INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

BIOQUÍMICA GENERAL
“Reacciones de transaminación por medio de cromatografía en pape”.
Arriaga Ramírez Aline Michael, Domínguez Flores José Raúl 3IM2 SECCIÓN 3

INTRODUCCIÓN La transaminación ocurre en la célula como parte

de lo que denominamos metabolismo nitrogenado y tiene que ver con Curva Tipo de Acido Glutámico
aquellos compuestos que contienen átomos de hidrógeno en su
0,6 y = 1,0071x - 0,0183
estructura. Durante el proceso de transaminación, un aminoácido le

Absorbancia 540 nm
0,5 R² = 0,9913
transfiere su grupo funcional amino al cetoglutarato para formar
glutamato y en el proceso se obtiene un cetoácido. 0,4
0,3
OBJETIVOS
0,2
 General. Cuantificar la actividad de la transaminasa 0,1
ALT/TGP a partir de un extracto crudo de hígado. 0
-0,1 0 0,2 0,4 0,6
ESPECÍFICOS. μmoles de glutámico
 Preparar un cromatograma en papel para la identificación de
ácido glutámico.  Cálculo de la concentración de los tubos
 Calcular la concentración de ácido glutámico obtenido por (Tubo 2).
acción de la transaminación.
20 μmoles de glutámico  1,000 μL
RESULTADOS
X= 0.2 μmoles de glutámico  10 μL
C5H9NO4 P T Reg
Cantidad 5 10 15 20 25 60 60 20 (Anexo cálculos)
(μL)
Distancia 18.7 18.9 18.5 18 16.6 10.3 10.9 10 DISCUSION El ácido glutámico es sintetizado a partir
recorrida
(cm)
de la enzima transaminasa (TGP), dicha enzima se
Frente 43.7 44 44.3 44.5 44.5 44.7 45 45 encarga de transferir el grupo amino de la alanina al α-
del cetoglutarato, obteniéndose así piruvato y glutamato
solvente como productos.
(cm)
Rf 0.428 0.43 0.41 0.40 0.37 0.230 0.242 0.222
A partir de la cromatografía en capa fina, y de la curva
0 8 5 3
Tabla 1. Rf de las muestras de ácido glutámico tipo de ácido glutámico obtenida a raíz de los valores
de absorbancia de las muestras del cromatograma, que
Muestra Alanina Problema Testigo fueron diluidas con ninhidrina al 1% en butanol y
Cantidad 5 μL 60 μL 60 μL acetona al 75% para poder ser medidas en el
Distancia espectrofotómetro, se tuvieron las concentración de las
25.7 23.8 24.9
recorrida (cm) muestra problema y destacando la presencia de
Frente del 45.2 44.7 45 glutámico en el tubo testigo, debido a que se usó un
solvente (cm) extracto crudo de hígado de rata donde se tuvieron
Rf 0.569 0.532 0.553 sustancias como metabolitos de alanina, α-
Tabla 2. Rf de muestras que contienen Alanina cetoglutarato y también de glutamato, por lo que, este
tubo testigo nos sirvió para obtener valores más
Tubo Absorbancia μmoles de exactos referentes a los cálculos de la actividad
glutámico enzimática de la transaminasa y así mismo las
Regulador 0 0 Unidades Arbitrarias de Transaminasa (UAT).
5 μL 0.081 0.1
10 μL 0.152 0.2 CONCLUSIONES Tomando en cuenta que 1 g de
15 μL 0.280 0.3 hígado equivale a los 30 ml de preparación cruda, por
20 μL 0.400 0.4 medio de cálculos cuantitativos obtuvimos que de los
25 μL 0.488 0.5 0.5 ml ocupados en la práctica solamente se obtuvieron
Testigo (T) 0.088 0.106 0.0166 g de hígado.
Problema (P) 0.546 0.560
P-T (μmoles de 0.458 0.473 De acuerdo a las concentraciones de μmoles de ácido
glutámico reales) glutámico obtenidas en los tubos problema y testigo
observamos que a mayor absorbancia mayor μmoles
Tabla 3. Datos para la curva tipo de ácido glutámico de ácido glutámico, ya que en el tubo problema hay
0.560 μmoles con una absorbancia de 0.546, mientras
que en el tubo testigo al tener una absorbancia de 0.088
se obtuvieron 0.106 μmoles.
Finalmente, de 7.8833 μg de glutámico en relación
con 0,0166 g de hígado a una 1hora se obtuvieron
474.8976 obteniendo con esto las unidades arbitrarias
de transaminasa que son μg de glutámico sobre g
hígado por hora.

REFERENCIAS

 Guerra, J. J. M. (s/f). Reacciones de

transaminación. Uaa.mx. Recuperado el 30
de noviembre de 2022, de
https://libroelectronico.uaa.mx/capitulo-14-
catabolismo-y/reacciones-de-
transaminacio.html
 Mvz, C., & Nava, C. (s/f). METABOLISMO
DE LOS COMPUESTOS NITROGENADOS.
Unam.mx. Recuperado el 30 de noviembre
de 2022, de
https://fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apunt
es_bioquimica/Unidad_10.pdf
 D., P. P. (2020, mayo 25). Transaminación y
Desaminación. Blogspot.com. https://temas-
selectos-de-
ciencias.blogspot.com/p/bioquimica-
transaminacion-desaminacion.html
 ANEXO CALCULOS

 Cálculo de la concentración de los tubos (Tubo 2).

20 μmoles de glutámico  1,000 μL

X  10 μL

X= 0.2 μmoles de glutámico

 De la ecuación de la curva tipo tenemos que:

- X: μmoles de glutámico
- y: Absorbancia

Despejamos x, tenemos:
𝑦 + 0.0183
𝑥=
1.0071
- Para el tubo problema:

Absorbancia: 0.546
0.546 + 0.0183
𝑥= = 0.560 𝜇𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑡á𝑚𝑖𝑐𝑜
1.0071
- Tubo Testigo:

Absorbancia: 0.088
0.088 + 0.0183
𝑥= = 0.106 𝜇𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑡á𝑚𝑖𝑐𝑜
1.0071
P-T (μmoles de glutámico reales):

Absorbancia: 0.458
0.458 + 0.0183
𝑥= = 0.473 𝜇𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑡á𝑚𝑖𝑐𝑜
1.0071
 Calculo de actividad enzimática (Unidades Arbitrarias de Transaminasa)

1 g de hígado  30 mL

X  0.5 mL

X= 0.0166 g de hígado

0.473 μg de glutámico  60 μL

X  1,000 μL

X= 7.8833 μg de glutámico

A partir de estos datos calculamos las Unidades Arbitrarias de Transaminasa:

7.8833 μg de glutámico μg de glutámico
𝑈𝐴𝑇 = = 474.8976
(0.0166 𝑔 𝑑𝑒 ℎ𝑖𝑔𝑎𝑑𝑜)(1 ℎ𝑟) 𝑔ℎ𝑖𝑔𝑎𝑑𝑜 ℎ𝑟