BIOQUÍMICA-PRÁCTICO

IV Ciclo de Estudios Semestre Académico 2021-II

SECCIÓN EP032

Informe 5: "Determinación de glucosa en plasma"

INTEGRANTES

• 2019205013 Arévalo Fernández, Yamely

• 2020123530 Bohórquez Coronado, Arantxa Marisol
• 2020131752 Muñoz Saavedra, Anghel Geanmarco
• 2020108213 Peláez López, Katty Cristina
• 2020131784 Peralta Villalobos, Denis Alexander
• 2019205434 Llontop Salazar, Fernando
• 2018114438 Chávez Córdova, Coraine Rashell
• 2020154633 Fuentes Chamba, Jose Enrique
• 2020108997 Díaz Ajip, Mell Fabiola
• 2020123735 Verona Castro, Blanca Fernanda

DOCENTE

Dra. Anaya Medina, Maribel Cecilia

CHICLAYO – PERÚ

07 de septiembre del 2021

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 ÍNDICE DE CONTENIDO

I. INTRODUCCIÓN ............................................................................................................ 3
II. MARCO TEÓRICO ......................................................................................................... 4
Generalidades de la glucosa ................................................................................................. 4
Fundamento del método ........................................................................................................ 4
Fundamento de la reacción ................................................................................................... 4
III. CUESTIONARIO ............................................................................................................ 5
1. Explicar qué es la glucemia postprandial…………………………………………………..5
2. Sintetizar la forma de cómo se almacena la glucosa en el hígado y los músculos…...5
3. Argumentar que sucede si el nivel de azúcar en sangre en ayunas es de 0.60 g / L,
¿es hipoglucemia? "…………………………………………………………………………5
4. En que otra muestra biológica se puede determinar la glucosa………………………...6
5. Explicar el mecanismo de acción de la metformina………………………………………6
IV. MÉTODO ........................................................................................................................ 7
EQUIPOS: .............................................................................................................................. 7
MATERIALES:........................................................................................................................ 7
REACTIVOS:.......................................................................................................................... 7
MUESTRA: ............................................................................................................................. 7
PROCEDIMIENTOS: ............................................................................................................. 8
V. RESULTADOS……………………………………………………………………………….8
VI. DISCUSIÓN .................................................................................................................. 10
VII. CONCLUSIONES ......................................................................................................... 11
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………………….12

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I. INTRODUCCIÓN

A raíz de la alimentación, los mamíferos (a excepción de rumiantes) obtienen

glucosa, siendo un monosacárido, denominado como el principal combustible
metabólico, y por ende para el mantenimiento de la homeostasis. Además, gracias a
la hormona insulina, la glucosa puede atravesar del torrente sanguíneo a las células.

Sin embargo, el desequilibrio de este ya sea una insuficiencia o exceso en la sangre,

conduce a una patología muy conocida hoy en día; el cual es llamado diabetes
mellitus. Por ende, el estudio y el control de este azúcar en la sangre es de suma
importancia ya que podría ayudarnos como un método de prevención y por ende
mejorar la calidad de vida del paciente.

Con la ayuda de un método espectrofotómetro, quien mide la intensidad de luz

(energía radiante o radiación electromagnética) para determinar la concentración del
analito presente en una muestra 1; y en este caso nos permitirá ver la intensidad de
color proporcional a la concentración de glucosa, pasando por una secuencia de
reacciones enzimáticas, presente en el suero plasmático.

A continuación, en la práctica de laboratorio, se ejecutó para desarrollar y

comprender hechos procedimentales con el objetivo de:

1. Determinar el nivel de glucosa en plasma.

2. Compararemos los rangos obtenidos de las muestras de suro, orina y líquido
cefalorraquídeo, con la referencia.

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II. MARCO TEÓRICO

Generalidades de la glucosa

La glucosa es el azúcar principal en el organismo, siendo un monosacárido con

forma molecular C6H12O6, que se encuentra dentro
de la sangre, esto debido a los alimentos ingeridos
a diario, llevándola a todas las células del cuerpo y
usada como fuente de energía. Es así como, las
enzimas comienzan con el proceso de
descomposición con ayuda del páncreas, el cual
produce hormonas como la insulina, ayudando a
procesar a la glucosa.

