Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
LABORATORIO 2
“Técnicas de Siembra”
Estudiante:
Tatiana Godoy Gonzalez
Introducción..............................................................................................
Objetivos....................................................................................................
Introducciòn..............................................................................................
Metodologìa ..............................................................................................
Discusiòn...................................................................................................
Bibliografía................................................................................................
1
Introducción
La microbiota normal, corresponde a microorganismos que habitan zonas de nuestro
organismo en relación simbiótica o comensal con su hospedador (sin causar infección)
por ello muchas veces será necesario separar a esta microbiota del agente causal de
un cuadro infeccioso, o cuando tenemos más de un agente causal. Las colonias
bacterianas (unidad macroscópica formada a partir de al menos una bacteria en un
medio de cultivo sólido, UFC) cuando se encuentran aisladas pueden usarse para su
caracterización, identificación y definir tratamientos. Para ello la siembra por
agotamiento en estrías es una de las técnicas más usadas para aislar colonias de
microorganismos.
Sin embargo, no todos los medios tienen por función la obtención de colonias aisladas
muchas veces se utilizan para visualizar la presencia de estructuras o propiedades
bioquímicas, estos pueden ser sólidos, semisólidos o líquidos, deben ser sembrados a
partir de un cultivo axénico para que sus resultados sean representativos del género o
especie que se desea identificar o caracterizar.
En este laboratorio se realizan dos actividades. La actividad 1, dice relación una técnica
de siembra, que permitirá el aislamiento y/o separación de las comunidades
microbiológicas.
El agar TSI, (Triple Sugar Iron, agar triple azúcar y hierro), se utiliza para la
identificación de patógenos entéricos gram negativos. Se emplea para detectar la
fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas, y también
para detectar producción de ácido sulfhídrico.
Los posibles resultados:
3
Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel ácido (amarillo): Lactosa y/o sacarosa
fermentada.
Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel alcalino (rojo): Lactosa y/o sacarosa
no fermentada.
Taco alcalino (rojo) y bisel alcalino (rojo): Ninguno de los tres glúcidos es fermentado
La aparición de burbujas en el taco indica que la fermentación se ha efectuado con
producción de gas.
Un ennegrecimiento en el medio indica la producción de ácido sulfhídrico.
Figura 2: Resultados posibles, agar TSI.
Objetivos
Metodología
Actividad 1: ‘OBTENCIÓN DE UN CULTIVO AXÉNICOS EN PLACA POR MÉTODO
DE ESTRÍAS’
Materiales:
Procedimiento:
2. Tome el asa y flamee en llama, calentando el filamento hasta que alcance un rojo
incandescente. Enfríenlo en la proximidad de la llama (10 -20 segundos)
3. Tome con la otra mano el tubo de muestra, agítelo ligeramente para homogenizar,
retire el algodón o tapa, afirmado con su dedo meñique y anular.
6. Flamear el asa y enfriarla. Repetir el mismo proceso anterior, con estrías más
separadas. en el último sector de la placa evitando tocar las secciones anteriores.
Materiales: - 2 tubos de agar TSI - 2 tubos de agar MIO - 2 tubos de caldo nutritivo
5
Procedimiento:
2. Tubo Medio Solido inclinado: Con asa en loop haciendo un zig-zag sobre el
extendido.
3. Tubo Medio Semisólido: Con asa recta, haciendo un pinchazo recto hasta el fondo
del tubo.
Resultados
Actividad 1: ‘OBTENCIÓN DE UN CULTIVO AXÉNICO EN PLACA POR MÉTODO DE
ESTRÍAS’
Cuadro 2: E.coli en diferentes medios de cultivo (tomado de internet)
Figura 4: Agar MIO. Resultado positivo a movilidad, indol y ornitina’ (tomado de internet)
Figura 5: Agar MIO. Resultado negativo a movilidad, positivo a indol y negativo a ornitina’ (tomado de
internet)
7
Discusión de resultados
1. ¿Es posible obtener colonias aisladas? Como evaluarías la técnica de siembra
de tu grupo
El agar TSI, (Triple Sugar Iron, agar triple azúcar y hierro), se utiliza para la
identificación de patógenos entéricos gram negativos. Se emplea para detectar la
fermentación de lactosa, sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas, y también
para detectar producción de ácido sulfhídrico.
Los posibles resultados indican: Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel ácido
(amarillo): Lactosa y/o sacarosa fermentada.
Taco ácido (amarillo): Glucosa fermentada. Bisel alcalino (rojo): Lactosa y/o sacarosa
no fermentada.
Taco alcalino (rojo) y bisel alcalino (rojo): Ninguno de los tres glúcidos es fermentado
La aparición de burbujas en el taco indica que la fermentación se ha efectuado con
producción de gas.
Un ennegrecimiento en el medio indica la producción de ácido sulfhídrico.
Cuadro 3: metabolismo de E.coli y Klebsiella en respuesta a características de los medios TSI (tres
azúcares y hierro) y MIO (movilidad, indol y ornitina)
Bacteria Indol H2S (TSI) Ornitina Movilidad Azúcares
descarboxilasa (glucosa, lactosa,
9
sacarosa)
E.coli + - - + +
Klebsiella - - - - +
Bibliografía
Cepario Unicach. Cepas microbiológicas de la Universidad de Ciencias y Artes de
Chiapas. https://cepariounicach.wordpress.com/2014/09/19/escherichia-coli/.
01/01/20