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Liposolubles
Hidrosolubles
Clasificación
Vitaminas
Lipolubles
Son compuestos hidrofóbicos que sólo pueden absorberse con eficiencia cuando hay
absorción normal de grasa. Al igual que otros lípidos, se transportan en la sangre en
lipoproteínas o fijas a proteínas de unión específicas. Tienen diversas funciones; por ejemplo,
vitamina A, visión y diferenciación celular; vitamina D, metabolismo del calcio y el fosfato, y
diferenciación celular; vitamina E, antioxidante, y vitamina K, coagulación de la sangre
(Murray, et al. 2013).
Importancia de las vitaminas
Importancia de las vitaminas
Conserva Pimiento 81
morrón
Indirecto:
cualitativo y
cuantitativo
Fluorimétrico
Cromatográficos HPLC HPLC-UV-
VIS/DAD
HPLC-
fluorimétrico
HPLC-MS
Métodos analíticos para
la determinación de
vitamina C
Métodos analíticos Analitos Tipos de alimentos
❑ Para ello se dispone de una fase estacionaria que se coloca en una columna
de cromatografía.
❑ Esto se hace para que la fase estacionaria se impregne bien con la fase
móvil y no con la mezcla a analizar.
Método HPLC
Pre-tratamiento, limpieza y
purificación para la
extracción de vitamina C
► Se basa en el poder reductor del ácido ascórbico sobre los reactivos utilizados.
► Se trata de utilizar una disolución a una concentración y volumen conocida de un
compuesto que se reduce, mientras el ácido ascórbico se oxida.
Fundamento ► Al añadir el colorante (2,6‐diclorofenolindofenol) a la muestra, este es reducido mientras la
Vit C es oxidada.
► Durante este proceso el colorante se vuelve incoloro.
► De esta forma, mientras haya Vit C en la muestra, no se verá el color del indicador.
Titulación ► Una vez se haya oxidado toda la Vit C presente en la muestra, el colorante dejará de verse
volumétrica oxido - incoloro y se verá de un color rojizo.
► Para determinar el fin de la titulación el color rojizo debe persistir durante unos segundos.
reducción
► Si desaparece al agitar la muestra a analizar, significa que aún queda Vit C sin oxidarse.
Métodos de determinación de vitamina C
Método volumétrico de titulación visual con 2,6-diclofenol-indofenol
(DCFI), basado en la reducción del DCFI por el ácido ascórbico.
Soporte de titulación
Métodos de determinación de vitamina C
Método volumétrico de titulación visual con 2,6-diclofenol-indofenol,
basado en la reducción del 2,6-diclofenol-indofenol por el ácido ascórbico.
Procedimiento
Procedimiento
… Continua…
Métodos de determinación de vitamina C
Método volumétrico de titulación visual con 2,6-diclofenol-indofenol
(DCFI), basado en la reducción del DCFI por el ácido ascórbico.
Procedimiento
… Continua…
Procedimiento
Dónde:
X= mL promedio de solución de 2,6-diclorofenol-indofenol gastados en la titulación de la
muestra.
B= mL promedio de solución de 2,6-diclorofenol-indofenol gastados en la titulación de blancos.
F= mg de ácido ascórbico equivalentes a 1 mL de solución de 2,6-diclorofenol-indfenol.
E= número de mL de muestra.
V= volumen inicial de la solución de muestra.
Y= volumen de la solución de muestra titulada.
Métodos de determinación de vitamina C
Método volumétrico de titulación visual con 2,6-diclofenol-indofenol,
basado en la reducción del 2,6-diclofenol-indofenol por el ácido ascórbico.
Fundamento
► Se basa en la reacción
que se produce entre
el yodo y el almidón y
como la Vit C interfiere
en esta.
Fundamento
Fundamento
Procedimiento
► Añadir a la muestra a estudiar, almidón y se añade gota a gota
solución de lugol (solución de yoduro potásico).
Inconvenientes
Aplicaciones
Fundamento
𝐴 = 𝜀⋅𝑐⋅𝑏
Donde
A: absorbancia;
Ε: coeficiente de absortividad molar (M-¹cm-¹);
c: es la concentración molar (M) y
B: es el ancho de la cubeta que contiene la muestra y que atraviesa el haz
de luz (cm).
Métodos de determinación de vitamina C
Método de espectrofotometría indirecta
Fundamento
► Este método se basa en dos reacciones:
1. La oxidación de la Vit C al ácido L-dehidroascórbico por
medio de la solución de bromo.
2. El ácido L-dehidroascórbico reacciona con DNPH produciendo
una osazona que con ácido sulfúrico al 85% forma una
disolución roja.
► La coloración depende de la concentración de Vit C presente en la
mezcla.
*DNPH: 2,4-dinitrofenilhidracina
Métodos de determinación de vitamina C
Método de espectrofotometría indirecta
Procedimiento
Procedimiento
Con la medida de la
absorbancia de la muestra
problema y la recta de
calibrado se puede calcular la
concentración de osazona
obtenida que es proporcional a
la concentración de Vit C.
Representación de una recta de calibrado
Métodos de determinación de vitamina C
Método de espectrofotometría indirecta
Inconvenientes
*DNPH: 2,4-dinitrofenilhidracina
Métodos de determinación de vitamina C
Método de espectrofotometría indirecta
Aplicaciones
❑ Ensayos microbiológicos,
❑ técnicas de espectrofotometría,
❑ fluorimetría,
❑ quimioluminiscencia,
❑ la espectrometría de absorción atómica,
❑ electroforesis capilar y
❑ finalmente la cromatografía de líquidos de alta
resolución (HPLC) (Skoog, y otros, 2001; Li & Chen,
2001).
Métodos de determinación de vitamina B2
HPLC
HPLC
HPLC
COLUMNA C18-HPLC
BAÑO DE AGUA - MUESTRAS
Murray, R.; Bender, D.; Botham, K.; Kennelly, P.; Rodwell, V.; Weil, A. (2013) Harper: Bioquímica
ilustrada. 29a Edición. Editorial Mc Graw Hill
Muchas Gracias
► Su funcionamiento se basa en la
Viscosímetro de cono- cizalla presente en un líquido situado
placa en el espacio comprendido entre un
cono y una placa, siendo el ángulo
(alpha) entre ambos muy pequeño.
Tipos de viscosímetro
Viscosímetros
Análogos
https://www.youtube.com/watch?v=gIZRT98qtGY
Tipos de viscosímetro
Viscosímetro
Rotacional
https://www.youtube.com/watch?v=38LBfdwkPe8
Murray, R.; Bender, D.; Botham, K.; Kennelly, P.; Rodwell, V.; Weil, A. (2013) Harper: Bioquímica
ilustrada. 29a Edición. Editorial Mc Graw Hill
Muchas Gracias