INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS

BIOQUIMICA GENERAL
Practica N. 5.1 pH y Concentración de Enzima.

INTRODUCCIÓN Donde, los términos importantes (S)= sustrato y Vo

Vmax y una constante, llamada constante de Michaelis
Su actividad catalítica depende de la integridad de
o Km
su con formación protética nativa. Si una enzima se
desnaturaliza o se disocia en sus subunidades, la vmax (S)
𝑉𝑜 =
actividad catalítica se destruye. Así, las estructuras km(S )
primaria secundaria, terciaria y cuaternaria de las
proteínas enzimáticas son esenciales para su Vo viene determinada por la descomposición de E-S
actividad catalítica. para dar el producto, teniendo;
Vo= K2 [ES]
Las reacciones catalizadas por enzimas se
caracterizan por la formación de un complejo entre el OBJETIVOS
sustrato y la enzima (E. S). La fijación del sustrato se
produce en una bolsa de la enzima llamado sitio Demostrar que la velocidad de la reacción
activo. Uno de los factores clave que afectan la enzimática es directamente proporcional a la
velocidad de una reacción catalizada por una enzima concentración de enzima.
es la concentración de sustrato presente. De igual Analizar la importancia del pH del medio sobre la
manera las enzimas tienen un pH optimo o un velocidad de una reacción enzimática y su efecto
intervalo de pH en el que su actividad es máxima; a sobre el carácter iónico de la enzima y del sustrato.
valores superiores o inferiores de pH la actividad
disminuye. Esto no es sorprendente dado que RESULTADOS
algunas cadenas laterales de aminoácidos pueden Efecto de la concentración de enzima
actuar ácidos o bases débiles que desarrollan
funciones críticas en el sitio activo de la enzima y Tubo 1 2 3 4 5
Abs 0.323 0.443 0.581 0.797 0.887
que dependen del mantenimiento de un cierto AR (µmoles/2ml)
estado de ionización, mientras que en otras zonas Vo (unidades de
de la proteína algunas cadenas laterales ionizadas invertasa)
Enzima (ug/2.0ml) 1 2 3 4 5
pueden jugar un papel esencial en las interacciones
que mantiene la estructura de la proteína.
El intervalo de pH en el que cambia la actividad de la
enzima puede proporcionar alguna pista sobre el tipo
de aminoácido que está involucrado
Grafica 1. Efecto de la concentración de enzima sobre la
Muchas enzimas comparten algunas propiedades velocidad de reacción
cinéticas. Cuando se añade sustrato a un enzima, la
reacción llega rápidamente a un estado estacionario
En el que la velocidad a la que se forma el complejo
enzima-sustrato se equilibra con la velocidad a la Efecto del pH sobre la velocidad enzimática
que se descompone. Al aumentar el sustrato
Tubo 1 2 3 4 5 6
aumenta la actividad de una enzima a concentración
Abs 0.112 0.33 0.426 0.577 0.30 0.193
fija en el estado estacionario. 2 7
AR
La curva que representa la relación entre el sustrato (µmoles/2ml)
y Vo tiene la misma forma general para todas las Vo (unidades
de invertasa)
enzimas y se puede expresar algebraicamente pH 3 4 4.5 5 6.5 7.5
mediante la ecuación de Michaelis Menten.
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la cual se forma un compuesto con coloración

diferente a la inicial.
Grafica 2. Efecto del pH sobre la velocidad de reacción

La adición del ácido 3,5-dinitro salicílico (acido 3, 5-

DNS) tiene un papel muy importante dentro del
Cálculos desarrollo de esta práctica, a continuación, se
describen los usos de 3, 5-DNS:
Concentración de a) Permite coloración de la reacción para poder
cuantificar la presencia de azucares reductores.
enzima sobre la b) Proporciona un medio alcalino que permite la
isomerización de la fructosa a glucosa
velocidad de reacción c) Detiene la reacción enzimática.

Concentración de enzima sobre la velocidad de reacción En la experiencia del efecto del pH sobre la actividad
Determinación de las unidades de invertasa: de la invertasa se ocuparon dos reguladores de pH,
μmoles AR uno de ellos es el regulador de citratos, ya que este
Vo= contiene tres grupos ionizables con distinto pKa, lo
tiempo
que permite amortiguar a distintos pH
Determinación de la concentración de azúcar reductor
(AR):
De la ecuación de curva tipo:
y
x= CONCLUSIÓN
❑
Don de x es la cantidad en μmol de AR y “γ” es la La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los
absorbencia obtenida a 540 nm de λ cambios de pH. Desviaciones de pocas décimas por
Para el tubo 1: encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar
y ❑ drásticamente su actividad.
x= = =μmol de AR
❑ ❑ La velocidad puede determinarse bien midiendo la
μmoles AR μmol aparición de los productos o la desaparición de los
= reactivos. Para estudiar la cinética enzimática se
tiempo mL
mide el efecto de la concentración inicial de sustrato
sobre la velocidad inicial de la reacción,
manteniendo la cantidad de enzima constante.
Determinación de las unidades de invertasa (U.I):
Para el tubo 1:
μmoles AR μmoles AR
Vo= ( )
tiempo tiempo REFERENCIAS

Vo=
()
U.I Horton, H. Robert; Moran, Laurence A.; Scrimgeour,
() K. Gray; Perry, Mark D.; RAWN, J. David.
“PRINCIPIOS DE BIOQUÍMICA”. Cuarta EDICIÓN
PEARSON EDUCACIÓN, MÉXICO, 2008. Pp. 186-
194.
DISCUSION
El ácido 3,5 DNS presenta un color amarillo en su
estado oxidado, al tener contacto con un azúcar
reductor, desata una reacción de óxido-reducción en