Asimismo, es esencial tener un control óptimo de los niveles normales de glucosa en

sangre, siendo aproximadamente entre 70 mg / dL y 140 mg / dL. Sin embargo, el
desequilibrio, puede causar múltiples patologías.

❖ HIPOGLUCEMIA: Condición caracterizada por bajos niveles de glucosa e la

sangre, aproximadamente menos de 70 mg / dL.

❖ HIPERGLUCEMIA: Podemos encontrar como la enfermedad más sonada a la

Diabetes, debida a anormalidades en la secreción y/o acción de la insulina. En
pocas palabras es el exceso de azúcar en la sangre.

Fundamento del método

Se utilizó el método de cuantificación espectrofotométrica, en la cual se evaluó la

cantidad de glucosa (mg/dL) en el plasma sanguíneo.

Fundamento de la reacción

La glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una mezcla de las
enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa. Primero, la glucosa es oxidada a ácido
glucónico por la acción de la enzima GOD (Glucosa oxidasa), liberándose como
producto H2O2.

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III. CUESTIONARIO
1. Explicar qué es la glucemia postprandial
Definimos a la glucemia postprandial, como al nivel de glucosa en la sangre
después de las comidas. Puesto que, luego de cada comida, la glucosa se eleva
de una manera moderada (< 140 mg/dl); es así como, durante las dos primeras
horas, la producción de la insulina aumenta mientras que la del glucagón
disminuye3.
Por ende, cuando el nivel de la azúcar en la sangre desciende, la insulina
secretada se degrada, finalizando la reacción en aproximadamente 2 a 3 horas
después de comer.
Además, algunos autores la presentan como el mejor indicador de la diabetes
(> 140 mg/dl) que la glucosa en ayunas.

2. Sintetizar la forma de cómo se almacena la glucosa en el hígado y los

músculos.
Como sabemos, el músculo cumpla una función importante, como lo es, ser una
de las principales reservas de glucógeno en el cuerpo. Sin embargo, la cantidad
almacenada depende de varias variables, tales como, la dieta, la masa muscular
de la persona y su condición física del sujeto.
Es así, como la glucosa almacenada en el glucógeno muscular se presenta
como fuente biodisponible propia del músculo; además, juega un papel
fundamental en la regulación y señalización, así como en el control metabólico
de las células musculares4.

3. Argumentar que sucede si el nivel de azúcar en sangre en ayunas es de

0.60 g / L, ¿es hipoglucemia?"

Primero tenemos que saber que se considera como valor normal del azúcar en
la sangre en ayunas al valor entre 70 a 100 mg/dl, que vendría a ser 0.7 g/l a 1
g/l Si el nivel de azúcar en la sangre en ayunas es menor estaríamos hablando
de una hipoglucemia4. Luego de lo mencionado podemos decir que al presentar
el paciente un nivel de azúcar en la sangre en ayunas de 0.6 g/l sí
correspondería a una hipoglucemia.

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4. En que otra muestra biológica se puede determinar la glucosa.
Es muy común obtener la glucosa a través de una muestra de sangre, pero
también podemos obtenerla a través de una muestra de orina, que si esta es
una muestra separada sería mejor utilizar orina fresca; también podemos llegar
a determinar la glucosa en una muestra del líquido cefalorraquídeo, pero esta
debe analizarse inmediatamente después de obtener la muestra 6.

