TAREA DE INVESTIGACION DE BIOQUIMICA PRIMER BIMESTRE

NOMBRE:

TEMA: CINETICA ENZIMATICA

INTRODUCCION:

El estudio de las velocidades de las reacciones enzimáticas catalizadas se las realiza mediante la
cinética enzimática en donde se determina la velocidad de reacción catalizada de las enzimas
que siempre van a depender d la concentración de sustrato, la temperatura, presencia de
inhibidores y su pH. También analizaremos mediante un trabajo practico realizando varios
ejercicios de cinética enzimática donde ponemos en conocimiento lo investigado aplicando los
conceptos estudiados y especialmente el Modelo de Michaelis –Menten y analizaremos los
diagramas de Lineweaver-Burk, de Eddie-Hofstee, de Hanes-Wolf

Por ultimo analizaremos las inhibiciones enzimáticas por ciertos sustratos y su especificidad si
son competitivos o no competitivos.

DESARROLLO

Enzimas:

Las enzimas son un conjunto de proteínas encargadas de catalizar es decir: disparar, acelerar,
modificar, enlentecer e incluso detener las reacciones químicas a costa de sean
termodinámicamente viables. La mayoría de las enzimas están compuestas de proteínas
globulares de diversos tamaños como monómeros de 62 aminoácidos hasta enormes cadenas de
2500.

Muy pocas enzimas son las involucradas en las catálisis de la reacción como centro activo La
secuencia en que se ensamblen todos estos aminoácidos determina la estructura tridimensional
de la enzima, lo cual dictamina también su funcionamiento específico. A veces esta estructura
también posee sitios para atraer cofactores, es decir, otras sustancias cuya intervención es
necesaria para producir el efecto buscado.

Existen enzimas que actúan sin componentes no proteínicos para realizar sus actividades a este
tipo de enzimas se las denomina cofactores enzimáticos que pueden ser iones como el magnesio

y el zinc

O las mismas moléculas orgánicas complejas llamadas coenzimas, el componente proteico de

una enzima que carece de cofactores le denomina apoenzima y aquellas enzimas intactas que
poseen su cofactores se denominan Holo enzimas los ajustes de velocidad de las reacciones
catalizadas por las enzimas permiten a las células responder con eficacia ante los cambios en el
ambiente.
Los organismos pueden regular las actividades enzimáticas de forma directa principalmente
mediante la unión de activadores o inhibidores, la modificación covalente de las moléculas
enzimáticas y de forma indirecta regulando la síntesis de enzima.

Los mecanismos de acción de las enzimas para facilitar la catálisis son:

 Por proximidad donde la enzima y el sustrato deben de aproximarse entre si

 Acido-base en donde responden a los cambios de pH existen diversas de este tipo
catálisis de bases y ácidos especificas cuando son por protones y generales usan
cualquier ácido y bases generales usan cualquier base y especificas cuando usan iones
OH
 Por deformación cuando la enzima deforma el sustrato para poder romper sus enlaces
 Covalente cuando forma un enlace covalente entre la enzima y el sustrato de forma
momentánea

Cinética enzimática:

El estudio cuantitativo de la catálisis enzimática se la conoce como cinética enzimática que nos
proporciona información sobre las velocidades de reacción, permiten además estos estudios
medir la afinidad de las enzimas por el sustrato, por los inhibidores y permite entrever los
mecanismos de reacción.

Otra de las virtudes de medir la cinética enzimática es que permite comprender y analizar
aquellas fuerzas que regulan las vías metabólicas. La velocidad de reacción A---P es
proporcional a la frecuencia con las que las moléculas que reaccionan forman el producto la
velocidad de reacción es:

.Vo= Velocidad Inicial

K= una constante de velocidad que depende de las condiciones de la reacción. (Temperatura,

fuerza iónica o PH)

X= orden de la reacción (este orden de reacción vendría a ser la suma de los exponentes de los
términos de concentración en la expresión de velocidad)

Esta determinación nos permite obtener diferentes mecanismos de reacción. Si se los conoce de
primer orden aquellos que la velocidad depende de la primera potencia de concentración de un
reactivo conocida como reacción uni molecular en la reacción A------P su ecuación seria:

Si A se duplica se observa que a velocidad también lo hará, en una reacción A+B ---P si el
orden A-B es uno en cada caso se dice que es de segundo orden A-B deben colisionar para que
se forme una reacción biomolecular.
Cinética enzimática de Michealis –Meten:

Uno de los modelos más utilizados es de la investigación de las velocidades enzimáticas fue
desarrollado por Leonor Michaelis y Maud Meten este menciona que cuando el sustrato S se
une al sitio activo de la enzima E se forma el complejo intermedio ES durante el estado de
transición el sustrato se convierte en producto.

La representación gráfica de la ecuación Michelaeis Meten es una hipérbola que se muestra a

continuación:

Donde la Vmax: corresponde a la velocidad máxima a la que tiende a curva experimental.

