CURSO QUIMICA CLINICA GENERAL

LABORATORIO CLINICO Y PATOLOGIA

PROBLEMAS ENZIMAS

1. En cierto estudio de la enzima ribonucleasa A, se obtuvieron datos de dos

isoenzimas, denominadas Isoenzima I e Isoenzima II. Se midió la velocidad
inicial de la reacción a varias concentraciones de sustrato. Para ambas
isoenzimas la concentración de enzima total usada en los ensayos fue de 0.1
M a partir de los datos de actividad se calcularon los parámetros cinéticos,
que se presentan a continuación. Dato Kcat=Vmax/ [Et]

2.
Vmax (M / min) Km (mM)
Isoenzima I 100 10
Isoenzima II 10 0.1

¿Cuál de las dos enzimas presentará menor eficiencia catalítica y cuál de ellas
presentará el mayor número de recambio? Sustentar su respuesta.

3. Ejemplo: En un experimento de laboratorio usted completó un estudio de

cinética enzimática, obteniendo los siguientes resultados:
Calcular el Km y la velocidad máxima, hacer los gráficos en papel milimétrico o
Excel para Michaelis & Menten y plot de las inversas (Lineweaver & Burk).

[S] (Molar) Vo (Molar/min) 1/[S] 1/Vo

1 40
5 75
15 91
40 96
65 98
80 98,5
90 99
100 100

4. La actividad de la enzima Ciclooxigenasa sobre el ácido Araquidonico es muy

importante para la formación de prostaglandinas (hormona de señal corta
responsable del dolor e inflamación), en un experimento la enzima
Ciclooxigenasa y su sustrato el ácido Araquidonico fueron sometidos a la
acción inhibidora de un fármaco llamado Ibuprofeno, obteniéndose los
siguientes valores indicados en la Tabla. Determinar los Kms respectivos, así
como la velocidad máxima sin inhibidor y con inhibidor, así mismo determine
qué tipo de inhibidor es el Ibuprofeno, realizar los gráficos en papel milimétrico
o Excel para Michaelis & Menten y plot de las inversas (Lineweaver & Burk).
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Sustrato E+S E+S+I E+S E+S+I

[S] (Molar) Vo (Molar/min) Vo (Molar/min) 1/[S] 1/Vo 1/Vo
0.5 23.5 16.07
1 32.2 25.25
1.5 36.9 30.49
2.5 41.8 37.04
3.5 44.0 38.91

4.- La enzima muscular Lactato deshidrogenasa cataliza la siguiente reacción:

LD

NADH y NAD+ son la forma reducida y oxidada respectivamente, de la

coenzima NAD, las disoluciones de NADH, pero no las de NAD+, absorben luz
a 340nm. Esta propiedad se utiliza para determinar la concentración de NADH
en disolución midiendo espectrofometricamente la absorbancia a 340 nm.
Explique cómo se puede utilizar esta propiedad del NADH para diseñar
métodos para determinar cuantitativamente la actividad de Lactato
deshidrogenasa, así como de otras enzimas en la cual dentro de la
estequiometria de la reacción no se encuentra el NADH ni el NAD+.

5.- En el laboratorio Clínico es muy importante entender cómo obtenemos los

resultados de actividad enzimática, siempre utilizamos el promedio del cambio
de absorbancia (ΔA), y lo multiplicamos por un factor ya predispuesto por el kit
que estamos utilizando, sin embargo, que hay detrás de ese factor ¿cómo? es
calculado realmente, la mayoría desconoce que parámetros intervienen en ello.

Por ello en el siguiente ejemplo para una reacción catalizada por la enzima
Alanina Amino Transferasa GPT (ALT), calcular la actividad enzimática, en
una muestra de suero en Unidades Internacionales por litro (UI/L) y cuál
sería el factor para este ensayo enzimático, si quisiéramos implementarlo
como un kit.

Utilizar los siguientes datos:

 Coeficiente de absortividad molecular NADH a 340nm=6.22x103 L/mol x cm
 Longitud de la cubeta= 1 cm
 Volumen de suero= 20 uL
 Volumen de reactivo=3.0 mL

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Tiempo Absorbancia
1 min 1.104
2 min 1.025
3 min 0.950
4 min 0.873