BIOQUÍMICA-PRÁCTICO

IV Ciclo de Estudios Semestre Académico 2021-II

SECCIÓN EP032

Informe 6: "DETERMINACIÓN DE TRIGLICÉRIDOS

EN PLASMA"
INTEGRANTES

• 2019205013 Arévalo Fernández, Yamely

• 2020123530 Bohórquez Coronado, Arantxa Marisol
• 2020131752 Muñoz Saavedra, Anghel Geanmarco
• 2020108213 Peláez López, Katty Cristina
• 2020131784 Peralta Villalobos, Denis Alexander
• 2019205434 Llontop Salazar, Fernando
• 2018114438 Chávez Córdova, Coraine Rashell
• 2020154633 Fuentes Chamba, Jose Enrique
• 2020108997 Díaz Ajip, Mell Fabiola
• 2020123735 Verona Castro, Blanca Fernanda

DOCENTE

Dra. Anaya Medina, Maribel Cecilia

CHICLAYO – PERÚ

28 de setiembre del 2021

I. INTRODUCCIÓN

El plasma representa el 55% del volumen total de la sangre. En este se encuentran

los tipos de células sanguíneas que conocemos como: glóbulos rojos o eritrocitos,
glóbulos blancos o leucocitos y a las plaquetas.

Los lípidos plasmáticos consisten en una parte de triglicéridos (TAG), dado que estos
lípidos son insolubles en agua se transportan en el plasma asociados a proteínas
anfipáticas, conocidas como apolipoproteínas, para posteriormente crear lo que
llamamos una lipoproteína.1

Los triglicéridos en el plasma derivan de las grasas que consumimos a diario mediante
nuestra dieta y se sintetizan en el cuerpo a partir de otras fuentes de energía como
los carbohidratos.

Las calorías que se ingieren en una comida y que los tejidos no utilizan de inmediato
se convierten en triglicéridos y se transportan a las células adiposas para su
almacenaje.

Su evaluación es importante para el diagnóstico y seguimiento de las hiperlipidemias

ya sean de origen genético o secundario a otras enfermedades. Valores elevados
aumentan el riesgo de arteriosclerosis y de enfermedad coronaria. 2

En esta oportunidad usaremos el método espectrofotométrico en base a una serie de

reacciones enzimáticas para determinar la concentración de triglicéridos en plasma.

La siguiente práctica se desarrolló con la finalidad de desarrollar los siguientes

objetivos:

1. Determinar la concentración de triglicéridos en plasma mediante un método

espectrofotométrico.
2. Comparar el valor obtenido de triglicéridos con los rangos de referencia.

2
II. MARCO TEÓRICO

Fundamento de los triglicéridos en el plasma sanguíneo

En circunstancias normales, los triglicéridos provienen de los ácidos grasos que

absorbemos de los alimentos a través de los intestinos y son producidos por el hígado.
Los triglicéridos ingresan al torrente sanguíneo desde dos órganos y son
transportados por una proteína especialmente diseñada para ellos: las lipoproteínas.
Se denominan quilomicrones a las lipoproteínas ricas en triglicéridos y se originan en
los intestinos después de las comidas, mientras que el hígado sintetiza otras proteínas
para transportar triglicéridos llamados VLDL, que es la abreviatura de "lipoproteína de
muy baja densidad". En los análisis de sangre, la suma de las concentraciones
plasmáticas de triglicéridos aportados por quilomicrones y VLDL aparece bajo el
nombre común de triglicéridos.3

Fundamento del método

Para determinar la concentración de triglicéridos en plasma, utilizaremos una serie de

reacciones enzimáticas que se inicia con la hidrólisis de los triglicéridos por acción de
la adipasa lipoproteica para dar como resultado glicerol y ácidos grasos.

El glicerol es fosforilado por acción de la glicerol-quinasa que utiliza al ATP como

donador de grupos fosfatos dando como productos glicerol 1 fosfato y ADP.

El glicerol 1 fosfato por acción del glicerol fosfato oxidasa produce peróxido de
hidrógeno y dihidroxiacetona fosfato. El peróxido de hidrógeno reacciona con la 4
aminofenazona y por acción de la peroxidasa forman un complejo de color rojo
denominado quinonimina, la intensidad de este color es proporcional a la cantidad de
triglicéridos que inició el proceso.