Y Km es la concentración de sustrato a la cual la velocidad de reacción es la mitad de

Vmax.

Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax es más sencillo utilizar la

representación doble recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea recta. Esta
representación doble recíproca recibe el nombre de representación de Lineweaver-Burk (Figura
de la derecha). Es una recta en la cual:

 La pendiente es KM/Vmax
 La abscisa en el origen (1/v0
= 0) es -1/KM
 La ordenada en el origen
(1/[S]0 = 0) es 1/Vmax
Representaciones matemáticas en la cinética enzimática:

Representación Lineweaver-Burk

La representación gráfica de Lineweaver-Burk permite identificar el Km y Vmax; el punto de

corte con el eje de ordenadas es el equivalente a la inversa de Vmax, y el de abscisas es el valor
de -1/Km, el diagrama de Lineweaver-Burk se emplea como herramienta gráfica para calcular
los parámetros cinéticos de una enzima.

Representación Eddie-Hofstee

El diagrama de Eadie-Hofstee, también

llamado de Woolf-Eadie-Augustinsson-
Hofstee o de Eadie-Augustinsson, es una
representación gráfica de la función
matemática utilizada en bioquímica en el
estudio de la cinética de las reacciones
enzimáticas, por la que se relaciona la
velocidad de una reacción con la
concentración del sustrato:

De manera similar a otras técnicas que linealizan la ecuación de Michaelis-Menten, el diagrama

de Eadie-Hofstee permite visualizar rápidamente los parámetros cinéticos importantes como Km
y vmax, pero está menos afectado por el margen de error que el diagrama de Lineweaver-Burk,
debido a que asigna el mismo peso a todos los puntos para cualquier concentración del sustrato
o velocidad de reacción.
Representación de Hanes-Wolf

El diagrama Hanes–Woolf se emplea como herramienta gráfica para calcular los parámetros
cinéticos de una enzima. En él se representa la relación concentración de sustrato/velocidad de
reacción frente a la concentración de sustrato [S]. Es una de las formas de linealizar la ecuación
de Michaelis-Menten. La representación gráfica de Hanes permite identificar el Km y Vmax; el
punto de corte con el eje de ordenadas es el equivalente a Km/Vmax, y el de abscisas es el valor
de −Km.

Inhibición Enzimática:

Las inhibiciones enzimáticas se dan cuando las moléculas diferentes del sustrato pueden unirse
a las enzimas reduciendo parcial o totalmente la actividad catalítica y reciben el nombre de
inhibidores existen dos tipos de inhibidores los competitivos y no competitivos.

Cuando es competitivo el inhibidor reduce la velocidad de reacción pero su velocidad máxima

concentración grande de sustrato sigue siendo la misma como se muestra en el siguiente gráfico.
Cuando es no competitiva se puede reducir la velocidad máxima pero Km que la afinidad de la
enzima hacia el sustrato sigue siendo la misma lo que se expone en el grafico

Parte #2

Ensayo:

Ejercicios para resolver:

1. The effect of an inhibitor on an enzyme was tested and the experiment gave the
results below. Plot the data and determine, by inspection of the graph, what type
of inhibition is involved.

V (µmol/min) V (µmol/min)
V (µmol/min) con inhibidor con inhibidor
[S] µM s in inhibidor 0,25 0,50
1 0,4 0,22 0,21 0,2
2 0,67 0,29 0,26 0,24
3 1 0,32 0,3 0,28
4 2 0,4 0,36 0,32

Transformamos dividiendo a la unidad la velocidad y la concentración de sustrato para buscar la

pendiente de la recta o ecuación lineal

1/V 1/V
1/V (µmol/min) (µmol/min)
(µmol/min) con con
s in inhibidor inhibidor
1/[S] inhibidor 0,25 0,50
µM 2 4,54545455 4,76190476 5
1,49253 3,44827586 3,84615385 4,16666667
1 3,125 3,33333333 3,57142857
0 2,5 2,77777778 3,125
Vmax 0,492 Vmax
0.25 0,43 Vmax
0.50 0,3752
0.25 0.50
Km 0,4918 Km 0,422 Km 0,3752

0.25 0.50
Vmax > Vmax > Vmax
0.25 0.50
Km ≠ Km ≠ Km
Entonces podemos concluir que ninguna de las dos reacciones con inhibidores es mayor a Vmax
sin inhibidores entonces las reacciones son no competitivas.
0.25 0.25
Con Vmax y Km = el inhibidor decrece y es no competitivo
0.50 0.50
Con Vmax y Km = el inhibidor también decrece y es no competitivo

2. Determinar Km y VMax

Dados los siguientes datos encuentre o determine Km Y VMax

[S] M Vo µmoL/min
-6
2,5 x 10 28
-6
4 x 10 40
-5
1 x 10 70
-5
2 x 10 95
-5
4 x 10 112
-4
1 x 10 128
-3
2 x 10 139
-2
1 x 10 140

