UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL
CARRERA DE MEDICINA
CÁTEDRA DE BACTERIOLOGÍA
TEMA:
PRACTICA OBSERVAR COPROCULTIVO: TÉCNICA DE SIEMBRA.
LECTURA DE T.S.I. (KLIGER MODIFICADO). PRACTICA. OBSERVAR
MICROSCOPIA DE BACILOS GRAM POSITIVOS ESPORULADO Y NO
ESPORULADO. LECTURA DE AGAR BISMUTO
INTEGRANTES:
LÓPEZ CAMPI MIRNA VANESSA
RAMOS SAVERIO JAMILETTE ESTEFANÍA
TUALOMBO PUNINA ANDERSON WLADIMIR
DOCENTE: DRA. JOSEFINA RAMÍREZ
CURSO: MED-S-CO-3-4
CICLO I
2023-2024
Objetivo General
Observar y analizar diferentes aspectos relacionados con el coprocultivo, incluyendo la técnica de
siembra, la lectura de T.S.I. (Triple Sugar Iron) modificada, y la observación microscópica de bacilos
gram positivos esporulados y no esporulados, así como la lectura del agar bismuto.
Objetivos Específicos
• Aprender a realizar adecuadamente el medio de cultivo y sembrar una muestra de heces en la superficie del
medio para favorecer el crecimiento de bacterias presentes en las heces.
• Observar y analizar los resultados obtenidos en el T.S.I. modificado, un medio de cultivo utilizado para
detectar la capacidad de fermentación de azúcares y la producción de gas y ácido sulfhídrico por las
bacterias presentes en el coprocultivo.
• Observar la microscopia de bacilos gram positivos esporulados y no esporulados, preparar una muestra
adecuada para la observación microscópica y examinarla para identificar y diferenciar entre bacilos gram
positivos esporulados y no esporulados.
• Analizar los resultados obtenidos en el agar bismuto, un medio de cultivo selectivo utilizado para el
aislamiento y la identificación de ciertas bacterias patógenas presentes en las heces.
Bibliografía
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UNAM, Facultad de Estudios Superiores Iztacala. [Link]
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Gutiérrez Morales & Livier Amalia; Información de Unidad No.3, Tracto Gastrointestinal y
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Prats, J. (2017). Microbiología y Parasitología Médicas (3rd ed.). Editorial Médica Panamericana. ISBN:
9788498353611.
Quesada Arroquia, A. & Béjar Luque, V. (2018). Microbiología Esencial. ISBN 9788491102427. Disponible
en: [Link]
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Tomalá Torres, J. I. (2016). Determinar el agente patógeno frecuente en pacientes menores de cinco años por
medio de coprocultivo. Universidad de Guayaquil. Facultad de Ciencias Médicas. Carrera de Tecnología
Médica. [Link]
COPROCULTIVO
Método utilizado usualmente para la
investigación de las bacterias
productoras de diarrea
El coprocultivo va encaminado
fundamentalmente a la investigación
del entero patógeno más frecuente:
[Link], Salmonella, Shighella y
Campylobacter
Se recomienda efectuar coprocultivo cuando se
presenta:
Diarrea en un paciente con factores de
riesgo especiales
Estudio de brotes de gastroenteritis
Estudios epidemiológicos
PROCEDIMIENTO
MATERIALES
Muestra sólida: 1 a 2 gr.
Muestra líquida: 5 a 10 ml.
1) Heces
2) Hisopo
3) Pipeta
4) Mechero
5) Asa y aguja de inoculación
6) Caldo de tetrationato con 2
gotas de yodo.
7) Agares S.S., bismuto y
Kligler.
PROCEDIMIENTO
Primer día
En un tubo de caldo de tetrationato Se adiciona 2 gotas de yodo al 30% con el objeto
efectuamos una primera siembra de una de inhibir la flora Gram (+).
porción de heces con el asa de inoculación
SIEMBRA POR DILUCIÓN
24 HORAS
37°C
PROCEDIMIENTO
Primer día
Se efectúa una siembra en estría sobre el Se coloca 5cc. de suspensión en una caja de Petri
Agar Bismuto sulfito, para luego de una vacía. Luego ponemos 10cc. de Agar Bismuto
incubación de 48 horas y a 37°C. fundido y enfriado a 45 °C y mezclamos, se incuba
Obtener un aislamiento bacteriano por a 48 horas y a 37°C. Obtener un aislamiento
diseminación. bacteriano por dilución.
DISEMINACIÓN
SUSPENSIÓN
BACTERIANA
48 HORAS
37°C
AGAR BISMUTO
DILUCIÓN
PROCEDIMIENTO
Segundo día
Una vez incubado el caldo de Tetrationato, lo sacamos y efectuamos con el asa de inoculación,
tomando una gota y hacemos una resiembra en el Agar SS. Con el fin de aislar colonias por
diseminación. El Agar S.S. lo incubamos durante 24 horas y a 37 °C. Se obtendrá la salmonela
shigella.