Fundamento de la reacción

Para que el método se pueda realizar, se necesita trabajar con un kit, el cual contiene
3 frascos diferentes, rotulados como:

• R1 = Buffer pH 7.5 + p Clorofenol

• R2 = Enzimas
• Estándar 200mg/dL

Y el reactivo de trabajo, que resultaría de la suma de R1 y R2.

3
 Utilizaremos como muestra de preferencia suero o plasma (Heparina o EDTA) libre de
hemólisis. La muestra debe tomarse con el paciente en ayunas. Los tubos y material
de vidrio deben estar limpios y libres de residuos de detergentes

Teniendo ya los tubos rotulados y con las concentraciones agregadas, dentro del
proceso de incubación que se realiza posteriormente, a baño maría, observamos el
desarrollo del color rojo de la quinonimina en los tubos “e y p”, y veremos claramente
que el blanco no desarrolla este color.

Seguidamente ya podemos leer convencionalmente en el espectrofotómetro la

densidad óptica u absorbancia del contenido de los tubos “e y p” a una longitud de
onda de 505 nm.

III. CUESTIONARIO

1. Señale las causas que producen incremento de triglicéridos plasmáticos

Los triglicéridos de la sangre suelen proceder generalmente de la comida puesto
que aumentan después de su consumo, de igual forma el hígado los segrega de
forma natural en momentos de ayudo, esto con la finalidad de mantener un aporte
continuo de energía al cuerpo.
Pero cuando hablamos de un aumento excesivo, es decir, hipertrigliceridemia,
suelen influir varios factores, entre ellos los genéticos, que incluyen cierto tipo de
genes relacionados con el aumento de triglicéridos en sangre, que tienen como
finalidad producir proteínas que se encargarían de la destrucción de triglicéridos,
luego tenemos a los factores ambientales que son los más importantes en la
causa de hipertrigliceridemias, están asociados a obesidad (abdominal), diabetes,
consumo de alcohol excesivo, hipotiroidismo4.
2. ¿Cómo se explica que algunas grasas sean liquidas y otras sólidas?
Las grasas son mezclas de triglicéridos, formados por 3 moléculas de ácidos
grasos y una de glicerol; las diferencias entre ellas dependen fundamentalmente
de su composición en ácidos grasos que, a su vez, se diferencian por el número
de átomos de carbono y de dobles enlaces.5
Hay dos tipos de ácidos grasos:
o Ácidos grasos saturados: Sólo tienen enlaces sencillos entre átomos de
carbono adyacentes; no contienen dobles enlaces, lo que les confiere una
gran estabilidad y la característica de ser sólidos a temperatura ambiente.
Predominan en los alimentos de origen animal, aunque también se
encuentran en grandes cantidades en algunos alimentos de origen vegetal.
o Ácidos grasos mono-poliinsaturados: Con dos o más dobles enlaces que
pueden reaccionar con el oxígeno del aire aumentando la posibilidad de
enranciamiento de la grasa. Los pescados y algunos alimentos de origen
vegetal, como los aceites vegetales, líquidos a temperatura ambiente.

4
3. ¿Por qué se debe consumir grasas insaturadas?
Los ácidos grasos poliinsaturados indispensables (AGPIs), ácido linoleico n-6 y
ácido linolénico n-3 se obtienen a través de la dieta y son precursores de los
ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga (AGPIs-CL) araquidónico (AA) y
docosahexaenoico (ADH), respectivamente. El consumo de AGPIs está
relacionado con un mejor desarrollo cerebral fetal y cognoscitivo del recién
nacido.
El consumo de AGPIs puede ser benéfico en el control de ciertas enfermedades
como la diabetes mellitus y la obesidad en la que los AGPIs activan a
PPARα estimulando la oxidación de lípidos y disminuyendo la resistencia a la
insulina y la esteatosis hepática.6
4. ¿Por qué razón la degradación de los triglicéridos proporciona más
energía que los carbohidratos y las proteínas?

