Determinación de colesterol y triglicéridos

Sanchez Fregoso Angel

Grupo: 2D

Fecha de realización 07/11/2022

Fecha de entrega 13/11/2022
 DETERMINACIÓN COLESTEROL TOTAL Y
TRIGLICÉRIDOS

PRÁCTICA NO. 6

INTRODUCCIÓN

Liberadas por el páncreas a nivel de duodeno de manera conjunta con las sales biliares
emulsifican a los lípidos para que puedan ser transportados al interior del enterocito, donde
se combinan con proteínas formando la lipoproteína denominada quilomicrón. Esta
biomolécula contiene 90% de triglicéridos, ésteres de colesterol, para ingresar a los vasos
linfáticos y sangre sistémica. Posteriormente la enzima lipoproteína lipasa hidroliza a los
triglicéridos para que se incorporen a los tejidos. Los ácidos grasos libres se unen a la
albúmina para su transportación. Aproximadamente el 20% de los ácidos grasos de la dieta
entran en los hepatocitos, donde pueden ser utilizados como combustible energético o
esterifican al glicerol para formar triglicéridos endógenos. El hígado también sintetiza ácidos
grasos a partir de acetil-CoA (proceso anabólico), por lo tanto, constituye la reserva de
ácidos grasos y triacilgliceroles (endógenos) que pueden ser almacenados en los
adipocitos.

En hígado también se sintetizan las lipoproteínas plasmáticas. La diferencia entre estas,

depende de los lípidos que la integren, mismas que rigen su tamaño y densidad. La
lipoproteína de muy baja densidad o VLDL integrada en un 60% por triglicéridos,
fosfolípidos, colesterol y proteínas. La lipoproteína de baja densidad o LDL está formada en
un 50% por colesterol y la otra mitad por fosfolípidos, triglicéridos y proteínas también se
conoce como “aterógena”. La lipoproteína de alta densidad o HDL está compuesta en un
50% por proteínas y la otra mitad por fosfolípidos, colesterol y ésteres de colesterol.

El Colesterol y fosfolípidos forman parte de las membranas celulares. El colesterol es el

precursor de las hormonas esteroides y sales biliares. La concentración de colesterol
esterificado permite evaluar el metabolismo de los lípidos, como indicador de la función
hepática, renal (síndrome nefrótico), pancreática (pancreatitis), hipotiroidismo e
Hipertiroidismo.

En esta práctica cuantificaremos triglicéridos y colesterol mediante reacciones enzimáticas

coloridas, con la finalidad de tratar de identificar dislipidemias, síndrome nefrótico o riesgo
de arteriopatía coronaria. Recordemos que en cada reacción bioquímica estaremos
visualizando una reacción metabólica del organismo humano.

COMPETENCIAS DE
PRÁCTICA NO. 6
El alumno es capaz de:

Analizar e interpretar los niveles de triglicéridos y colesterol total con el

espectrofotómetro UV-Vis DR6000 para explicar los resultados obtenidos con
respecto a los valores de referencia de la técnica para poder sugerir una posibilidad
diagnóstica y tratamiento.
 CASO CLÍNICO COLESTEROL TOTAL Y TRIGLICÉRIDOS

PRÁCTICA NO. 6

Masculino de 32 años de edad que acude a la consulta por presentar cansancio, malestar
general cefalea recurrente que no cede con aines, poliurea, polidipsia. Antecedentes
Heredofamiliares: Abuelo paterno con Diabetes Mellitus, Abuela materna con Hipertensión
arterial sistémica, Padre con obesidad, desconoce otras patologías, Madre con obesidad,
Hipertensión arterial, en tratamiento por Dislipidemia. Exploración física: Talla 1.70 m.,
Peso 120 Kgs. TA de 150/90; FC: 96 latidos por minuto; FR: 18 por minuto, Temp: 37 C.
Cuello con lesiones hiperpigmentadas café a negruzcas, pobremente definidas, sin bordes
activos, con piel seca, no pruriginosas. Tegumentos y mucosas secos y Se decide solicitar
Exámenes de Laboratorio: Glucosa y perfil de lípidos. El Lab. reporta glucosa, ruidos
cardiacos rítmicos, sin agregados. Laboratorio: Glucosa: 320 mg/dl, Triglicéridos: 767
mg/dL, Colesterol:448 mg/dL, LDL:410 mg/dl, HDL de 35 mg/dl, EGO: glucosa positiva
(++). Se inicia tratamiento con insulina NPH 24 unidades cada 24 horas, Pravastatina 40
mg cada 24 horas, Bezafibrato 200 mg cada 8 horas.

Analiza el caso clínico y da respuesta a lo siguiente.

