VIERNES 02 JULIO 2021

ACCIÓN DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

SOBRE EL DESARROLLO BACTERIANO.
Objetivos:

• Conocer las técnicas microbiológicas comúnmente utilizadas en la

evaluación de agentes antimicrobianos físicos y químicos sobre cultivos
bacterianos y observar la respuesta frente a dichos agentes.
AGENTES FÍSICOS

Efecto letal de la temperatura sobre las bacterias

Los organismos varían ampliamente en cuanto a su susceptibilidad a temperaturas elevadas.
En este experimento se determinará:
a. El punto térmico mortal
Temperatura mínima a la cual un organismo muere en 10 minutos.
1. Divida el reverso de una caja con agar nutritivo en cinco partes, con un marcador.
2. A partir de un cultivo joven (18 horas de incubación) de E. coli en caldo nutritivo, tome un asada y siembre
por estría en una división de la placa de agar nutritivo (tiempo cero =Testigo). Marque el reverso con un
código.
3. Coloque los tubos en un baño María a 37, 50, 60, 70, 80 y 92°C. Tome un asada a los de 10 minutos de
tratamiento y siembre en los sectores de la placa de agar previamente dividida.
4. Incube las placas sembradas a 35-37°C por 24 horas.
5. Determine el punto térmico mortal para E. coli.
El tiempo térmico mortal.
Es el tiempo mínimo de exposición requerido para lograr la muerte de una población a
una temperatura determinada.
1. Divida el reverso de una caja con agar nutritivo en cinco partes, con un marcador.
2. A partir de un cultivo joven (18 horas de incubación) de B. subtilis en caldo nutritivo,
tome un asada y siembre por estría en una división de la placa de agar nutritivo
(tiempo cero =Testigo). Marque el reverso con un código.
3. Coloque los tubos en baño María a 70°C. Tome un asada en los tratamientos de los 5,
10, 15, 20, 25 y 30 minutos y siembre cada tratamiento en uno de los sectores de la
placa de agar. El tiempo total de calentamiento será de 40 minutos.
4. Incube todas las placas sembradas a 35-37°C por 24 horas.
5. Determine el tiempo térmico mortal en B. subtillis.
ESTERILIZACION CON
CALOR HUMEDO
 Preparar una suspensión de los
microorganismos en estudio,
equivalente al tubo N°1 del
AGENTES QUÍMICOS Nefelómetro de MacFarland.

Preparar tubos caldo nutritivo y

regular el pH en cada uno de ellos:
pH: 2, 5, 7, 9, 11 y 12.

Acción del Inocular 20µLde la suspensión en los

tubos con caldo nutritivo a distintos
pH pH.

Incubar a 37°C por 24 horas.

Realizar lectura.
Influencia del pH
Prepare tres sets de tubos con caldo nutritivo y con diferentes pH (5.0, 7.0 y 9.0).
1. Deje un tubo control del caldo normal sin sembrar (Control de crecimiento bacteriano).
2. Inocule un set de diferentes pH, con 0.1 mL de E. coli , P. fluorescens y Lactobacillus sp.
3. Incube la bacteria a 37°C por 24 horas.
4. Registre la turbidez cualitativamente con cruces (un + para poco desarrollo, dos + para regular y tres
+ para abundante) y compare el crecimiento en los diferentes pH y con los diferentes organismos.
 Caldo Común – Caldo Nutritivo Preparación de un cultivo joven de la
bacteria en estudio en caldo nutritivo
• Peptona 5g
• Extracto de carne 3g Sembrar en medio sólido (agar nutritivo)
• NaCl 5g para la obtención de colonias.
• Agua destilada 1000mL Preparar la suspensión de la bacteria
en estudio estandarizando la turbidez
Diluir. Servir en tubos de 13 x 100 mm (3 mL/tubo). con el tubo 0,5 del nefelómetro de
Autoclavar. Mac Farland.

Reactivos
Sembrar la bacteria en estudio por superficie de manera homogénea,
secar las placas en incubadora, hacer hoyos con sacabocado estéril y
colocar los agentes químicos a evaluar.

Incubar las placas a 37°C 24 horas.

Realizar las lecturas, observando los halos de inhibición

correspondientes.
❖ Fenol 10 % ❖ Agua ❖ Alcohol ❖ Lejía 5%
yodado
destilada
Resultados

❖ Lejía 5%

❖ Agua destilada

❖ Fenol 10 %

❖ Alcohol yodado
https://www.youtube.com/watch?v=qLfvoGKsFU4

https://www.youtube.com/watch?v=mqwDezAH59I

https://www.youtube.com/watch?v=i4bjH2uF6KA

https://www.youtube.com/watch?v=S0nAVS5gxyg

https://www.youtube.com/watch?v=8rRkpJjYkSo