FACULTAD DE TECNOLOGIA MÉDICA

ESCUELA PROFESIONAL DE LABORATORIO Y ANATOMÍA

PATOLÓGICA

CURSO: INMUNOLOGIA I
TEMA: PODER BACTERICIDA DEL SUERO
DOCENTE: Lic.TM Alejandro Retamal Salazar
Lic. TM Mirtha Hernández Acasiete
Lic. Arturo Rivas Cárdenas
ALUMNAS: Ticona Justo Ximena Danna
Zamudio Velásquez Yahaida Brigitte

2019
INTRODUCCION
El sistema inmune se compone de dos tipos: inmunidad innata e inmunidad
adaptativa, cada una de ellas esta mediada por las reacciones tempranas y
respuestas tardías respectivamente.
En la inmunidad innata, para la detección y destrucción de microorganismos
dispone de varios recursos: factores solubles como el sistema de
complemento, defensinas, células fagocíticas (NK, PMN, Mo y células
dendrítica) y células inflamatorias ( mastocitos, basófilos, y eosinófilos) que son
atraídos por quimiocinas al lugar de acción.
En el suero, podemos encontrar diferentes sustancias que participan en la
respuesta inmune, ya sea en mayor o menor grado.

La defensa contra los

microbios está mediada por
las reacciones tempranas de
la inmunidad innata
y las respuestas tardías de
la inmunidad adaptativa
(Abbas, K., 2012, pág. 2)

OBJETIVOS
A. Observar las propiedades líticas del suero por medio de la acción del
sistema de complemento.
B. Identificar los factores que pueden afectar en el sistema de
complemento.
C. Analizar la sobrevida del microorganismo expuesto al suero (calentado y
sin calentar) y diferenciar alguna variación entre ellos.

MATERIALES
 Suero sanguíneo
 Cepa de E. coli
 Tubos estériles de 13 x 100 y 12 x 75
 Placas Petri estériles
 Gradillas porta tubos
 Solución salina fisiológica estéril
 Escala Mc Farland para 1 x 10 6 bacterias
 Agar tripticasa soya
 Mechero de bunsen
 Centrifuga
 incubadora
 baño maría
 pipetas estériles
 micropipetas

PROCEDIMIENTO
1. Realizar la toma de muestra (sangre periférica), dejar coagular 10
minutos y centrifugar a 3500 RPM por 30 minutos.

2. Del suero obtenido, dividirlo en dos tubos rotulados: SCAL (suero sin
calentar) y CAL (suero calentado). El tubo rotulado CAL se lleva a
calentar en baño maría a 56 oC por 30 minutos

3. Mientras, se prepara la dilución de la cepa utilizando como patrón un

tubo de escala Mc Farland (1 x 106 bacterias por ml.) emulsionar la cepa
en un tubo con 5 ml. de solución salina.

4. A partir de la dilución inicial se hará diluciones seriadas de tal manera

que en cada tubo haya estas concentraciones:

Cantidad de solución Cantidad de E. coli

salina emulsionada
1) 1/100 4.95 ml 0.05 ml (emulsión
inicial)
 2) 1/1000 4.5 ml 0.5 ml (dilución 1/100)

3) 1/10000 4.5 ml 0.5 ml (dilución

1/1000)

A cada dilución se le llamara : dilución 1, 2 y 3 respectivamente

5. Preparar seis tubos y agregar en cada uno de ellos

Cal 3
Cal 1 Cal 2

250 ul suero 250 ul suero 250 ul suero

calentado + 250 calentado + 250 calentado + 250
ul dilución 1 ul dilución 2 ul dilución 3

SCal SCal SCal

1 2 3

250 ul suero sin 250 ul suero sin 250 ul suero sin

6. En seis placas estériles (rotuladas de la misma manera que los tubos)
colocar el contenido de cada tubo en donde corresponde.

Scal 1 Scal 2 Scal 3

cal 1 cal 2 cal 3

7. Luego agregar el medio agar TSA, y homogenizar.

8. Incubar a 37 oC por 24 horas
9. Observar y realizar el conteo de las colonias

# COLONIAS CONTADAS
EN PLACA
SCAL 1 912
CAL 1 2300
SCAL 2 328
CAL 2 508
SCAL 3 226
CAL 3 340
RESULTADOS
1. Se evidencia una mayor y menor propagación de colonias bacterianas
de Escherichia coli desarrolladas respectivamente en suero calentado y
sin calentar.

UFC/ ml = N° de colonias por placa x Factor de dilución*

ml de muestra sembrada

Dilución 0.5ml/9.5 de agar a semejante a 1/20

*Factor dilución 20
Muestra 1ml

50000
UFC/ml
45000

40000

35000

30000

25000

20000

15000

10000

5000

0 Dil. Bact.
(1) 1/100 (2) 1/1000 (3) 1/10000

Suero Sin calentar Suero Calentado

Gráfico 1. Comparación de suero calentado y sin calentar

Suero Sin calentar UFC/ml Suero Calentado UFC/ml

(1) Dil. Bact. 1/100 18240 46000
(2) Dil. Bact. 1/1000 6560 10160
(3) Dil. Bact. 1/10000 4520 6800
Tabla 1. Recuento de células viables en suero sin calentar y calentado por
método de extendido en placa.
*UFC/ml (unidades formadoras de colonias por mililitros).
 CUESTIONARIO

1.- ¿Qué diferencia esperas observar entre el desarrollo bacteriano de las

bacterias incubadas con el suero calentado y el suero sin calentar?

SUERO SIN CALENTAR SUERO CALENTADO

El recuento de colonias es menor El recuento de colonias es mayor
El complemento se activa El complemento no se activa
No se inhibe la cascada de complemento Inhibición de la cascada de
complemento.
La bacteria no se reproduce La bacteria se reproduce
Tabla 2. Diferencias en el desarrollo bacteriano dependiente al tipo de estado de suero
utilizado.

2.- ¿Por qué se da esta diferencia?

Se debe a que la cascada de complemento del suero se inactiva por efecto del
calor, al exponer el suero a este, por lo que se destruye su capacidad lítica
antimicrobiana.

CONCLUSIONES

 Se observa que en el suero existe diversos componentes del sistema

inmune y esto se evidencia en el suero sin calentar ya que existe menor
cantidad de colonias que en el suero calentado.
 El calor es un factor que puede afectar el sistema de complemento,
inhibiéndolo y permitiendo un mayor crecimiento de microorganismos.
 Al comparar las placas con colonias, se observa que el crecimiento
bacteriano es mayor si se afecta el sistema de complemento presente en
el suero sanguíneo.
BIBLIOGRAFIA:
 INMUNOLOGIA DE ROJAS 16VO EDICION, PAGINAS 15-26
 MANUAL DE PRACTICAS INMUNOLOGIA BASICA, INSTITUTO
POLITECNICO NACIONAL MEXICO, 2017; URL:
https://www.studocu.com/en/document/instituto-politecnico-nacional/inmunologia-
basica/practical/practica-4-im-practica-4-inmuno/2560194/view
 https://es.slideshare.net/mobile/nataliaizurieta/laboratorio-no-4-recuento-
bacteriano-7723447