1) ¿Cuál sería la explicación bioquímica de la poliuria y polidipsia?
Probablemente por los antecedentes familiares, el peso excesivo y los niveles de glucosa
elevados, muy probablemente allá desarrollado diabetes.
2) En base a los datos de la exploración física, ¿Qué tipo de obesidad presenta el
paciente?
Obesidad tipo 2 por el exceso de sobrepeso.
3) En base a sus antecedentes familiares y los estudios de lab. ¿Qué tipo de
dispilidemia presenta el paciente?
Tipo 2b porque tiene triglicéridos y colesterol alto, más la lipoproteína
LDL alta.
4) Explica la relación bioquímica entre la Obesidad y la Dislipidemia
La acumulación del exceso de lípidos se convierte en tejido adiposo, debido a que es un
almacén del cuerpo para los ácidos grasos, sin embargo, al solo almacenar y no quemarlos
con actividad física, este se puede traer problemas mortales si no se cuida.
5) Explica la relación bioquímica entre la Dislipidemia y la Diabetes Mellitus
El alto consumo de azucares causo que se convirtieran en grasa al oxidarse y por lo tanto
también la insulina endógena no fue suficiente para controlar los niveles de glucosa.
6) Explica la relación bioquímica entre la Dislipidemia y la Hipertensión Arterial
La obesidad causa problemas secundarios como la hipertensión ya que no existe actividad
física y por lo tanto el corazón debe bombear mas sangre y esto cansa al cuerpo mas rápido.
7) Explica la farmacodinamia de la Insulina en el metabolismo de los carbohidratos,
lípidos y proteínas.
Actua tal cual como la insulina que produce el pancreas, se une a los receptores
de insulina en células musculares y adiposas, facilitando la absorción de la
glucosa, sin embargo existen casos donde la dosis puede ser mayor si existe
una resistencia a la insulina.
8) En base al metabolismo del colesterol y de la HMGo reductasa, ¿Cuál sería el mejor
horario para la toma de la pravastatina?
Por la noche es preferible, ya que de esa manera se puede entrar en ayuno y hace
efecto en el colesterol y evitan que se oxiden y se conviertan en vldl.
9) En base al metabolismo de los triacilgliceroles, ¿Cuál sería el mejor horario para la
toma de Bezafibrato?
Reduce en forma moderada la síntesis hepática de las VLDL también bloquea la
lipólisis del tejido adiposo y reducir la concentración de ácidos grasos libres
circulantes, privando así al hígado de sustrato para sintetizar triglicéridos.
 Tema de estudio autodirigido: Colesterol, Triacilgliceroles, Lipoproteínas
Reestructuraron: Dr. Carlos Daniel Zavala, Dr. José Luis Ramos

CONCLUSION. (del caso clínico de su paciente)

Debido al exceso de peso, y por los antecedentes familiares, desarrollo diabetes de tipo 2 mal
controlada y los problemas que presenta a la llegada a consulta puede ser causado por problemas
de indoles cerebral y cardiovascular.

PREGUNTAS EXPLORATORIAS
PRÁCTICA NO.6

1) Lipoproteína que transporta un elevado porcentaje de triacilglicerol.

Quilomicron
2) Que Apoproteína se transfiere a la VLDL y quilomicrones y cuya función es activar
a la lipoproteína lipasa para que de los tejidos extrahepáticos incorporen
triglicéridos.
Apo C2
3) Lipoproteína que se asocia a la aterosclerosis e infarto
LDL
BIBLIOGRAFIA CONSULTADA DEL CASO CLÍNICO Y PREGUNTAS PREVIAS

Isaacs, D., Kruger, D. F., Shoger, E., & Chawla, H. (2022). Patient perceptions of satisfaction and quality of
life regarding use of a novel insulin delivery device. Clinical Diabetes: A Publication of the American
Diabetes Association. https://doi.org/10.2337/cd22-0034

Crecer saludable: Grasa, colesterol y más. (2021). Pediatric Patient Education.

https://doi.org/10.1542/peo_document046.spanish

Martínez-García, G., Rodríguez-Ramos, M., Santos-Medina, M., Mata-Cuevas, L. A., Carrero-Vázquez, A.

M., & Chipi-Rodríguez, Y. (2022). Impacto del índice triglicéridos-glucemia en la mortalidad intrahospitalaria
por infarto agudo del miocardio. Resultados del registro multicéntrico RECUIMA. Gaceta medica de Mexico,
158(2). https://doi.org/10.24875/gmm.21000628
 DESARROLLO EN EL LABORATORIO
PRÁCTICA NO. 6

Fundamentos

Colesterol: La enzima colesterol esterasa hidroliza los esteres de colesterol y ácidos

grasos libres, colesterol oxidasa, oxida al colesterol para formar 4-colestenona y peróxido
de hidrógeno, la peroxidasa cataliza la oxidación con peróxido de hidrógeno de 4-
aminofenazana con la subsecuente copulación de p-hidroxibenzensulfonato, el producto
final es un colorante quinineimina el cual absorbe a 520 nm. La intensidad del color es
directamente proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra.

