UNIVERSIDAD JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS
E. P. de BIOLOGÍA MICROBIOLOGÍA

CRECIMIENTO y MUERTE
MICROBIANA.
MÉTODOS PARA CONOCER EL
CRECIMIENTO MICROBIANO.

Dr. César Julio Cáceda Quiroz

 BACTERIAS
• Pared celular: Peptidoglucano o Mureína
• Membrana celular sin esteroles, mesosomas
• Ribosomas de 70 Svedberg
• Reproducción Asexual: Fisión Binaria
• Reproducción Sexual o Parasexual:
Transformación, Conjugación, y Transducción.
• Nucleoide, generalmente con un cromosoma.
• Algunas con esporas: Bacillus spp., Clostridium spp.
REPRODUCCIÓN ASEXUAL:
FISIÓN BINARIA
una
 REPRODUCCIÓN PARASEXUAL o
SEXUAL

•Mediante los cuales las bacterias se intercambian

fragmentos de ADN.

• Puede realizarse por:

 Transformación
 Conjugación
 Transducción
 TRANSFORMACIÓN

•Consiste en el intercambio genético producido

cuando UNA BACTERIA es capaz de:
 Captar fragmentos de ADN, de otra bacteria que
se encuentran dispersos en el medio donde vive.
 CONJUGACIÓN BACTERIANA

•Es el proceso de TRANSFERENCIA de material

genético entre:

 Una célula bacteriana que actúa como

DONADORA, y otra RECEPTORA:

 Mediante el contacto directo, o una conexión

que las una (pilus).
 CONJUGACIÓN BACTERIANA

•En la Conjugación la célula donadora provee un

elemento génico móvil (plásmido, o un transposón).

•La información genética transferida a menudo

beneficia al receptor. Las ventajas pueden incluir:

 Resistencia antibiótica,
 Tolerancia xenobiótica, o
 La capacidad de usar nuevos metabolitos.
 Esquema de la conjugación bacteriana

1.La célula donante presenta un pilus.

2. El pilus se adhiere a la célula receptora y

ambas células se aproximan.

3. El plásmido móvil se desarma y una de

las cadenas de ADN es transferida a la
célula receptora.

4. Ambas células sintetizan la segunda

cadena y regeneran un plásmido completo.

La célula receptora sintetiza el pilus.

Ahora ambas células son potenciales
donantes.
CONJUGACIÓN
 TRANSDUCCIÓN

•En este caso la transferencia de ADN de una

bacteria a otra, se realiza:

 A través de un bacteriófago, que se comporta como

un vector intermediario entre las dos bacterias.
CRECIMIENTO EXPONENCIAL
Tiempo Número de células
0 1
0,5 2
1 4
1,5 8
2 16
2,5 32
3 64
3,5 128
4 256
4,5 512
5 1024
5,5 2048
6 4096
“ “
“ “
10 1´048,576
CURVA DE CRECIMIENTO
 Fase Lag o Fase de Retardo

• La siembra en un medio nuevo no va seguido de la

duplicación de la población.

• En lugar de esto, la población permanece temporal-

inalterada: dx/dt = 0, (x = biomasa).

• En términos fisiológicos, se encuentran muy activas

y sintetizando nuevo protoplasma:

 Síntesis de enzimas y aumento del tamaño celular (4

horas).
 Fase Logarítmica o Exponencial

• Se multiplican a ritmo constante y las células

presentan una elevada tasa de actividad metabólica.

• La población de M’os es casi uniforme en:

 Composición química
 Actividad metabólica, y
 Otras características fisiológicas.
 Fase Logarítmica o Exponencial

Fase Logarítmica o Exponencial:

1 2 4 8 16 32…
20 21 22 23 24 25…

• El EXPONENTE indica el Nº DE GENERACIONES

que ha transcurrido en ese momento.
 Fase Logarítmica o Exponencial

•Empezando con una sola célula, la población b, al

final de un periodo dado, puede expresarse:

b = 1 x 2n…… (1)

En donde 2n es la población bacteriana después

de la enésima generación.
 Fase Logarítmica o Exponencial

•En condiciones prácticas, el número de bacterias B

que se introducen al medio en el tiempo cero, no es
una, sino varias miles, por lo que la fórmula es:

b = B x 2n……. (2)

B = Número de bacterias inoculadas en un medio, o

la cuenta de bacterias, en el tiempo cero.

b = Número de bacterias al final de un periodo

 Fase Logarítmica o Exponencial

•Resolviendo la ecuación (2), para n, se tiene:

log b = log B + n log 2

n = log b – log B/ log 2 …… (3)

•Si se sustituye el valor del log de 2, que es de 0,301,

en la ecuación anterior se tendrá:

n = 3,3 log b/B ……. (4)

 Fase Logarítmica o Exponencial
n = 3,3 log b/B ……. (4)
•Mediante la ec. (4) se puede CALCULAR EL NÚMERO DE
GENERACIONES, que han tenido lugar,

 A condición de que se conozca la población inicial B,

y la población b después del tiempo, t.