5. Explicar el mecanismo de acción de la metformina.

La metformina va a reducir la producción hepática de glucosa a través de una
inhibición transitoria de la cadena respiratoria mitocondrial en condiciones
fisiológicas, la metformina presenta carga positiva lo que va a facilitar su difusión
pasiva a través de la membrana plasmática del epatocito, en el interior de la
célula es conducida hasta la mitocondria por el transportador de cationes
orgánicos oct1, la carga positiva de la metformina facilita su acumulación dentro
de la matriz de la mitocondria activada produciendo una inhibición de la cadena
respiratoria mitocondrial específicamente a nivel del complejo 1 que como
consecuencia se reducirá la oxidación del dinucleotido de nicotinamida y
adenina y de la bomba de protones de la membrana mitocondrial que también
disminuye el consumo de oxígeno con la consiguiente reducción en la síntesis
de adenosina trifosfato7.
De lo ya mencionada se va a derivar un descenso en el estatus energético del
hepatocito que produce una inhibición transitoria de la neo glucogénesis; como
consecuencia de la depresión de adenosina trifosfato se produce la activación
de la proteína quinasa lo que ocasiona una inhibición de la producción de
glucosa por déficit en la expresión del gen de la neglucogenesis, paralelamente
se manifiesta una reducción de la lipogénesis hepática y un incremento de la
sensibilidad a la insulina en los tejidos hepático, muscular y adiposo 7.

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IV. MÉTODO

EQUIPOS:

• Espectrofotómetro UV-VIS
• Equipo de baño de María
• Centrífuga
• Cronómetro

MATERIALES:

• Micropipetas
• Kit de glucosa
• Tips amarillos (10-200 uL) y azules (100-1000uL)
• Cubetas del espectrofotómetro
• Tubos de vidrio de 13x100 ml
• Guantes quirúrgicos de látex
• Gradilla para tubos de ensayo
• Bolsa de bioseguridad

REACTIVOS:

• S. Standard (solución de glucosa 100 mg/dl)

• A. Reactivo A

MUESTRA:

1. Primero debemos obtener el suero de la manera usual o plasma en caso de

utilizar anticoagulante.
2. Luego debemos colocar el tubo en una centrifuga a 3000 rpm durante 5 minutos.
3. De esta manera vamos a obtener el suero
PROCEDIMIENTOS:

1. En tres tubos de ensayo previamente ya rotulados vamos a colocar según lo que

se nos mencione en el esquema:
REACTIVOS BLANCO ESTANDAR PROBLEMA

SUERO (uL) - - 10

ESTÁNDAR (uL) - 10 -

REACTIVO DE 1 1 1
TRABAJO (mL)

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 2. Luego mezclamos e incubamos durante 5 min a 37°C.
3. Enfriamos y leeos en un espectrofotómetro a 505 nm, frente al blanco.
4. El color de la reacción final es estable durante 30 min, por lo que la absorbancia
debe ser leída dentro de este tiempo.
5. Por último, notamos los resultados de densidad óptica (DO)de los tubos ST y P.

V. RESULTADOS

Para poder obtener los resultados en esta práctica hemos tomado en cuenta la
siguiente fórmula que nos arroja la glucosa de la muestra en g/dl:

• DO= Densidad Óptica

• MP= Muestra Problema

Glucosa en suero (mg/dL)= DO MP x Concentración estándar

Densidad Óptica Estándar

Para ello hay que tener en cuenta la conversión de unidades:

Glucosa (mol /L) = Glucosa (mg / dL) x 0.0555
Teniendo en cuenta los datos brindados que son:
1. DO de la muestra (MP) paciente 1: 0.148
2. DO de la muestra (MP) paciente 2: 0.723
3. DO de la muestra (MP) paciente 3: 0.756
4. DO de la muestra (MP) paciente 4: 1.352
• Si la DO del estándar: 0.731
• La concentración del estándar: 100 mg/dL
Realizaremos el cálculo de la concentración de la glucosa con ayuda de la fórmula
obteniendo los siguientes resultados:
Paciente 01:
𝟏𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝒅𝑳
Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟎, 𝟏𝟒𝟖 ×
𝟎,𝟕𝟑𝟏

Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟐𝟎. 𝟐𝟓 𝒎𝒈/𝒅𝑳

Glucosa (𝒎𝒏𝒐𝒍
𝒅𝑳
) = 𝟏, 𝟏𝟐𝟑 𝒏𝒎𝒐𝒍/𝒅𝑳

Paciente 02:
𝟏𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝒅𝑳
Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟎, 𝟕𝟐𝟑 ×
𝟎,𝟕𝟑𝟏

Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟗𝟖, 𝟗𝟏𝒎𝒈/𝒅𝑳

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 Glucosa (𝒎𝒏𝒐𝒍
𝒅𝑳
) = 𝟓, 𝟒𝟖𝟗 𝒏𝒎𝒐𝒍/𝒅𝑳

Paciente 03:
𝟏𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝒅𝑳
Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟎, 𝟕𝟓𝟔 ×
𝟎,𝟕𝟑𝟏

Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟏𝟎𝟑, 𝟒𝟐𝒎𝒈/𝒅𝑳

Glucosa (𝒎𝒏𝒐𝒍
𝒅𝑳
) = 𝟓, 𝟕𝟑𝟗 𝒏𝒎𝒐𝒍/𝒅𝑳

Paciente 04:
𝟏𝟎𝟎 𝒎𝒈/𝒅𝑳
Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟏, 𝟑𝟓𝟐 ×
𝟎,𝟕𝟑𝟏

Glucosa (𝒎𝒈
𝒅𝑳
) = 𝟏𝟖𝟒, 𝟗𝟓𝒎𝒈/𝒅𝑳

Glucosa (𝒎𝒏𝒐𝒍
𝒅𝑳
) = 𝟏𝟎, 𝟐𝟔𝟒 𝒏𝒎𝒐𝒍/𝒅𝑳

• Tabla de valores del resultado:

Muestra DO de la Concentración DO Glucosa en la Resultado

muestra estándar estándar sangre

Paciente 01 0.148 100 mg/dl 0.731 20.25 mg/dl HIPOGLUCEMIA

Paciente 02 0.723 100 mg/dl 0.731 98.91 mg/dl NORMOGLICEIA
Paciente 03 0.756 100 mg/dl 0.731 103.42 mg/dl HIPERGLUCEMIA
Paciente 04 1.352 100 mg/dl 0.731 187.96 mg/dl HIPERGLUCEMIA

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VI. DISCUSIÓN

Al estudiar la glucosa, debemos tener en cuenta que es fundamental tenerla

controlada, ya que un desequilibrio en el cuerpo puede causar: hipoglucemia e
hiperglucemia.
En la presente práctica se utilizó el método de cuantificación espectrofotométrica 1, el
cual leyó el nivel de absorbancia a base del color final de la reacción 1, con el
propósito de evaluar la cantidad de glucosa (mg/dL) en el plasma sanguíneo. Es así
como, se produjo una serie de reacciones enzimáticas, ya que la glucosa al
encontrarse con el suero por reacción de la glucosa oxidasa, se convirtió en ácido
glucónico y peróxido de hidrógeno. De tal manera que, este último, es utilizado por la
peroxidasa para oxidar a la 4-aminofenazona y al fenol, dando lugar a la Quinonimia
(compuesto coloreado).
Como bien sabemos, se requiere determinar los niveles de glucosa a raíz de las
muestras, para así poder comparar con los valores de referencias otorgados. Por
ende, para la elaboración de los resultados, según los valores normales
establecidos, la glucosa en plasma es entre 70 y menos de 100 mg/dL, se
determinó:
o 1° Paciente: valora en el rango de hipoglucemia, ya que obtuvo 0,25 mg/dL
de glucosa en plasma.
o 2° Paciente: valora en el rango de normoglucemia, ya que obtuvo 98,91
mg/dL de glucosa en plasma.
o 3° Paciente: valora en el rango de hiperglucemia, ya que obtuvo 103,42
mg/dL de glucosa en plasma.
o 4° Paciente: valora en el rango de hiperglucemia, ya que obtuvo 184,95
mg/dL de glucosa en plasma.
De esta manera podemos concluir que la hiperglucemia va en aumento, ya que
según los resultados 2 de cada 4 pacientes tienen hiperglucemia, por lo que se
puede deducir una gran cantidad de causas, tales como el sedentarismo, obesidad,
baja calidad de alimentación, etc. Caso contrario con la hipoglucemia, cuyas causas
en su mayoría vienen a ser por falta ingreso calórico, exceso de insulina, entre otros.
Habiendo desarrollado el método y discutido los resultado, podemos concluir; si bien
el desarrollo de la práctica no fue de manera presencial; podemos deducir que la
glucosa, es un importante gestor de energía para el correcto metabolismo; sin
embargo, es preciso aclarar que el exceso o déficit, ocasiona enfermedades en el
organismo; además el exceso de esta está fuertemente ligada al Diabetes,
enfermedad muy recurrente hoy en día.