Los triglicéridos proporcionan más del doble de energía por gramo que los
carbohidratos o las proteínas. Es por ello que, los excesos de carbohidratos,
proteínas y aceites; se depositan como triglicéridos en el tejido adiposo.
Teniendo así que los triglicéridos se degradan en ácidos grasos, y estos una vez
difundidos son distribuidos a los tejidos activos donde se metabolizan para sacar
energía. Será así que, al degradarse la utilización de las grasas como sustrato
energético varia estrechamente con el flujo sanguíneo en el tejido activo. Siendo
así, en comparación con los carbohidratos y las proteínas, es especialmente
importante para las fibras musculares de contracción lenta cuyo extenso riego
sanguíneo y numerosas mitocondrias las hacen ideales para el proceso de
degradación de la grasa.7

5. Explique la razón por la cual en la diabetes se encuentra elevado el nivel

de triglicéridos plasmáticos.
Teniendo en cuenta que, cuando los niveles de glucosa han estado elevados,
es común que los triglicéridos también aumenten, ya que por el contrario en el
caso del colesterol tenemos que en algunas veces puede permanecer en los
límites normales, o quizás más elevado, pero no como los triglicéridos.
Lo que nos da a entender que el azúcar que se consume en la dieta, los
carbohidratos; además de aumentar los niveles de glucosa en la sangre,
también elevan los niveles de triglicéridos; esto ocurre debido a que el azúcar
que entra al organismo se transforma en grasa (en triglicéridos), de tal forma
que al controlar los niveles de glucosa se controlan también los niveles de
triglicéridos.8

5
IV. MÉTODO
a. Equipos
• Espectrofotómetro o fotocolorímetro.
• Baño de agua a 37ºC.
• Reloj.
b. Materiales
• Kit de triglicéridos.
• Gradilla.
• Tips amarillos (10 – 200 µL) y azules (100-1000 µL).
• Tubos de vidrio 13x100 mL.
• Contenedores de seguridad o bolsas rojas de bioseguridad.
• Micropipetas o pipetas para medir volúmenes indicados.
• Propipeta.
• Guantes.
c. Reactivos
• Kit de triglicéridos:
R1 = Buffer pH 7.5 + p Clorofenol
R2 = Enzimas
• Estándar: solución de glicerol 2,26 mmol (equivale a 2 g/L de trioleína).
d. Muestra
Previo ayuno de 12 a 14 horas, se obtuvo plasma mediante la centrifugación
de la muestra de sangre utilizando una centrífuga clínica. Este proceso debe
realizarse en un tiempo no mayor a dos horas posteriores a la extracción de
la sangre. Los triglicéridos en suero son estables 3 días en refrigerador (2 -
10ºC). No congelar.
e. PROCEDIMIENTO
➢ Tomamos 3 tubos y los rotulamos como blanco estándar y problema.
➢ Agregamos 10 μL de la solución estándar en el tubo A y 10 μL de suero
en el tubo P, el blanco no lleva nada (Tener cuidado al pipetear los
volúmenes son muy pequeños use la pipeta adecuada).
➢ Seguidamente adicionamos 1 ml del reactivo de trabajo a cada uno de
los tubos
➢ Se incuban a 37°c por 5 minutos, se observa el desarrollo de un color
rojo de la quinonimina en los tubos e y p, el blanco no desarrolla color.
➢ En el espectrofotómetro a 505 nm. Calibrando con el blanco A 0 de
absorbancia, leemos los tubos E Y P

6
 f. CÁLCULO DE RESULTADOS

❖ Cálculo de concentración de triglicéridos en suero o plasma :

𝒎𝒈 𝑪 𝒆𝒔𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓
𝑻𝒓𝒊𝒈𝒍𝒊𝒄𝒆𝒓𝒊𝒅𝒐𝒔 𝒆𝒏 𝒑𝒍𝒂𝒔𝒎𝒂 ( ) = 𝑫𝑶 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 ×
𝒅𝑳 𝑫𝑶 𝒆𝒔𝒕𝒂𝒏𝒅𝒂𝒓

Valores de referencia

• Deseable: Menor 150 mg/dL.

• Moderadamente elevado: 150 – 199 mg/dL.
• Elevado: 200 – 499 mg/dL.
• Muy elevado: Mayor o igual 500 mg/dL.

❖ Realizamos la determinación de triglicéridos, asumiendo que el

estándar que no da la lectura es 0.380 de absorbancia y el problema
0.820 cual será la concentración de triglicéridos en esa muestra.
Paciente
DO DO Concentración
Estándar Muestra (mg/dl)
Valores 0.380 0.820 200

200
0.820 × = 431.57 = 431.6
0.380

V. RESULTADOS

Triglicéridos en plasma
Valoración
mg/dL
Paciente 431.6 Elevada

Los resultados obtenidos del paciente, de acuerdo con el rango dado para el
diagnóstico es elevado.