•El Tiempo de Generación, G, es igual a t (que es el

tiempo que transcurre entre b y B) dividido entre el número
de generaciones, n:

G = t/n = t/3,3 log (b/B)

 Fase Logarítmica o Exponencial
t = Periodo o tiempo
G = Tiempo de generación
n = Número de generaciones
log = Logaritmo de base 10.

• µ=n/t µ = 1/G

µ = Velocidad de crecimiento.

• Tiempo de Generación (G): Es el tiempo que se

necesita para que una célula se divida.
 Fase Estacionaria

•El número de células se mantiene constante.

•Hay ACUMULACIÓN de productos tóxicos y se

agotan los nutrientes.

•El número de células que mueren, es similar al de

las que se dividen (entre 18 a 24 horas).
 Fase de Declinación o Muerte

•Fase donde se da una disminución en el número

de bacterias, porque:
Se agotan los nutrientes esenciales,

Se acumulan productos inhibidores y de acidez.

•La velocidad de las células que mueren es mayor

que las células que se dividen.
 CULTIVO CONTINUO = CULTIVO ABIERTO =
BATCH

•En procesos industriales, a veces conviene mantener

la población bacteriana en la fase exponencial.

 El Turbidostato y el Quimiostato sirven para lo

anterior.

•Allí, se mantiene el cultivo a volumen cte., es decir,

Entra medio fresco a la misma velocidad con la que

sale el medio de cultivo ya utilizado.
QUIMIOSTATO
MÉTODOS PARA CONOCER EL CRECIMIENTO
MICROBIANO
 Cámara de Petroff - Hausser

• Excavación con 0,02 mm de profundidad;

• Área de 1 mm2, dividida en un retículo de 25 cuadrados grandes;

• Cada cuadrado grande está subdividido a su vez en 4x4 = 16 cuadrados

pequeños.

• Es decir, la muestra se distribuye en 16 x 25 = 400 celdillas (cuadros

pequeños).
fresco
 MÉTODOS TURBIDIMÉTRICOS
(Espectrofotómetro)

• Mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia (una

medida de la luz transmitida a través de la suspensión).
• En Microbiología, los estándares de turbidez de Mc Farland se
usan como referencia en suspensiones bacteriológicas, para saber el
número de bacterias por mililitro, o más bien en UFC según una
escala que va de 0,5 a 10,0. 
RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES
 RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES
RECUENTO EN MEDIO
SÓLIDO
a) Siembra por inmersión o embebido
Colonias creciendo en superficie

Solidificación e Colonias creciendo

incubación embebidas en el
El inóculo es pipeteado Medio estéril es
agar
dentro adicionado y
de una placa estéril mezclado con el
inóculo

b) Siembra en superficie
Colonias creciendo en superficie

Incubación

Se coloca una alícuota (0,1 Se esparce el inóculo

mL) sobre la superficie del con espátula de
agar Drigalsky

UFC/mL = colonias contadas x (1/factor de dilución) x (1/volumen de inóculo)

 RECUENTO EN MEDIO LÍQUIDO

a) Método del Número Más Probable (NMP)

Diluciones seriadas

Suspensión o inóculo
a sembrar

Batería de tres
tubos

bact./mL o bact./g = NMP x (1/factor de dilución) x (1/volumen de inóculo)

 Tabla de Mc Grady
Nº Característico NMP Nº Característico NMP Nº Característico NMP

000 < 0.3 111 1.1 222 3.5

001 0.3 112 1.5 223 4.2
002 0.6 113 1.9 230 2.9
003 0.9 120 1.1 231 3.6
010 0.3 121 1.5 232 4.4
011 0.61 122 2.0 233 5.3
012 0.92 123 2.4 300 2.3
013 1.2 130 1.6 301 3.9
020 0.62 131 2.0 302 6.4
021 0.93 132 2.4 303 9.5
022 1.2 133 2.9 310 4.3
023 1.6 200 0.91 311 7.5
030 0.94 201 1.4 312 12
031 1.3 202 2.0 313 16
032 1.6 203 2.6 320 9.3
033 1.9 210 1.5 321 15
100 0.36 211 2.0 322 21
101 0.72 212 2.7 323 29
102 1.1 213 3.4 330 24
103 1.5 220 2.1 331 46
110 0.73 221 2.8 332 110
 VELOCIDAD DE CRECIMIENTO PARA ALGUNAS
BACTERIAS BAJO CONDICIONES ÓPTIMAS

•Pseudomonas sp. 27 ºC - 10 min.

