UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTÓNOMA DE MÉXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS
SUPERIORES ZARAGOZA

QUÍMICA FARMACÉUTICO BIOLÓGICA

MATERIA:
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR Y DE LOS TEJIDOS I

PROFESOR:

CERVANTES CRUZ ROSALBA

EQUIPO 5

GRUPO 1452

INTEGRANTES:

ELIZARRARAZ SALAZAR BRYAN ANTONIO

SANDIN SAUCEDO EUGENIO
PACHUCA MIRANDA BRYAN ALEXIS
Objetivos:

Objetivo general: Determinar la concentración de albúmina en la clara de huevo por

el método de Lowry.

Objetivos particulares:
● Desarrollar y analizar una curva estándar.
● Conocer el correcto uso del espectrofotómetro

Antecedentes:

Espectrofotometría: La espectrofotometría es un método de análisis óptico

frecuentemente usado en análisis químicos para determinar la cantidad de luz
absorbida o transmitida por una solución, y debido a que en el caso de las curvas
estándar, ésta es proporcional a la concentración presente, puede indicarnos la
concentración exacta al compararla con una solución de concentración conocida.

Método de Lowry para la cuantificación de proteínas: El método de Lowry es un

método colorimétrico de valoración cuantitativa de las proteínas. A la muestra se
añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la
intensidad de color proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de
Lambert-Beer.

Ley de Lambert-Beer: La absorbancia de los cuerpos coloreados en solución es

directamente proporcional a la concentración.

Puntos a considerar para una curva estándar:

• Conocer la concentración aproximada de la sustancia a determinar en la muestra
problema.

• Contar con una sustancia patrón en el laboratorio para ser utilizado como
referencia.

• Elegir por lo menos 4 concentraciones distintas del patrón

• Prepara un blanco de reactivos que deberá contener todo menos la sustancia a

determinar.
Resultados:

Tabla 1. Curva estándar de albúmina a 640 nm.

Volumen de albúmina Absorbancia Concentración

0.1 mg/mL (mL) (mg)

0 (Blanco) 0.000 0.00

0.1 0.056 0.01

0.2 0.094 0.02

0.4 0.180 0.04

0.8 0.340 0.08

Memoria de cálculo para la determinación de la concentración Tabla 1

Solución patrón de Albúmina: 0.1 mg/ 1 mL

1 mL—0.1 mg 1 mL—0.1mg 1 mL—0.1 mg 1 mL—0.1 mg

0.1 mL—0.01 mg 0.2 mL—0.02 mg 0.4 mL—0.04 mg 0.8 mL—0.08 mg

Figura 1. Curva estándar de albúmina a 640 nm con regresión lineal.

Tabla 2. Muestra problema (por duplicado)

Volúmen de Absorbancia Concentración Concentración Concentración

muestra calculada (mg) corregida (mg) final (g/dL)
problema (mL) (dilución
1/1000)

0.5 0.120 0.0266 26.6 5.32

0.5 0.112 0.0247 24.7 4.94

Memoria de cálculo para la concentración calculada Tabla 2.

La ecuación de la recta obtenida es Abs= 4.185[C(mg)]+0.0084 por lo tanto para

calcular la concentración de la muestra problema:

[C(mg)]=(Abs - 0.0084)/4.185
[C(mg)]=(0.120 - 0.0084)/4.185= 0.0266 mg
Para la corrección por dilución se multiplica por el inverso de la dilución (1/1000) por
lo tanto:
0.0266 mg X 1000= 26.6 mg
Para la concentración final se divide entre la alícuota usada para el análisis de la
muestra problema y se hacen las conversiones a g/dL

26.6 mg/ 0.5 mL= 53.2 mg/mL[1g/1000mg][100mL/1dL]= 5.32 g/dL

Se realiza el mismo procedimiento para los demás datos de la tabla 2.

