INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

“USO DEL MATERIAL EN CONDICIONES

ASÉPTICAS”
Laboratorio de Microbiología General
OBJETIVO

➤ Aprender y practicar las técnicas de aislamiento por

el método de diluciones decimales y estría cruzada.

➤ Conocer las condiciones asépticas, adecuadas

para la manipulación del material.

➤ Hacer la estimación cualitativa y cuantitativa del

contenido microbiano.
INTRODUCCIÓN
En todo análisis microbiológico es indispensable contar con
material estéril, de tal manera que no altere los resultados.

La esterilización es el proceso mediante el cual se eliminan

todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de
un objeto, medio o superficie y su aplicación garantiza la
ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo
a ser empleados.
 Tabla 1. Métodos de Esterilización

Métodos Físicos Calor Húmedo Vapor a presión

Seco Flameado

Incineración

Filtración Discos de
membranas o
filtros absolutos

Radiaciones No ionizantes Rayos

ultravioletas e
infrarrojos

Ionizantes Rayos X

Métodos Químicos Gases Óxidos de etileno

Líquidos Formaldehído
TÉCNICA ASÉPTICA
El material estéril se trabaja en condiciones de asepsia, es decir; se
coloca en una zona comprendida dentro de un área limpia, diseñada y
construida para minimizar la contaminación por microorganismos viables
y no viables, manteniéndola dentro de límites preestablecidos, llamada
zona aséptica; y se manipula con una técnica aséptica, la cual constituye
un conjunto de procedimientos y actividades que se realizan con el fin de
disminuir al mínimo las posibilidades de contaminación microbiana.
TÉCNICA ASÉPTICA
DILUCIONES

Dado el tamaño de las poblaciones microbianas, que van desde algunos miles
hasta varios millones de células por gramo, su determinación cuantitativa
requiere la preparación de diluciones conocidas de la muestra y es costumbre
utilizar cifras decimales para facilitar los cálculos y así obtener buenos
resultados.
DILUCIONES DECIMALES “CUENTA
VIABLE”
Es un método tanto cualitativo como cuantitativo. Es cualitativo porque
permite diferenciar las diferentes morfologías coloniales y también es
cuantitativo porque permite conocer el número de microorganismos
DILUCIONES DECIMALES “CUENTA
VIABLE”
Consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra en condiciones de
esterilidad, de manera que se va reduciendo el número de
microorganismos de la suspensión inicial, con el objeto de sembrar
después cantidades conocidas de las diluciones en placas de Petri.
DILUCIONES DECIMALES “CUENTA
VIABLE”
Lo más adecuado es preparar una dilución primaria y, a partir de ella,
todas las necesarias para poder contar los microorganismos presentes;
pueden ser dos diluciones decimales consecutivas, es decir, 1:10 y 1:100
o superiores, según la carga microbiana esperada.
Se pretende encontrar el número de microorganismos por unidad de
volumen
ESTRÍA CRUZADA
Es un método cualitativo, este método está basado en arrastrar, mediante
un asa de siembra, un número cada vez más pequeño de individuos. Es
un método rápido y simple de agotamiento progresivo y continuo del
inóculo sobre un medio sólido contenido en una placa de Petri.
ESTRÍA CRUZADA
El objetivo es obtener, a partir de un elevado número de microorganismos,
un número reducido de estos distribuidos sobre la superficie de la placa.
Al incubar ésta, cada uno de estos microorganismos originará una nueva
colonia.
 MÉTODO DE LAS DILUCIONES
9mL
1

1mL
Escherichia Coli
1mL
2 3 4 5 6 7 89
10
1
MÉTODO DE SIEMBRA DE MUESTRA EN CAJAS PETRI.

9 10 1 2 3 4
1 2 34 56 78 7 6 5

0.1 mL

8
Se sembró del tubo 8 al 1
ya que el tubo problema
esta un poco más diluido de
lo esperado y en el 9 y 10
no habría crecimiento.
 DILUCIONES DECIMALES
1.5*108 UFC/mL
Entre cada dilución
1 mL homogeneizar en vortex

1 1mL 2 1mL
3 1mL 4 5 6 1mL 7 1mL 8
1mL 1mL

E. Coli mL
9 9 9 9 9 9 9 9 Diluyente
Soluto
1:10 1:10 1:10 1:10 1:10 1:10 1:10 1:10
10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
0.1mL 0.1mL 0.1mL 0.1mL
Sembrar del más diluido al más
concentrado.
258 27 2 0 Antes de cada
UFC/mL= (# Colonias) (1/dil.)(1/ali.)
siembra
Realizar conteo de colonias tomando
250 25 3 0 homogeneizar
en cuenta un rango de 25 a 250
MÉTODO DE LA ESTRÍA CRUZADA
Tubo E. Coli

E.
Coli 2 asadas
Esterilizar
entre cada
una
Esterilizar
asa

Llevar a
incubar a
28 °C
Cálculos

Realizar el conteo de UFC tomando en cuenta un rango de 25

a 250 colonias.

UFC/0.1mL= (# Colonias) (1/dil.)(1/ali)

RESULTADOS
RESULTADOS
Resultados

UFC

D. Estándar
CONCLUSIONES
➤Los alumnos tuvieron un mal manejo en la técnica de estría
cruzada, ya que se llega a tocar con las otras estrías y eso ocasiona
un retroceso en la dilución.

➤Los Q.B.P del 3QM2 trabajaron en correctas condiciones

asépticas al no presentarse otro tipo de crecimiento bacteriano en
las cajas Petri

➤Los Q.B.P del 3QM2 pudieron identificar y cuantificar las UFC de E

Coli
 ➤ Mora Aguilar Juan. (2016). “Control
BIBLIOGRAFÍA sanitario microbiológico” México: IPN.

➤García Valdés Elena. (2009). "Prácticas

de Microbiología" . México: UNAM.

➤Prescott L.M., Harley J.P. and Klein G.A.,

Microbiología , 3a edición, Madrid, México,
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