7
VI. DISCUCIÓN
Si bien los triglicéridos, nos aportan energía, sin embargo, es necesario
mantenerla contralada, ya que un exceso puede provocar diversas enfermedades
como: pancreatitis aguda, riesgo cardiovascular forman placas ateromatosas,
diabetes por resistencia a la insulina, hipotiroidismo.
En esta práctica utilizamos el método de cuantificación espectrofotométrica, con
el objetivo de determinar la cantidad de triglicéridos (mg/dL), en el plasma
sanguíneo. Es así como utilizamos una serie de reacciones enzimáticas.
Como bien sabemos se requiere determinar los niveles de triglicéridos a partir de
las muestras, y así compararlos con los valores de referencia. Según los datos
dados, logrados determinar:
• El paciente, obtuvo una concentración de 431,6 mg/dL, lo cual se encuentra
por encima de los valores normales antes descritos, por ende, su
concentración es elevada.

Siendo este resultado un indicador, que el paciente está en riesgo de sufrir

diferentes dislipidemias las cuales son causadas muchas veces por factores
hereditarios como también por una mala alimentación, rica en grasas, una vida
sedentaria (puesto que al no tener actividad física habrá una deficiencia de
oxígeno provocando acumulación de triglicéridos), fallos en las señales
hormonales o efecto secundario de tomar ciertos medicamentos (diuréticos,
estrógeno, esteroides, etc.). Por lo que se recomienda; realizar ejercicios,
consumir grasas saludables, evitar consumo de alcohol, etc.9

8
VII. CONCLUSIÓN
• Al comparar el resultado con los valores de referencia, concluimos
que nuestro paciente presenta una concentración elevada de
triglicéridos, ya que lo que se obtuvo esta entre el rango 200 – 499
mg/dL.
• El metabolismo de los triglicéridos plasmáticos abarca diferentes
procesos a nivel intestinal y del hígado. Debido a estos procesos
permitirá absorber los nutrientes de una comida de grasa, que serán
necesarios para el funcionamiento de nuestro organismo.

• El consumo de grasas insaturadas desempeña un papel fundamental

en el desarrollo cognitivo y en el control de ciertas enfermedades
como la diabetes mellitus.

9
VIII. Referencias Bibliográficas

1. Carvajal C. Lipoproteínas: metabolismo y lipoproteínas aterogénicas. Med.

Costa Rica. 2014; 31 (2): 88–94.
2. RLP la DF. TRIGLICÉRIDOS (GPO - PAP) [Internet]. Andina
Medica;2016[Consultado el 28 de septiembre de 2021]. Disponible en:
https://andinamedica.com.pe/wp-content/uploads/2016/08/VTK-
trigliceridos.pdf
3. ¿Qué son los triglicéridos? [Internet]. RiojaSalud;2021[Consultado el 28 de
septiembre de 2021]. Disponible en:
https://www.riojasalud.es/servicios/medicina-interna/articulos/que-son-los-
trigliceridos
4. Carbajal A. Manual de nutrición y lípidos[Internet].UCM;2013 [Consultado 28
de setiembre 2021]. Disponible en: https://www.ucm.es/data/cont/docs/458-
2013-07-24-cap-6-grasas.pdf
5. Rodriguez M, et al. Mecanismos moleculares de acción de los ácidos grasos
poliinsaturados y sus beneficios en la salud. Rev. invest. clin. 2005; 57(3):
457 – 472.
6. Programa Nacional de Prevención de la Diabetes. Fases de seguimiento:
grasas saturadas, insaturadas y trans[Internet].CDC;2020[Consultado 28 de
setiembre del 2021]. Disponible en:
https://www.cdc.gov/diabetes/prevention/pdf/spanish/sp_posthandout_sessi
on2.pdf
7. Zussa D. Metabolismo de las grasas, diferentes modos de programación del
ejercicio y sus efectos en la composición corporal [Internet]. La Plata; 2017
[Consultado el 28 de setiembre]. Disponible en:
http://www.memoria.fahce.unlp.edu.ar/tesis/te.1385/te.1385.pdf
8. Slim C. Colesterol y diabetes: recomendaciones nutricionales [Internet].
Salud digital;2015 [Consultado el 28 de setiembre 2021]. Disponible en:
https://www.clikisalud.net/colesterol-y-diabetes-recomendaciones-
nutricionales/#:~:text=Los%20niveles%20de%20colesterol%20y,implica%20
que%20un%20riesgo%20cardiovascular.
9. Soca M, Enrique P. Dislipidemias. ACIMED.2009;20(6):265-73.

10