Concentración teórica de albúmina en Concentración experimental promedio

el huevo (g/dL) de albúmina en el huevo (g/dL)

11 5.13
Análisis de resultados:

Para determinar la concentración de la albúmina, fue necesario construir una curva

de calibración, la cual se encarga de expresar la relación que existe entre la
absorbancia, medible por un espectrofotómetro, y las distintas concentraciones de
las soluciones problema a las cuales se les mide la absorbancia. Para la elaboración
de esta curva debe utilizarse como mínimo tres puntos diferentes; representados en
una gráfica, los datos de las concentraciones se colocan en el eje de las abscisas, y
la absorbancia medida a cada una de estas concentraciones en el eje de las
ordenadas. Generalmente, los datos de absorbancia con relación a las
distintas concentraciones presentan un comportamiento lineal, lo cual nos permite
por medio de una interpolación conocer cualquier valor de absorbancia al conocer la
concentración de la solución o viceversa.
En la curva realizada se tomó en cuenta el principio de que a mayor cantidad de
proteínas, mayor color desarrollado y, por lo tanto, mayor absorbancia “Ley de
Lambert-Beer”, es decir, se cumple una relación proporcional entre la magnitud o
intensidad de color que da una reacción y la cantidad del reactivo que la provoca. La
Ley de Beer relaciona la absorción de la luz con las propiedades del
material atravesado; cuando la luz atraviesa un medio que contiene un analito
absorbente, disminuye su intensidad como consecuencia de la excitación del
analito. Según esta ley, la absorbancia (A) es directamente proporcional a la
concentración de la especie absorbente (c) y a la longitud de trayecto (b) del medio
de absorción.
La concentración obtenida en la práctica fue de 5.13g/dL. Mientras que la
concentración teórica de albúmina en el huevo se esperaba que fuera de 11 g/dL.
Los resultados experimentales muestran una concentración de albúmina en el
huevo significativamente más baja que la concentración teórica esperada.
Esto puede ser debido a la alimentación deficiente que llevan las gallinas de donde
se recolectan los huevos para la venta al público.
Conclusiones:

● Con un coeficiente de correlación lineal de 0.9981 aseguramos que nuestra

función (ecuación de la recta) es confiable y sigue el comportamiento
experimental.
● La concentración experimental promedio de proteínas en la clara de huevo
fue de 5.13 g/dL.
● La calidad del huevo analizado fue baja, ya que el contenido de proteínas
debe estar entre 10 y 13 g/dL
Referencias:
1 De marzo de APELA DEC 6. Manual de Laboratorio de Bioquímica Celular y de los
. Tejidos I [Internet]. Unam.mx. [citado el 5 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://www.zaragoza.unam.mx/wp-content/Portal2015/Licenciaturas/qfb/manuales/5_M
ANUAL_BIOQUIMICA_CELULAR_TEJIDOS_I_2020.pdf

2 Ley de Beer-Lambert [Internet]. Química.es. [citado el 5 de septiembre de 2023].

. Disponible en: https://www.quimica.es/enciclopedia/Ley_de_Beer-Lambert.html

3 Objetivo General I. CONOCIMIENTO DE TÉCNICAS ANALÍTICAS PARTE I:

. FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA [Internet]. Unam.mx. [citado el 5 de
septiembre de 2023]. Disponible en:
https://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/5764/mod_resource/content/1/P7.%20CON
OCIMIENTO%20DE%20T%C3%89CNICAS%20ANAL%C3%8DTICAS.pdf

4 de La Vega •. Analítica Experimental I. •. Profr Joaquín Presa. FACULTAD DE QUÍMICA

. [Internet]. Unam.mx. [citado el 5 de septiembre de 2023]. Disponible en:
http://paginaspersonales.unam.mx/app/webroot/files/5404/Asignaturas/1843/Archivo1.43
83.pdf

5 Unam.mx. [citado el 5 de septiembre de 2023]. Disponible en:

. https://amyd.quimica.unam.mx/pluginfile.php/14545/mod_resource/content/1/An%C3%A
1lisis%20de%20alimentos%20fundamentos%20y%20t%C3%A9cnicas.pdf

Folio de la práctica: 20230829C110590