Transformamos primeramente los da datos de sustrato moles a unidades moles con una notación
-6
de 10 Mol, luego los moles lo reducimos a a Micro mol quedando:

[S] Vo
µmoL (µmoL/min)
1 2,5 28
2 4 40
3 10 70
4 20 95
5 40 112
6 100 128
7 2000 139
8 10000 140
Elaboramos una gráfica donde representemos la tendencia de la curva para poder hallar su
Vmax. Presentando la siguiente dispersión o tendencia

Luego procedemos a calcular el valor de la pendiente de cada punto en donde dividimos por la
unidad por la cantidad de sustrato y la velocidad a la que se mueve quedando:

1/Vo
1/[S] M(10^-6) (µmoL/min)
0,4 0,035714286
0,25 0,025
0,1 0,014285714
0,05 0,010526316
0,025 0,008928571
0,01 0,0078125
0,0005 0,007194245
0,0001 0,007142857
Luego calculamos la pendiente d la recta en Excel elaborando para ello el valor de KM y Vmax

Quedando la ecuación de la recta: y = 0,0715x + 0,0071; Para hallar el valor de Vmax

dividimos el valor de la Unidad por el valor 0,0071
vmAX 140,84
quedando:

Luego procedemos a calcular el valor de KM que es la multiplicación Vmax por 0,0715

Quedando:
Km 10,07
Y su valor medio es:

Vmax/2 70,42
3. En una reacción catalizada enzimáticamente VMax= 0.2 moles/s y Km= 5mM.
Asume que la reacción sigue el modelo de Michaelis-Menten. ¿Cuál es el radio de
reacción cuando [S]= 10mM?

Se puede aplicar realizando los modos procedimientos calcular la ecuación o determinar

la ecuación de la recta de la reacción enzimático o aplicando la fórmula de mecheales-
metel aplicando las dos procedimientos comprobamos que nos da el mismo resultado
Dando como resultado que el radio de acción cuando el sustrato está a 10mM es 0,13
mol/s
 4. Los siguientes datos fueron conseguidos para una enzima en ausencia y presencia
de un inhibidor.
Graficar y calcular y todos los parámetros cinéticos que conozca.

[S] mM Vo µmoL/s Vo µmoL/s

1 8,6 24
2 16 40
4 28 58
10 42 70

Vo µmoL/s sin Vo µmoL/s con

[S] UM 103
Primeramente transformamos los datos de sustratos y inhibidor inhibidor
velocidad dividiéndolos por la unidad quedando: Hacemos la 1 0,11627907 0,041666667
gráfica en Excel de estos valores con un gradiente de
0,5 0,0625 0,025
dispersión para X y Y y así determinar la pendiente o la
ecuación lineal de la curva 0,25 0,035714286 0,017241379
0,1 0,023809524 0,014285714
Luego encontramos los valores de Km y Vmax

Sin inhibición
Con inhibición

vmAX 87,71 umol/ vmAXInhibidor 98,03

inhibidor
Km 9,13 Km 3

Inhibidor
vmAX < vmAX
Km ≠ Km
inhibidor

Dado que Vmax es menor que con el sustrato con inhibidor existe mayor
compatibilidad, a menor Km existe mayor afinidad de la enzima por el sustrato eso
quiere decir que el complejo con el inhibidor es estable el complejo ya que tiende a
formarlo mar afinidad al inhibirlo.

Conclusiones:

La presente investigación nos permitió conocer mucho mejor los procesos enzimáticos y
como funciona o cual es la utilidad de la cinética enzimática en los procesos
bioquímicos que suscitan a nivel de las estructuras celulares y los organismos y que es
empleado en mayor grado para las formulaciones química en medicamentos o la
industria este conocimiento debe estar presente en todo profesional los ejercicios que
también se llevaron como un tipo de investigación nos servirán para poder calcular y
determinar si una enzima con sustrato o sin sustrato reacciona o tienen afinidad con
estos, los videos y la información proporcionada por la docente nos sirvió de mucho
para realiza este tipo de investigación esperando que de parte de la docente exista la
retroalimentación y las correcciones pertinente sobre todo en los ejercicios para no
quedarnos con las dudas
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA

 Mc Kee T & J.,(2013) Bioquímica de las bases moleculares de la vida McGraw Hill
 Recuperado de : https://www.youtube.com/watch?v=LunDARY_i80
 Recuperado de : https://concepto.de/enzimas/#ixzz6NlViv1QV
 Recuperado de : https://www.youtube.com/watch?v=bY3c9gkpqmI
 Recuperado de: https://www.youtube.com/watch?v=wkyF67IfFlw
 Recuperado: http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz3.htm#kv
 Recuperado de https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/quimbiotec_termo_files/Temas
y programa de Termo/Tema 7_2.pdf