Triglicéridos: La lipasa hidroliza a los Tg. a glicerol y ácidos grasos, el glicerol es fosforilado
por el ATP en presencia de glicerol cinasa para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adeosina-
5-difosfato. El G3P es convertido Dihidroxicetona fosfato y peróxido de hidrógeno mediante
la acción de oxido glicerofosfato. El peróxido de hidrógeno reacciona entonces con 4-
aminoantipirina y 3-hidroxi-2,4,6-ácido tribomobensoico , reacción catalizada por
peroxidasa para producir un tinte quinoneimino color rojo. La intensidad del color a 540 nm
es directamente proporcional a la concentración de Tg. presente en la muestra.

Material por equipo

❖ 1 tubos c/tapón rojo o amarillo
❖ Agujas vacutainer o jeringas de 5 ml.
❖ 1 Holder (en caso de usar agujas vacutainer)
❖ 1 ligadura de látex
❖ Torundas con alcohol y secas
❖ 6 celdas de 10 mm para espectrofotómetro
❖ 1 micropipeta de 1000 µl
❖ Puntillas azules para micropipeta de 1000 µl
❖ 1 micropipeta de 10-100 µl
❖ Puntillas amarillas para micropipeta de 10-100 µl

Material por grupo.

❖ 1 centrifuga
❖ Espectrofotómetro UV-Vis DR6000

El alumno traerá el día de la práctica (equipo)

NOTA: preguntar al docente, si traerá usted al paciente y que indicaciones debe dar para
la toma de muestra

TRABAJO PRÁCTICO
PRÁCTICA NO. 6
1. Obtención de muestras (el docente le indicara si trae un paciente)
2. Centrifugar la muestra a 3000 rpm durante 5 minutos
3. Entregar la muestra al docente para su proceso con el espectrofotómetro
4. El docente le entregará resultados del paciente conocido.
5. Analizar los parámetros y establecer un diagnóstico presuntivo o final (En base a
resultados e información bibliográfica).
6. Sugerir un tratamiento
 PROCEDIMIENTO DE COLESTEROLTOTAL
1. Longitud de onda 505 nm
2. Temperatura 37°C
3. Ajustar espectro a cero con agua destilada
4. Pipetear en tubos de reacción
Tubo Blanco Patrón Muestra
1 Reactivo (mL) 1.0 1.0 1.0
2 Patrón (µL) — 10 —
3 Muestra (µL) — — 10

5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 °C

6. Leer absorbancia del patrón y la muestra con respecto al blanco de reactivo
7. Leer absorbancias.
CÁLCULOS:
Suero o Plasma:
𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝑆𝑢𝑒𝑟𝑜: ∙ 200 (𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛) = 𝑑𝐿
𝑑𝑒 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙
𝐴𝑏𝑠 𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛

VALORES DE REFERENCIA:
Suero: menor de 200 mg/dL Normal
200-239 mg/dL Moderado
240 mg/dL o más alto.

PROCEDIMIENTO TRIGLICÉRIDOS
1. Longitud de onda 505 nm
2. Temperatura 37°C
3. Ajustar espectro a cero con agua destilada
4. Pipetear en tubos de reacción
Tubo Blanco Patrón Muestra
1 Reactivo (mL) 1.0 1.0 1.0
2 Patrón (µL) — 10 —
3 Muestra (µL) — — 10

5. Mezclar e incubar 5 minutos a 37 °C o 10 min a 15°-25 °C

6. Leer absorbancia del patrón y la muestra con respecto al blanco de reactivo
7. Leer absorbancias.
CÁLCULOS
Suero o Plasma
𝐴𝑏𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑡𝑟𝑎 𝑚𝑔
𝑆𝑢𝑒𝑟𝑜: ∙ 200 (𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑎𝑡𝑟ó𝑛) = 𝑑𝐿
𝑑𝑒 𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐𝑒𝑟𝑖𝑑𝑜𝑠
𝐴𝑏𝑠 𝑃𝑎𝑡𝑟ó𝑛

VALORES DE REFERENCIA
Hombres: 40-160 mg/dL
Mujeres: 35-135 mg/Dl
 REPORTE INDIVIDUAL
PRÁCTICA NO. 6 COLESTEROL TOTAL Y TRIGLICÉRIDOS

Título de la práctica
Determinación colesterol total y triglicéridos

Nombre del alumno Sanchez Fregoso Angel______Gdo. 2____Gpo. D

Fecha de realización 7 de noviembre de 2022 Fecha de entrega 13 de noviembre de

2022

Fecha de Revisado

ANALISIS E INTERPRETACION DE RESULTADOS

Paciente femenina muy cooperadora para la extracción sanguínea, y se analizó correctamente.
Abs muestra/ 0.405 x 200 = 139
Abs muestra /0.361 x 200 = 165
Colesterol: 139 (normal dentro de los rangos)
Triglicéridos: 165 (elevado)

Valores normales
Colesterol: -200 mg-dL
Triglicéridos: 40-160 (hombres), 35-135 (mujeres).