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VII. CONCLUSIONES

❖ Determinamos la concentración de glucosa en plasma, a través del

espectrofotómetro, con los reactivos de solución de glucosa y solución
conteniendo glucosa oxidasa, y gracias a ello pudimos tener una apreciación
más clara de la glucosa libre en el suero.

❖ Se determinó la cantidad de glucosa en plasma a través de un método

espectrofotométrico cuantitativo, por el cual obtuvimos los siguientes resultados
en mg/Dl para cada paciente: 1° (20,25 1), 2° (98,91), 3° (103,42) y 4° (184,95).

❖ A continuación, comparamos los rangos establecidos con los diferentes

resultados obtenidos, ya que se debe valorar el estado de cada paciente en:
hiperglucémico, hipoglucémico y normoglucemico. Por tanto, los resultados
obtenidos nos dicen que el primer paciente presenta hipoglucemia, el segundo
en normoglucemia y, por último, el tercero y el cuarto valoran en hiperglucemia.

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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. ¿Qué es un espectrofotómetro? [Internet].Xrite;2021[Consultado el 06 septiembre

2021]. Disponible en: https://www.xrite.com/es/learning-color-education/other-
resources/what-is-a-spectrophotometer
2. Rodwell V, Bender D, Botham K, Kennelly P, Weil P. Harper, Bioquímica ilustrada.
31° edición. México: McGraw-Hill; 2018. p. 141-143.
3. Haldeman C, Cunningham L, Turley R. Glucosa posprandial de dos horas [Internet].
Health Library; 2020[Consultado el 06 septiembre 2021]. Disponible en:
https://myhealth.ucsd.edu/Spanish/RelatedItems/167,glucose_two_hour_postprandial_ES
4. Viribay A. Glucógeno: ¿Dónde se almacena en el cuerpo humano? [Internet].
Glut4science. 2019 [Consultado el 06 septiembre 2021]. Disponible en:
https://glut4science.com/publicaciones/entrenamiento-nutricional/glucogeno-almacen-
cuerpo-higado-musculo-cerebro-rendimiento/60
5. Guías ALAD sobre el Diagnóstico, Control y Tratamiento de la Diabetes Mellitus Tipo
2 con Medicina Basada en Evidencia Edición 2019 [Internet]. Revista de la ALAD;
2021 [Citado 06 septiembre 2021]. Disponible en:
https://www.medicinainterna.org.uy/wp-content/uploads/2017/11/2993-6797-rumi-2-
03-00051-1.pdf
6. Mandal A. Medición de la glucosa del azúcar de sangre [Internet]. News-medical.net.
2009 [Citado 06 septiembre 2021].Disponible en: https://www.news-
medical.net/health/Blood-Sugar-Glucose-Measurement-(Spanish).aspx
7. Castro D, Castro M. La metformina [Internet]. Medigraphic; 2006 [Citado el 06 de
setiembre 2021]. Disponible: https://www.medigraphic.com/pdfs/medintmex/mim-
2006/mim065k.pdf

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