:
http://fisiolvegetal.blogspot.com/2012/08/bioquimica-vegetal-basica-4-acidos.html
(3) Malajovich, M. (n. d.) Extracción de ADN. Biotecnología-Enseñanza y divulgación. [Abril
14,2017]. Recuperado de https://bteduc.com/guias_es/68_Extraccion_de_ADN_(experimento_ambi
guo).pdf