•Escherichia coli 37 ºC - 20 min.

•Staphylococcus aureus 37 ºC - 28 min.

•Mycobacterium tuberculosis 37 ºC - 360 min

•Nitrobacter sp. 27 ºC - 1200 min.

 FACTORES AMBIENTALES

• Oxígeno

• pH

• Temperatura
EFECTO DEL OXÍGENO
RELACIONES MICROBIANAS CON EL
OXÍGENO
Crecimiento dependiente del O2
 Enzimas de crecimiento aerobio

• La enzima SOD- superóxido dismutasa es uno de los antioxidantes

endógenos más potentes del cuerpo humano. Cataliza la reacción que
inactiva al radical libre superóxido transformándolo en especies químicas
menos reactivas como el ozono y el H2O2.
 CULTIVO DE ANAEROBIOS

• Caldo Tioglicolato
Cultivo de Anaerobios … cont.
Jarra Gas Pack

Jarra Gas Pak

 Cultivo de Anaerobios … cont.

Placa de Brewer

• Agar anaeróbico según Brewer. Permite el crecimiento en

superficie de microorganismos anaerobios y microaerófilos sin
equipo anaeróbico. Los microorganismos crecen en un agar con
bajo potencial de oxidación-reducción.
 pH
• Basados en sus requerimientos de pH, los
microorganismos son:

 Neutrófilos pH 5,6 a 8,0

 Acidófilos pH menor de 5,5

 Alcalófilos pH mayor de
8,0
 pH
•La mayoría de bacterias y protozoos son
neutrófilos.

•Mohos, levaduras y algas son ligeramente

acidófilos (pH entre 4,0 y 6,0)
 Temperatura: Grupos Fisiológicos

Figura 1.
 ADAPTACIONES

Psicrófilos
• Membranas celulares con elevado % de ácidos
grasos insaturados.

• Enzimas activas a bajas temperaturas

• Ejemplos: Gallionella sp., Polaromonas vacuolata

 ADAPTACIONES

Termófilos
• Membranas con ácidos grasos muy saturados.

• Proteínas y enzimas estables a elevadas

temperaturas.

• Ejm.: Thermus sp., Geobacillus stearothermophilus

 FISIOLOGÍA DEL
CRECIMIENTO MICROBIANO
METABOLISMO BACTERIANO
ETAPAS DEL CATABOLISMO
ANABOLISMO
Generación de Energía: ATP

ATP  H 2 O Proceso
Celular

 ADP  Pi
 Mecanismos de Síntesis

Fosforilación por Transporte de electrones

•Mecanismo en el cual el flujo de electrones está asociado

a la síntesis de ATP a partir de ADP y Pi:

 Cadena Respiratoria

 Aparato Fotosintético
 Mecanismos de Síntesis

Fosforilación a nivel de sustrato

•Durante la degradación de sustratos orgánicos hay un
pequeño N° de intermediarios que contienen enlaces
fosforilados de alta energía que pueden cederlos al ADP:

 1,3 difosfoglicerato
 Fosfoenolpiruvato (PEP)
 Acetil fosfato.
 BALANCE ENERGÉTICO DE LA
RESPIRACIÓN CELULAR

1. GLUCÓLISIS
2 ATP + 2 NADH

2. CICLO de KREBS … (x 2 acetil Co A)

GTP + 3 NADH + 2 FADH2

3. FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
36 – 38 ATP
(depende de NADH usado para deshidrogenarse)
CATABOLISMO DE GLÚCIDOS – RESPIRACIÓN AEROBIA
BALANCE ENERGÉTICO - EUCARIOTAS
BALANCE ENERGÉTICO DE LA
RESPIRACIÓN AEROBIA
 Respiración Aerobia
TCA
GLUCOSA glucólisis
  6CO2

NAD

Motor flagelar NADH2

ATP PMF
Transporte

O2 H2O
 Respiración Anaerobia
Aceptor  prod. reducido Procariotas (Ejemplos)

NO3-  NO2- N2 Pseudomonas, Bacillus

*
NO -
 NO2- Enterobacterias
* SO 3

 S0 SH2 Sulfatorreductoras (Desulfovibrio,

*
2-
4
Desulfotomaculum)

Fumarato  Succinato Enterobacterias

CO2  CH4 Arqueas metanogénicas

* Fe 3+
 Fe2+ Pseudomonas, Bacillus

Metabolismo desasimilativo
*
BALANCE COMPARATIVO

BACT.
TIPOS DE FERMENTACIÓN
GRACIAS