Cuestionario

PRÁCTICAS DE BIOQUIMICA II

Curso 2021-22
Apellidos y nombre: Iria Gómez Torres
Grupo y fecha realización: Grupo 2
Responda a las preguntas de los diferentes apartados

Una vez finalizado sálvelo en formato PDF y entregue la

tarea a través del Aula Virtual
Fecha límite de entrega 20 Mayo a las 23.59 h

1
 Práctica 1, sesiones 1 y 2: Lysozima
Inserte una imagen del gel de electroforesis indicando cuáles son sus
muestras y comente el resultado que obtuvo.

a) b)

Nuestras muestras son las señaladas por las fechas en la imagen a; es decir, aquellas
que se corresponden a los pocillos 2, 3 y 4. La muestra cargada en el pocillo 2 se
corresponde a M1 (extracto crudo), la cargada en el pocillo 3 a M2 (sobrenadante tras
cromatografía de intercambio iónico) y finalmente la cargada en el pocillo 4 es M3
(donde se encuentra la lisozima purificada). En el pocillo 5 se encuentra el marcador de
pesos molecular que nos permite conocer el tamaño en kDa de las muestras.

En la banda correspondiente a M1 (pocillo 2), donde se cargó el extracto crudo junto

con el sistema tampón y el tampón de carga, por lo que se esperaría encontrar todas
las proteínas presentes en la clara de huevo. Se observa como aparecen una serie de
bandas que se corresponden con las diversas proteínas. La primera banda; la cual se
sitúa próxima al ánodo (+) se corresponde con la ovotransferrina.
La ovotransferrina es una proteína cuyo pI es 6, por lo que a pH=8,3; es decir, el pH del
tampón de electroforesis, su carga es negativa y se encuentra cerca del ánodo.
La segunda banda que nos encontramos es la que se corresponde con la ovoalbúmina,
una proteína cuyo pI es de 4,5. Sin embargo, pese a tener un valor de pH inferior a la
ovotransferrina se encuentra más desplazada en el gel de electroforesis hacia el
cátodo debido a que presenta un menor peso molecular. Finalmente, la banda que se
encuentra más próxima al cátodo es la lisozima, la cual tiene un pH de 11,16; lo cual
hace que a pH 8,3 sea la única de las tres proteínas con carga positiva y por lo tanto
que migre hacia el cátodo (-).

En el pocillo 3 se cargo la preparación M2, la cual se trataba del sobrenadante

obtenido tras someter la alícuota de clara de huevo a cromatografía de intercambio
iónico para aislar la lisozima. Como cabe esperar, en este sobrenadante no se
encuentra la presencia de esta proteína, puesto que ha quedado retenida en la matriz
de la columna. Las bandas correspondientes a la ovotransferrina y a la ovoalbúmina
vuelven a estar presentes.

2
Para concluir, en el pocillo 4 se observa que tan solo existe una banda próxima al
cátodo. Se trata de la lisozima aislada por cromatografía.

¿Por qué vemos las bandas de proteínas de color azul?

Porque hemos aplicado un tampón de muestra para cargar las alícuotas en el gel
de electroforesis que contenía azul de bromofenol. El azul de bromofenol es un
compuesto coloreado que se utiliza para comprobar el progreso de la
electroforesis.

Indique el tamaño aproximado de las proteínas que puede ver en sus

muestras

Proteína en el gel Tamaño aproximado (kD)

ovotransferrina 70
ovoalbúmina 37
lisozima 10

¿Cómo calcula su tamaño?

Se calcula en tamaño aproximado en función del marcador de peso molecular

(MPM). El procedimiento es, a partir de conocer el patrón de bandas con su
respectivo peso molecular en kDa del MPM, se compara con el patrón de bandas
obtenido en las muestras problema. De esta forma viendo en que región del gel se
encuentran nuestras bandas respecto al MPM podemos aproximar el tamaño de la
proteína a la que se corresponde dicha banda del gel.

La información de los macadores de peso molecular que usaron para

cargar en el gel es la siguiente (se utilizaron dos marcadores en
diferentes geles)

3
4
Práctica 2. Fermentación alcohólica

Inserte o complete aquí su tabla de anotaciones (a temperatura

ambiente y a 37C). (Puede incluir fotografía de los tubos de
reacción).

Indicador Rojo de fenol

Tabla de anotaciones
Tubo 1 2 3 4 (control)
Volumen inicial (ml) 7 8 8 8
Cambios No se No se No se No se
observados en la observan observan observan observan
mezcla: burbujas ni burbujas ni burbujas ni burbujas ni
espuma espuma espuma espuma
Inicio del cultivo
A los 5 minutos Se forma Se forma Se forma No se forma
menos espuma espuma espuma
espuma en
comparación
con los demás
A los 10 minutos Se empieza a Se forman Se forman No se
formar más burbujas burbujas forman
espuma en burbujas
comparación
con los
demás tubos
A los 15 minutos Se forman Se siguen Se siguen No se
burbujas formando formando forman
grandes burbujas burbujas burbujas
A los 20 minutos Se han Con burbujas Con Sin burbujas
formado grandes burbujas
muchas grandes
burbujas
Cambios en los Poco hinchado hinchado deshinchado deshinchado
globos a los:

5 minutos
10 minutos Un poco más Hinchado deshinchado deshinchado
hinchado
15 minutos Hinchado Hinchado Hinchado deshinchado
20 minutos Muy hinchado hinchado hinchado deshinchado
Olor final A alcohol. Olor un poco Olor más Olor suave
Matices de más suave suave
fermentación que 1, pero
alcohólica. desagradable

5
 Olor
desagradable
a panadería.
Volumen final 7,5 8,5 8 8
Color con el rojo Naranja Naranja Naranja Naranja
fenol
pH del cultivo 4 4 5 6

Explique los cambios que observó en la tabla de anotaciones y

razónelos asociándolos a los cambios metabólicos que se
producen durante la fermentación alcohólica

ANEXO: FOTOGRAFIAS DE LOS TUBOS EN DIFERENTES

ETAPAS DE LA REACCIÓN.