CONCLUSION.
Es importante conocer los valores normales de estos metabolitos, porque si no existe un
control nos pueden llevar a problemas severos (diabetes, una dislipidemia o un infarto
agudo al miocardio).
En el análisis de este paciente obtuvimos datos de colesterol muy normales, sin embargo, el
nivel de triglicéridos se encuentra alto, y esto ocurre porque la paciente comento que usa
anticonceptivos y metformina, son dos fármacos que afectan al metabolismo de ácidos
grasos, por lo tanto, es normal que se allá elevado los niveles, aunque si debe tomar cuenta
y llevar una dieta en grasos que pueden elevar mas este nivel.

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA EN EL ANÁLISIS DE RESULTADOS (3 libros o

artículos originales recientes y profesionales
Isaacs, D., Kruger, D. F., Shoger, E., & Chawla, H. (2022). Patient perceptions of satisfaction and quality of
life regarding use of a novel insulin delivery device. Clinical Diabetes: A Publication of the American
Diabetes Association. https://doi.org/10.2337/cd22-0034

Crecer saludable: Grasa, colesterol y más. (2021). Pediatric Patient Education.

https://doi.org/10.1542/peo_document046.spanish

Martínez-García, G., Rodríguez-Ramos, M., Santos-Medina, M., Mata-Cuevas, L. A., Carrero-Vázquez, A.

M., & Chipi-Rodríguez, Y. (2022). Impacto del índice triglicéridos-glucemia en la mortalidad intrahospitalaria
por infarto agudo del miocardio. Resultados del registro multicéntrico RECUIMA. Gaceta medica de Mexico,
158(2). https://doi.org/10.24875/gmm.21000628
 EVALUACIÓN
PRÁCTICA NO. 6 COLESTEROL TOTAL Y TRIGLICÉRIDOS
INDICADORES EXCELENTE BUENO REGULAR DEFICIENTE

REPORTE DE Cumple con todos los Falta menos de 1 dato Falta más de la mitad No presenta los datos
PRACTICA datos llenados en el llenado en el reporte de de los datos solicitados.
10% reporte de práctica. práctica. solicitados.
Título de la Práctica.
Nombre del alumno.
Grado/Grupo/Sección
Fecha de realización.
Fecha de Entrega.

ANALISIS E • Recopila y ordena • Recopila y ordena los • No Recopila y ordena • No presenta

INTERPRETACION los materiales y materiales y equipos de los materiales y materiales y
DE RESULTADOS. equipos de forma incompleta- equipos de equipos de
40% laboratorio, • No Realiza esquemas laboratorio, acorde a laboratorio para su
adecuados a su completos de sus su práctica de lab. practicas
práctica de lab procedimientos en el lab. • No Identifica los • No identifica los
• Realiza su diagrama • No realiza el pipeteo de R.P.B.I. y simbología R.P.B.I.
de flujo de forma manera adecuada en la disposición de • No realiza su
congruente • Faltan cálculos de residuos. diagrama de flujo.
• Realiza el absorbancias. • No Realiza • No realiza el pipeteo
procedimiento de esquemas o correcto
pipeteo correcto imágenes de los • No realiza lecturas
• Manejo del materiales y equipos adecuadas en el
espectrofotómetro utilizados en la espectrofotómetro
adecuadamente práctica. • No realiza cálculos
• Realiza los cálculos • No realiza el pipeteo para los resultados
de las lecturas de adecuadamente
absorbancias • No maneja
• Manejo de residuos adecuadamente el
de acuerdo a espectrofotómetro
R.P.B.I.
CONCLUSION. Redacta con sus Redacta con sus propias No redacta las No redacta las
40% propias palabras, si palabras si se cumplen o conclusiones, no conclusiones.
se cumplen o no las no las competencias, analizando los
competencias en pero no considera resultados.
base al análisis de los completamente el
resultados. análisis de resultados.

BIBLIOGRAFIA Presenta por lo Presenta menos de 2 Presenta menos de 1 No presenta

10% menos 3 bibliografías bibliografías consultadas bibliografía consultada bibliografía.
Bibliografía (mínimo consultadas con y datos completos. y datos incompletos.
3) datos completos.
Nombre del Autor.
Nombre del Libro.
Editorial.
Edición.
Año.
Paginas.
Dirección electrónica.

SUBTOTAL

TOTAL

CALIFICACION