INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL

“EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO SOBRE LA

VELOCIDAD DE REACCIÓN E INHIBICIÓN ENZIMÁTICA”

Arriaga Ramírez Aline Michael, Domínguez Flores José Raúl 3IM2 SECCIÓN 3
OBJETIVOS Discusión. De acuerdo con los datos de
GENERAL. Conocer el efecto de la concentración absorbancia en la concentración de sustrato sobre
del sustrato en la velocidad de reacción la velocidad de reacción podemos decir que la
enzimática e identificar el inhibidor presente. concentración de sustrato influye de manera
proporcional a la velocidad de reacción, a raíz de la
ESPECÍFICOS. gráfica de michaelis-menten podemos decir que al
principio la velocidad de reacción aumenta de
 Determinar la constante de Michaelis
manera proporcional a la concentración de sustrato,
Menten(Km) de forma gráfica por el método
pero llega a un punto en el que la velocidad de
de Michaelis Menten y Lineweaver Burk.
reacción se hace constante, esto se debe a que la
 Conocer los diferentes tipos de inhibidores.
enzima ya está saturada de sustrato, y que ya no
 Determinar el tipo de inhibidor producido
habrá más enzima a la que el sustrato se pueda
por la anilina.
unir. Y a partir de la gráfica Michaelis-menten se
RESULTADOS pueden obtener los valores de velocidad máxima y
el valor de Km (el valor de afinidad del sustrato por
Se obtuvieron los siguientes resultados del efecto la enzima), a partir de la mitad de la velocidad
de la concentración de sustrato sobre la velocidad máxima. En el caso de los inhibidores, que son
de reacción. aquellos que disminuyen o anulan la actividad de
Tubo [S] A AR V(UI) 1/V 1/[S] una enzima, con los datos obtenidos en la práctica
determinamos cada parámetro necesario para
1 0.01 0.295 2.493 0.2403 4.162 100
poder compararlo con la gráfica de Michaelis-
2 0.02 0.476 3.814 0.3814 2.623 50 Menten ya linealizada por el método de Lineweaver-
Burk, ya una vez comparados se determina qué tipo
3 0.03 0.971 7.033 0.7033 1.422 33.33
de inhibidor es el usado, en este caso fue la anilina.
4 0.05 0.688 5.361 0.5361 1.865 20
Conclusiones. Observamos que al haber un
5 0.08 0.756 5.858 0.5858 1.707 12.5 aumento en la concentración de sacarosa se tiene
6 0.1 0.920 7.055 0.7055 1.417 10 un aumento en la velocidad de reacción de la
invertasa. Determinamos que el tipo de inhibidor fue
Tabla 1. Tabla con datos de los 6 tubos problema en
acompetitivo, teniendo en cuenta la gráfica del
concentración de sustrato.
modelo de Lineweaver-Burk.
Inhibición enzimática
Referencias.
Tubo [S] A AR V(UI) 1/V 1/[S]  Fundamentos de las gráficas de cinética enzimática.
1 0.01 0.140 1.361 0.1361 7.348 100 (s/f). Khan Academy. Recuperado el 22 de
2 0.02 0.114 1.172 0.1172 8.532 50 noviembre de 2022, de
3 0.03 0.157 1.485 0.1485 6.734 33.33 https://es.khanacademy.org/science/ap-
4 biology/cellular-energetics/environmental-impacts-
0.05 0.272 2.325 0.2325 4.301 20
on-enzyme-function/a/basics-of-enzyme-kinetics-
5 0.08 0.259 2.230 0.2230 4.484 12.5
graphs
6 0.1 0.243 2.113 0.2113 4.733 10
 (S/f). Uhu.es. Recuperado el 22 de noviembre de
Tabla 2. Resultados obtenidos de inhibición
2022, de
enzimática. http://www.uhu.es/08007/documentos%20de%20text
o/apuntes/2005/pdf/tema_08_enzimas_2.pdf
 ANEXOS
A partir de nuestra ecuación de Curva Tipo, determinamos los valores de Azúcares reductores

y= 0.137x -0.0465, y=Absorbancia

 Tubo 1: [S]
AR=0.295+0.0465/0.137= 2.493 𝜇moles de AR
Inhibición Enzimática
 Tubo 1:
AR=0.140+0.0465/0.137= 1.361 𝜇moles de AR

 Para el cálculo de la concentración de sustrato usamos la siguiente fórmula:

C1V1=C2V2
Donde:
C1: Sacarosa
V1: Volumen del tubo
C2: Concentración buscada
V2: Volumen de reacción

 Tubo 1:
C2=C1V1/V2
C2= (0.2 M) (0.1 mL) /2 mL=0.01 M

1/vmax

Km

Grafica1. Grafica de Michaelis-Menten.

Grafica 2. Gráfica lineweaver-burk 1/V vs 1/[S] en inhibición enzimática