PROCEDIMIENTO
Tercer día
1) Sacamos los 3 cultivos ya incubados y con el asa de inoculación, hacemos una resiembra en el
agar.
2) Se hace 3 resiembras por cada cultivo que tengamos, dándonos así al final 9 agar kliger.
4) Lo mandamos a incubar por 24 horas a 37°c.
PROCEDIMIENTO
Cuarto día
Se realizará la interpretación de los resultados. Se realiza la lectura e interpretación de
resultados en el Agar Kligler, la cual nos dará un diagnóstico presuntivo de la Enterobacteria
responsable del cuadro infeccioso.
Fondo Superficie
Posible Posible
Eschericha coli Alcaligenes
Fecalis
Ácido Ácido
Sin inocular Posible Shigella Alcalino Alcalino
Gas de
SH2 fermentación
Presencia Burbujas
(negro)
MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS PARA REALIZAR
COPROCULTIVO
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
Caldo con tetrationato Caldo con selenito
(Mueller y Kauffmann) (Leifson)
MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS PARA REALIZAR
COPROCULTIVO
MEDIOS SELECTIVOS
AGAR XLD
AGAR SS AGAR MACCONKEY ( XILOSA-LISINA- DESOXICOLATO)
AGAR KLIGLER MODIFICADO
También conocido como TSI ( Triple
Sugar Iron), medio selectivo y
diferencial . Contiene 3 azúcares: lactosa,
Variante modificada en 1920 sacarosa y glucosa
Posee un indicador de pH, sustrato de
hierro y tiosulfato de sodio
La interpretación de los resultados se
basan en cambios en el color del
medio y en la producción de gas y
ácido
AGAR KLIGLER MODIFICADO
FUNDAMENTO
Peptona de carne y tripteína
Lactosa y glucosa
Tiosulfato
Rojo fenol
Cloruro de sodio
Agar
AGAR KLIGLER MODIFICADO
Interpretación de resultados
PROCEDIMIENTO
/ profundidad
Superficie Alcalina
Se siembra con aguja de ácida
inoculación superfice ácida/ profundidad ácida
Incubar en aerobiosis a 33 - 37 ° C superfice Alcalina / profundidad
Alcalina
durante 18 -24 horas
presencia de burbujas
Ennegrecimiento
Limitaciones
Lectura de resultados antes de las 24h
Lectura de resultados posteriores a las 24h
Generación elevada de SH2
MICROSCOPIA DE BACILO G+ ESPORULADOS Y NO ESPORULADOS
ESPORULADOS
La tinción de Gram en bacilos gram positivos
esporulados permite visualizar tanto las
características de la célula bacteriana en sí, como
la retención del colorante primario, como
también las características distintivas de las
esporas..
El género bacteriano más representativo de los
bacilos gram positivos esporulados son:
1. Bacillus anthracis
2. Bacillus cereus
3. Bacillus subtilis
BACILOS GRAM POSITIVOS
No esporulados
Forma alargada
Color púrpura por la tinción de Gram
No presentan una membrana externa
Entre los bacilos gram positivos no esporulados más
comunes se encuentran los géneros :
1. Lactobacillus
2. Corynebacterium
3. Propionibacterium
4. Gardnerella
AGAR BISMUTO SULFITO
Modificación del Wilson Blair Medium
Medio de rutina para la detección de la
mayoría de Salmonella
almacenamiento debe de ser a una
tempertaura entre 2°C- 25°C.
Composición
Extracto de carne 5,0 g
Digerido pancreático de caseína 5,0 g
Digerido péptico de tejido animal 5,0 g
Dextrosa 5,0 g Fosfato de sodio 4,0 g
Sulfato ferroso 300,0 mg
Indicador de sulfito de bismuto 8,0 g
Agar 20,0 g
Verde brillante 25,0 mg
Agua destilada 1.000 mL
pH final 7,6 ± 0,2
AGAR BISMUTO SULFITO
El BSA contiene varios componentes clave que le confieren su
selectividad y diferenciación. Estos incluyen:
1. Sulfato de hierro y citrato de sodio
2. Sulfito de bismuto
3. Lactosa y sacarosa
Uso
Inocular el Agar de Sulfito de Bismuto rayando la superficie para obtener
colonias aisladas
Todas las placas se incuban entre 40 y 48 horas a 35± °C.
Las placas solidificadas deben tener una apariencia uniforme
se mantiene en refrigeración
AGAR BISMUTO SULFITO
POSITIVO PARA SALMONELLA
La salmonella normalmente aparece como colonias negras rodeadas por un
halo de brillo metálico que surgen debido a la producción de sulfuro de
hidrógeno y a la reducción del sulfito a sulfuro férrico de color negro
