LABORATORIO 05

TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO Y EL CULTIVO

DE MICROORGANISMOS
Contenidos

Objetivo y definición

Materiales

Procedimiento

Conclusiones
 Indicador de logro
Al finalizar la sesión serás capaz de:

• Adquirir conocimientos sobre la separación de

microorganismos como colonias individuales a partir de
mezclas microbianas mediante técnicas de aislamiento.

• Propagar cepas microbianas mediante técnicas de

trasplante y conocer las características coloniales de los
microorganismos.
 ¿Dónde se cultiva a los
microorganismos? ¿cómo ?
 Medio de cultivo
• Son soluciones nutritivas (líquida o gelatinosa) que se

utilizan en el laboratorio para el cultivo y crecimiento de los

microorganismos
https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms

https://www.youtube.com/watch?v=miga09gVMyY
AISLAMIENTO

Es la separación de un microorganismo del resto que lo acompañan.

Se aislan para obtener un cultivo puro.

TÉCNICAS PARA EL AISLAMIENTO

ESTRÍAS DILUCIONES
Por su función

SELECTIVOS COMUNES ENRIQUECIDOS

Promueve el crecimiento de ciertos Permite el crecimiento de la Se le agrega exceso de

microorganismos mayor parte de los nutrientes, sangre,
o inhibe el crecimiento de otros Microorganismos. suero

Agar nutritivo

Ejm: Agar Manitol salado

Agar Sabouraud Ejm: Agar nutritivo Ejm: Agar sangre
“La siembra es
superficial”
 TECNICAS DE SIEMBRA

Aislamiento por estrías

2
Flamear
Flamear

1 2 2
1
1

Flamear
Flamear

3
3
4 3

https://www.youtube.com/watch?v=6NckVGCobwY
 II. MATERIALES

• Guardapolvo blanco y limpio

Gradilla
Láminas porta y cubre objetos

Asa Drigralsky
y aguja de Kolle
Mecheros Bunsen Placas petri
CEPAS BACTERIANAS

 Escherichia coli
 Salmonella
 Bacillus
 Staphylococcus
MEDIOS DE CULTIVO EN PLACA PETRI
Placas Petri con:
• Agar MacConkey
• Agar Manitol Salado
• Agar Nutritivo

Agar EMB Agar nutritivo Agar manitol salado

•3 tubos con 12 ml de agar nutritivo
licuado y mantenido a 50°C.
•3 placas Petri estériles.
•2 tubos con cuñas de agar
nutritivo.
•2 tubos con caldo nutritivo
III. PROCEDIMIENTO

• Limpiar las superficies con un paño con alcohol (70 o

96°)

• Encender el mechero

• Ponerse los guantes,

• Mascarilla
 III. PROCEDIMIENTO
Técnicas de aislamiento

1. Por estrías a. EN CONDICIONES DE

ESTERILIDAD/ROTULAR LAS
PLACAS

b. TOMAR UNA ASADA DE LAS

CEPAS

c. REALIZAR UN ESTRIADO EN
LA SUPERFICIE
https://www.youtube.com/watch?v=W6xpPJZIb1E

https://www.youtube.com/watch?v=-TnHCd4sY24
 Rotular placas: Medio, bacteria, nombre y fecha

E. coli

Agar MacConkey Agar nutritivo Agar manitol salado

 Medio de A.N
cultivo

Bacteria

• Fecha  Hora

Nombre del grupo

(siglas)
 Aislamiento por estrías
2
Flamear
Flamear

1 2 2
1
1

Flamear
Flamear

3
3
4 3

“Tenga cuidado de no producir

roturas en el agar”
Incube las placas a 37°C por 24-48 h.
2.Por diluciones
1= DILUCIÓN1
2=DILUCIÓN 2
1. ROTULAR 3 PLACAS Y 3 TUBOS
3=DlLUCIÓN 3
( Cepa a emplear)

1 2 3
Tiene 9mL
de caldo
nutritivo

1 2 3
 TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR DILUCIONES
(Por vertido en placa)

1ml 1ml 1ml

1 2 3

Tubo 1 con Tubo 2 con Tubo 3 con

9mL de caldo 9mL de caldo 9mL de caldo

1ml 1ml 1ml

Dilución 1
Dilución 2 Dilución 3
 1ml
Inocular la
placa

Añadir el agar
nutritivo

Girar la placa

Colonias
creciendo en el
agar

“ A 40°C se solidifica el agar”

 3 cepas por grupo
Técnicas de transplante

“SIEMBRA SOBRE LA SUPERFICIE

INCLINADA”
Técnicas de transplante ( Caldo a Caldo)

ROTULE LOS
TUBOS

Incubar a 37°C
24-48 horas.

CALDO NUTRITIVO CALDO NUTRITIVO

(CON INÓCULO) (SIN INÓCULO)
EVALUACIÓN DE LOS TUBOS SEMBRADOS EN CALDO
(CALDO A CALDO)

• Después de la incubación, evalúe los tubos con caldo nutritivo

considerando:

 Cantidad(escasa, moderada, abundante)

 Apariencia (turbidez, floculación, sedimentación,
película completa, anillo superficial, mucosidad).
Incubar las placas y tubos a 37°C por
24 a 48 horas
…LUEGO DE LA INCUBACIÓN
OBSERVAR LAS CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS
 Observe el desarrollo de las colonias aisladas y describa
sus características de forma, bordes, elevación y
consistencia (butiroso, viscoso, fibroso) según la figura
siguiente:

• Forma,
• Bordes,
• Elevación
• Consistencia
Colonias
 REGISTRAR CAMBIOS DE COLOR DE
LOS MEDIOS DE CULTIVO

 Anote los resultados y preste particular atención a los

cambios que se producen en los medios
selectivo/diferenciales. Explique los resultados en el
informe.
OBSERVACIONES DE LAS PLACAS
MEDIO DE CULTIVO MICROORGANISMO COLOR DEL CAMBIOS
MEDIO DE
CULTIVO

Agar EMB E. coli ROJO COLONIAS

NEGRAS
CON BRILLO
METALICO

Agar Manitol Salado Staphylococcus ROSADO AMARILLO

(Por rojo de
fenol)

https://www.youtube.com/watch?v=6hfS1XbPfQk
Colonias de Staphylococcus aureus  Colonias de E. coli en el medio
en el medio de cultivo Agar Manitol Salado EMB
IMPORTANTE
EVALUACIÓN DE LOS RESULTADOS A LAS 24H
• Observar si hay presencia de colonias en el medio de cultivo, forma,
elevación y margen
• Tomar fotografías a cada microorganismo como se desarrolla en los
diferentes medios de cultivo
• Apreciar los cambios de coloración

• Nota: Investigar la composición química de los medio de cultivo y

contrastar con los resultados obtenidos
CONCLUSIONES

• Las microorganismos se aislan en medios de cultivo con

el propósito de obtenerlos puros.
• El medio MacConkey es específico para E.coli, sus
colonias serán rosadas, el medio Manitol Salado es
específico para Staphylococcus.
• Las técnica de aislamiento por estrías y la técnica de
dilución en placa permite la obtención de colonias
aisladas
 Fuentes de información

• Madigan M., John M. Martinko & Jack Parker. Brock: Biología de

los microorganismos, 14va. edición, Pearson Educación, S.A.,
Madrid. 2015.
• Agar Manitol Salado. Disponible en:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/c
atedraMicro/10_AgarManitolSal.pdf
• Juan Juscamaita (2006).Guía de Microbiología. UNALM